猪伪狂犬病毒荧光重组酶介导核酸扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立一种猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列,设计特异性引物及探针,优化扩增体系,建立PRV荧光重组酶介导核酸扩增检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,应用该方法对临床样品进行检测。【结果】该方法在43℃恒温反应23 min即可完成PRV核酸扩增,最低检出限为111 copies·μL^(-1);与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcinerotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)均无交叉反应。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;40份临床样品检测结果显示PRV阳性率为15%(6/40),检测结果与常规聚合酶链式反应(PCR)一致。【结论】成功建立了简便快速、高效准确的PRV实时荧光RAA检测方法,为PRV的快速检测和流行病学调查提供了新的检测手段。

基于3D激光扫描技术的粗集料三维形态特征分析

为了能够建立精确的沥青混合料细观力学模型、优化混合料性能,需要先构建具有真实形态学特征的集料模型并计算分析集料形态参数,利用3D激光扫描技术采集了辉绿岩、石灰岩、玄武岩与卵石4种集料共500颗样本的三维点云数据,通过球谐函数简化集料模型,建立了三维集料样本库。归纳总结了现有集料的形态指标,通过皮尔逊相关性分析,选取F_(I)、A_(I)定量表征粗集料三维形态特征,对不同种类以及粒径集料的F_(I)、A_(I)进行统计分析。研究结果显示:当球谐序列阶数为10,三角形映射网格数为643时,简化后集料模型基本形状、体积与表面积均与真实集料非常接近;集料的F_(I)、A_(I)服从正态分布与对数正态分布,且随集料类型和粒径的变化而变化。

猪源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性、耐药等相关检测。结果显示,分离菌为猪源葡萄球菌。该菌对30种常用抗菌药物中的苯唑西林、诺氟沙星、头孢类等14种药物高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、四环素、万古霉素、氟苯尼考5种药物中度敏感,对氨苄西林、哌拉西林、卡那霉素等11种药物不敏感,检测cfr、tetM、floR、mcr-1、bla NDM-1、optrA 6种耐药基因均为阴性;该菌对26种中药中的单宁酸高度敏感,对五味子、五信子多酚中度敏感,对叶下珠、厚朴、虎杖低度敏感,对半边莲、铁苋菜、艾叶、重楼等20种中药不敏感;在8种消毒剂中,84消毒液对该分离菌的消杀效果差,新洁尔灭、月苄三甲氯铵、复合酚3种消毒剂对该分离菌消杀效果好;动物攻毒试验表明,该菌对25日龄健康断奶仔猪具有强致病性,能导致猪出现典型的葡萄球菌病临床症状和病理特征,攻菌猪组织病理可见脾脏红髓淤血、肺泡腔内见红细胞渗出及少量粉染的渗出物。研究结果可为在养殖饲料端禁止添加抗生素的背景下,为猪葡萄球菌病的防治提供理论参考和技术支撑。

蒲石河电站水泵水轮机转轮S特性优化研究

针对蒲石河抽水蓄能电站机组启动和甩负荷时水泵水轮机转轮S特性诱发的厂房振动问题,本文基于CFD数值仿真计算和模型试验对机组原9叶片转轮的S特性进行了分析研究,发现在S区工况运行时原转轮进口存在回流区,产成较大的水力损失,从而造成转轮的通流能力下降。基于此发现,本研究提出将9叶片转轮改为7叶片转轮的优化方案。通过对比CFD仿真结果及试验验证,新方案的转轮进口回流现象得到调整,从而有效改善了转轮“S”特性,解决了厂房振动的源头问题。实际工程的应用证明新方案起到了很好的效果,本方案思路可为同类型电站类似问题解决及老旧抽水蓄能电站改造提供参考借鉴。

超声波提取大豆异黄酮

利用超声波提取脱脂豆粕中的大豆异黄酮 ,并与加热回流的提取方法进行比较。结果表明 ,超声波法提取大豆异黄酮具有省时、节能、提取率高等优点 ,提取一次 ,30min所得大豆异黄酮的提取率比加热回流法提取 12 0min的提取率高约 4 6 % ,与加热回流提取二次 ,2 4 0min的提取率一致。

