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外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆
被引量:
1
1
作者
谢昌传
梁耀极
洪丽欣
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期106-113,共8页
DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制...
DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。
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关键词
外切核酸酶Ⅲ
3'-5'核酸外切酶活性
DNA分子克隆
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职称材料
利用P因子不精确剪切获得Tis11基因敲除果蝇
2
作者
谢昌传
汪雪坤
+4 位作者
李立胜
田丽丽
吴秀榕
洪丽欣
周化民
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期857-862,共6页
Tis11是哺乳动物基因TTP在果蝇中的同源物,其基因位于果蝇X染色体11B9区.它含有两个保守的顺式Cys-X8-Cys-X5-Cys-X3-His(CCCH)锌指结构.它与mRNA的稳定性有关.为了进一步从动物水平研究Tis11的生物学功能,作者利用P因子不精确剪切的特...
Tis11是哺乳动物基因TTP在果蝇中的同源物,其基因位于果蝇X染色体11B9区.它含有两个保守的顺式Cys-X8-Cys-X5-Cys-X3-His(CCCH)锌指结构.它与mRNA的稳定性有关.为了进一步从动物水平研究Tis11的生物学功能,作者利用P因子不精确剪切的特性来获得Tis11基因敲除果蝇.以P因子插入果蝇19949为起始材料,经过一系列杂交后,挑取了700株P因子被切除的果蝇.通过PCR筛选和鉴定,从这700株果蝇中获得一株果蝇279,它的Tis11基因的第2个外显子中包括翻译起始位点的区域被删除.
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关键词
果蝇
P因子
不精确剪切
Tis11
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职称材料
ZF—4型造气炉炉况监测与优化系统在我厂的应用
3
作者
谢昌传
《全国造气技术通讯》
2000年第1期14-15,共2页
关键词
造气炉
炉况监测
优化系统
化肥厂
原文传递
题名
外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆
被引量:
1
1
作者
谢昌传
梁耀极
洪丽欣
机构
厦门大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期106-113,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.81402285)资助~~
文摘
DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。
关键词
外切核酸酶Ⅲ
3'-5'核酸外切酶活性
DNA分子克隆
Keywords
exonuclease Ⅲ
3'-5' exonuclease activity
DNA molecular cloning
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
利用P因子不精确剪切获得Tis11基因敲除果蝇
2
作者
谢昌传
汪雪坤
李立胜
田丽丽
吴秀榕
洪丽欣
周化民
机构
厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
出处
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期857-862,共6页
基金
国家自然科学基金(30670442)资助
文摘
Tis11是哺乳动物基因TTP在果蝇中的同源物,其基因位于果蝇X染色体11B9区.它含有两个保守的顺式Cys-X8-Cys-X5-Cys-X3-His(CCCH)锌指结构.它与mRNA的稳定性有关.为了进一步从动物水平研究Tis11的生物学功能,作者利用P因子不精确剪切的特性来获得Tis11基因敲除果蝇.以P因子插入果蝇19949为起始材料,经过一系列杂交后,挑取了700株P因子被切除的果蝇.通过PCR筛选和鉴定,从这700株果蝇中获得一株果蝇279,它的Tis11基因的第2个外显子中包括翻译起始位点的区域被删除.
关键词
果蝇
P因子
不精确剪切
Tis11
Keywords
Drosophila
P-element
imprecise excision
Tis11
分类号
Q356.1 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
ZF—4型造气炉炉况监测与优化系统在我厂的应用
3
作者
谢昌传
机构
重庆市梁平县化肥厂
出处
《全国造气技术通讯》
2000年第1期14-15,共2页
关键词
造气炉
炉况监测
优化系统
化肥厂
分类号
TQ440.5 [化学工程—化学肥料工业]
TQ113.254 [化学工程—无机化工]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆
谢昌传
梁耀极
洪丽欣
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
利用P因子不精确剪切获得Tis11基因敲除果蝇
谢昌传
汪雪坤
李立胜
田丽丽
吴秀榕
洪丽欣
周化民
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
下载PDF
职称材料
3
ZF—4型造气炉炉况监测与优化系统在我厂的应用
谢昌传
《全国造气技术通讯》
2000
0
原文传递
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