IL-12通过AKT／mTOR／STAT3信号通路诱导肝癌细胞自噬

目的探讨白细胞介素12(IL-12)对Hep G2和SMMC-7721肝癌细胞自噬的影响及其可能的作用机制。方法 10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞6 h,通过Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3)和Beclin 1以及相关信号通路蛋白:蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)磷酸化水平的变化,免疫荧光技术及透射电镜观察细胞自噬的发生情况;使用STATTIC或si STAT3抑制STAT3的活性以及胰岛素样生长因子1(IGF-1)活化AKT之后,再次观察IL-12诱导细胞自噬的变化情况。10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测细胞的增殖;10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞48 h,台盼蓝染色检测细胞死亡率;利用小干扰RNA(siRNA)沉默Beclin 1基因抑制自噬后,再次用CCK-8法和台盼蓝染色法检测IL-12对肝癌细胞增殖和死亡的影响。结果 IL-12能够诱导肝癌细胞发生自噬,抑制其增殖,降低其存活率;siRNA沉默Beclin 1基因后,细胞存活率降低;IL-12处理后p-AKT、p-m TOR、p-STAT3水平都显著降低;STATTIC预处理可增强IL-12诱导的细胞自噬,而IGF-1预处理后,IL-12诱导的细胞自噬减弱。结论 IL-12通过抑制AKT/m TOR/STAT3信号通路来诱导Hep G2和SMMC-7721肝癌细胞发生自噬,该自噬可减弱IL-12抑制肝癌增殖的能力。

IRF1对M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应的影响

目的研究IRF1对M1巨噬细胞极化及M1介导的抗肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建单核细胞U937来源M1巨噬细胞模型(U937-M1),将细胞分为4组:用PMA诱导的未活化巨噬细胞组(M0),用PMA,IFN-γ和LPS处理的M1型巨噬细胞组(M1),用siRNA干扰IRF1的M1型巨噬细胞组(si IRF1)以及阴性干扰的M1型巨噬细胞组(si C)。用流式细胞术检测M1/M2特异表面标志物CD86/CD206的表达;q PCR检测M1/M2相关基因(IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α/IL-10)及IFNB1的表达;ELISA检测IL-12p70,IL-10及IFN-β的表达;Western blot检测IRF1及IRF5的表达;CCK8和流式细胞术分别检测Hep G2及SMMC-7721增殖和凋亡。结果与U937-M1组相比,干扰IRF的M1组CD86表达降低,但CD206升高(P<0.05);mRNA水平上,IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α以及IFNB1表达降低,但IL-10表达增高(P<0.01);蛋白水平上,IL-12p70,IFN-β及IRF5表达降低,但IL-10表达增高(P<0.05)。IRF1干扰后,M1巨噬细胞促进肝癌细胞增殖、抑制其凋亡(P<0.05)。结论干扰IRF1后,M1巨噬细胞极化状态受损,甚至部分向M2型转变;其抗肿瘤效应转变为促肿瘤效应;且IRF1可能参与调节IFN-β与IRF5的表达。

内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭

目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。

流动注射化学发光法测定奈替米星

目的建立流动注射化学发光法测定血浆中奈替米星的方法。方法在碱性介质中,奈替米星对铁氰化钾与鲁米诺化学发光体系具有明显的增敏作用,据此建立了一种测定奈替米星的流动注射化学发光新方法,对分析条件进行优化。通过方法学评价及对血浆奈替米星的测定,观察建立方法的性能。结果优化后的最佳检测条件是:鲁米诺浓度为10μmol/L,铁氰化钾的浓度为30μmol/L,Na OH的浓度为0.10mol/L,采样时间为5s,泵速为30r/min,负高压为630V。在确定的最佳实验条件下,化学发光增加强度与奈替米星的浓度在1.0×10^(-6)~5.0×10^(-5)g/m L范围内呈良好的线性关系,检测限为9.2×10^(-7)g/m L。对含3.6×10^(-6)g/m L奈替米星的溶液平行测定11次,测定结果的相对标准偏差为2.3%。结论本方法分析速度快、灵敏度高、分析成本低,可用于血浆中奈替米星的测定。