大豆异黄酮生理功能的研究进展

大豆异黄酮因具有明显的生物学活性已越来越引起社会和学术界的普遍关注,是近年来科学家研究的热点。研究表明,大豆异黄酮与人类健康密切相关,具有许多生理功能,如抗肿瘤作用、对血管的防护作用、抗氧化活性、类似女性雌激素作用以及抗激素作用等。文中阐述了大豆异黄酮生理功能的研究进展。

大豆异黄酮的抑菌作用

以从脱脂豆粕中提取的总大豆异黄酮为实验材料研究其抑菌作用 ,实验结果表明 ,大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、单增李氏菌、白色念珠菌、梨头霉菌和米曲霉均有明显的抑制作用 ,其最低抑细菌浓度 (MIC)分别为 0 .0 3%、0 .0 9%、0 .0 2 %、0 .0 3%、0 .0 3%、0 .0 5 %、0 .0 5 %、0 .0 5 %和 0 .0 5 % ,但对大肠杆菌和酿酒酵母无抑制作用。用本实验室开发的大豆异黄酮糖苷酶将提取的总大豆异黄酮进行酶解 ,并将酶解后的产物进行分离纯化 ,得到游离型的苷元。游离型苷元和结合型糖苷的抑菌结果显示 ,大豆异黄酮中具有抑菌活性的成分是其游离型的苷元。其热稳定性好 ,经 1 2 1℃。

酶法水解大豆异黄酮

利用Absidiasp R菌株 ,通过液体发酵 ,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖苷水解酶 ,该酶水解糖苷型大豆异黄酮的最适底物浓度为 7 5mg/mL ;最适反应时间为 1 5h ;该酶在温度为 2 0～5 0℃、pH为 4 0～ 7 0范围内相对稳定 ,最适酶解反应温度为 40℃ ,最适pH值为 5 0 ;金属离子对该酶活力的影响不显著 ,其中Co2 +、Zn2 +对该酶有激活作用 ,Ag+、Cu2 +对该酶有抑制作用 ,Fe3+浓度<5 0mmol/L时 ,对该酶有促进作用 ,当离子浓度 >5 0mmol/L时 ,则有抑制作用。利用实验获得的最适酶解条件反应 ,可使染料木苷生成染料木素的转化率达到 1 0 0 %。

我国微生物肥料的研究进展及发展趋势

面对世界范围内“第二次绿色革命”、“持续性农业”日益强烈的趋势，中国农业如何避免重蹈发达国家“先污染、破坏，后治理”的复辙，是摆在我们面前的严峻课题，而微生物肥料由于具有肥效高、本身无毒无害、不污染环境且成本低、可节约能源等特点，它的大面积推广和应用，将是解决上述问题的有效措施之一。

高产大豆异黄酮糖苷水解酶菌株的发酵工艺研究

Absidia sp.R是从酒曲中分离出的一株产大豆异黄酮糖苷水解酶活性较高的菌株。该菌最佳产酶条件为:2.5％的麦麸为碳源,1％的硝酸钠为氮源,培养基起始pH为7.0,瓶装量为40mL/250mL,接种量8％,培养温度为30℃,转数为160r/min,培养时间为84h,其酶活力可达到82U/mL。除Cu2+对该菌产酶有较强的抑制作用外,金属离子对产酶影响不大。

酸法水解大豆异黄酮的研究

采用酸法将糖苷型大豆异黄酮水解成其苷元形式。通过正交实验得到盐酸水解大豆异黄酮的最佳反应条件为 :盐酸浓度为6mol·L-1,酸解时间为3h;酸解温度50℃ ,盐酸体积与原料比为4∶1。利用本实验获得的最适酸解条件反应 。

微生物综合设计性实验的组织与实施

开设综合设计性实验是提高学生实践技能、培养学生创新能力的有效途径。通过对综合性、设计性实验开设的题目、具体组织、实施环节及其考核评价等方面的探讨,构建了微生物综合设计性实验的组织实施策略。实践证明,该策略在培养学生分析问题和解决问题的能力、创新思维和团队精神等方面起到了积极的促进作用。

强化微生物发酵工程实践教学 培养学生创新能力

强化微生物发酵工程的实践教学,必须突破原有实验教学的封闭状态,把学生置于一种动态、开放、主动、多元的学习环境中,充分突出学生的主体作用,加强针对性、注重应用性,突出创新性。

脱脂豆粕中提取大豆异黄酮的条件研究

通过溶剂对比实验及单因素实验和正交实验,确定了从脱脂豆粕中提取大豆异黄酮的最佳提取溶剂及最佳提取条件.最佳提取条件为:乙醇浓度60%,提取温度70℃,物料比1∶18,提取时间2h,提取次数2次.采用该方法从脱脂豆粕中提取大豆异黄酮的提取率为0.45%.

发展我国微生物肥料的对策研究

我国是一个农业大国 ,农业是国民经济的基础 ,发展农业生产历来具有战略意义 .但人们往往在获取最大的短期经济效益的同时忽视了以保护资源和环境为目标的社会效益和生态效益 .面对世界范围内进行的“第二次绿色革命”和“可持续性农业发展”日益强烈的趋势 ,中国农业如何避免重蹈发达国家“先污染、破坏 ,后治理”的覆辙 ,是摆在我们面前的严峻课题 .

微生物杀虫剂应用的研究进展

综述了国内外微生物杀虫剂的研究、应用情况，展望了其发展前景．对细菌杀虫剂、真菌杀虫剂和病毒杀虫剂的研究、应用及进展情况进行了重点阐述．

实验室常用消毒剂杀菌效果研究

通过对目前实验室常用的消毒剂抑菌作用的比较实验,确定了过氧乙酸为实验室抑菌效果较好的消毒剂.实验结果显示,用含0.03%过氧乙酸消毒剂溶液对大肠杆菌作用1 min,对金黄色葡萄球菌作用1 min,杀菌率为100%.用含0.04%过氧乙酸消毒剂作用10 min,室内台面自然菌比对照组减少94.21%.

食用菌的保鲜贮藏

近年来,我国食用菌的生产发展迅速,目前正在发展成为继植物性、动物性食品之外的第三类食品———菌物性食品.但由于食用菌具有含水量高、组织脆嫩,在采收和贮运过程中极易造成损伤,引起变色、变质或腐烂等特点,因此如何推行实用型的食用菌保鲜贮藏和加工技术已成为食用菌生产发展的一个重要课题.主要介绍几种常用的食用菌保鲜技术.

噬菌体脱毒机理的研究Ⅰ

用噬菌体处理河流弧菌Ⅱ的时间不同，细菌菌落的透明度和超微结构也不一样。在吸附后７ｈ开始菌落出现透明度的变化，首先是不透明（乳黄色）的菌落占绝对优势，但已出现半透明和透明菌落，培养到４８ｈ时，几乎全部变为透明菌落。透明菌落不再能与其噬菌体吸附而产生噬斑，也不会再感染鲍而产生脓疱病。透射电镜观察发现，透明菌落的菌细胞形状和结构大都发生变化。细胞壁薄，细胞质浓缩集中在细胞的一侧或一端。不透明菌落细胞形状正常，细胞壁完整，细胞质外延使细胞横切面呈指环状。电镜观察不同时间取样发现，１号样品细胞结构无明显变化。２号样品多数细胞产生外膜泡。３号样品许多细胞结构与１号相似，但在一些细胞的附近出现成簇的外膜泡和噬菌体。４号样品细胞结构变化较大，细菌的核区被破坏，在细胞的周围发现许多噬菌体。５号样中发现许多菌细胞被破坏，也在一些细胞内发现噬菌体。６号样中透明菌落和不透明菌落细胞结构变化明显。７号样几乎所有菌落都变为透明状，许多细胞破裂等。

BS01菌株降解石蜡产生物表面活性剂的研究

从辽河油田排气池水样中分离出一株能降解石蜡产生物表面活性剂的杆菌BS01菌株。根据传统分类和系列鉴定，该菌为铜绿假单胞菌。用通过正交试验得到的最佳培养基进行摇瓶培养，6d后，培养液的表面张力降低了12mN/m,pH降低了2～3个单位。经氨基酸自动分析仪和气象色谱测定，培养液中含有多种氨基酸和少量脂肪酸。培养液用正已烷多次萃取后，有机相经紫外分光光度计测定，石蜡降解率为69％。