肝细胞生长因子通过上调环氧合酶2表达增强乳腺癌细胞的侵袭能力

目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响,以及该作用机制是否与调控环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)基因表达有关。方法:用30μg/m L的重组人HGF(recombinant human HGF,rh HGF)处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞6 h,采用蛋白质印迹法检测HGF受体c-Met及磷酸化c-Met的表达。用不同质量浓度的rh HGF分别处理2种乳腺癌细胞16 h,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。用不同质量浓度的rh HGF分别处理2种乳腺癌细胞不同时间,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测COX2 m RNA和蛋白表达水平的变化。将携带针对COX2基因的特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)的重组质粒psh RNA-COX2分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,同时用COX2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)处理作为阳性对照,然后采用Transwell实验检测沉默COX2基因表达后rh HGF对2种乳腺癌细胞侵袭能力的影响,采用蛋白质印迹法检测COX2和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达的改变。结果:MDA-MB-231和MCF-7细胞都能表达HGF受体c-Met,而rh HGF能诱导c-Met磷酸化,提示2种乳腺癌细胞均存在HGF作用靶点。与未处理组相比,rh HGF处理后乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7细胞的侵袭能力明显增强(P值均<0.05),COX2 m RNA及蛋白的表达水平明显升高(P值均<0.05),且呈时间和剂量依赖性。而psh RNA-COX2沉默COX 2基因表达或者celecoxib处理后,rh HGF诱导的乳腺癌细胞的侵袭能力明显减弱(P<0.05),COX2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P值均<0.05)。结论 :HGF可通过上调乳腺癌细胞中COX2和MMP-9的表达,增强乳腺癌细胞的侵袭能力。

多发性骨髓瘤合并慢性淋巴细胞白血病1例的诊疗并文献复习

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)合并慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者的临床、实验室检查特点及诊疗方法, 并且进行相关文献复习。方法选择2020年5月15日, 璧山区人民医院血液科收治的1例68岁女性MM合并CLL患者为研究对象。根据患者临床表现, 胸、腹部CT, 免疫球蛋白(Ig)定量, 血清免疫固定电泳, 骨髓细胞形态学、免疫分型及MYD-88基因测序检测结果, 对其进行诊断。采用BLD(硼替佐米2.1 mg/d, d1、4、8、11+来那度胺25 mg/d, d1~14+地塞米松20 mg/d, d1、2、4、5、8、9、11、12)方案对患者进行3个疗程化疗。对患者的随访截至2022年6月26日。采用回顾性分析方法, 对患者的临床表现与诊疗过程进行分析。以"多发性骨髓瘤""慢性淋巴细胞白血病""多发性骨髓瘤合并慢性淋巴细胞白血病""慢性淋巴细胞白血病合并多发性骨髓瘤""multiple myeloma""chronic lymphocytic leukemia""concomitant chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma""multiple myeloma combined chronic lymphocytic leukemia""coexistence of multiple myeloma and chronic lymphocytic leukemia"为中、英文检索词, 在万方数据知识服务平台、中华医学期刊网、中国知网数据库及PubMed数据库中, 检索MM合并CLL研究的相关文献。检索时间为以上数据库建库至2021年12月31日。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。结果①本例患者因"左侧肩胛区伴左上肢牵扯痛5个月, 加重1个月"入院。入院后, 患者胸、腹部CT, 骨髓细胞形态学, Ig定量及血清免疫固定电泳检查结果示, 其肋骨、胸椎、髂骨、腰骶椎均有不同程度的破坏, 异常浆细胞、淋巴细胞比例增高(15%、62%), 血清M蛋白值为23.80 g/L, 尿M蛋白值为65.04 mg/24 h, 血清中检出IgG-κ型异常单克隆条带。根据上述结果, 本例患者被诊断为MM。患者骨髓细胞免疫分型结果示, 异常单克隆成熟小B淋巴细胞比例为32.76%, 表达CD19、CD79bdim、CD5、FMC-7dim, 部分表达CD23, 不表达IgM;CLL/小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)积分为4~5分;异常单克隆浆细胞比例为0.24%, 表达CD138、CD38、CD56、CD200、CD81、CD319、CD117、IgM、cKappa。7月10日, 采用PCR-Sangers测序法对患者MYD-88基因exon5(p.260-309)区域进行检测的结果为野生型。根据临床表现及相关检查结果, 本例患者诊断为MM合并CLL。②患者分别于5月26日、6月15日、7月6日, 接受BLD方案化疗。每个疗程化疗后患者左肩胛骨痛均有缓解。6月22日、7月8日骨髓细胞形态学检查结果示, 异常浆细胞比例均降低(5%、2%), 淋巴细胞比例亦降低(50%、42%)。随访期间, 患者病情控制良好。③根据本研究设定的文献检索策略, 共检索出8篇MM合并CLL文献, 报道9例MM合并CLL患者, 加上本研究1例, 共纳入10例MM合并CLL患者。其中, 6例患者CT检查可见病理性骨折、多发性骨破坏等;9例外周血或骨髓中淋巴细胞比例升高, 10例骨髓中可见不同分化程度的浆细胞;4例血清蛋白电泳可见M蛋白峰, 2例尿本周氏蛋白呈阳性;5例免疫固定电泳结果示IgG-κ型。骨髓细胞免疫分型检查可见骨髓淋巴细胞表达CD19、CD5、CD23、CD38、CD138、CD56等。采用的治疗方案包括BLD、Rd(来那度胺+地塞米松)、MPV(美法仑+泼尼松+硼替佐米)、COP(环磷酰胺+长春新碱+泼尼松)方案等。接受化疗后, 3例患者死于感染, 2例死于呼吸衰竭等。结论 MM合并CLL罕见, 应结合患者临床特征及实验室检查结果进行诊断, 避免漏诊。治疗以化疗为主, 但是疗效不佳。