云南省部分地区牛的3种肠道原虫分子检测与鉴定

为了解云南省大理市和楚雄市规模化养殖场奶牛和肉牛的十二指肠贾第虫、芽囊原虫和毕氏肠微孢子虫的感染情况,随机采集该省两市规模化肉牛、奶牛养殖场牛新鲜粪样140份,通过PCR及DNA测序分析了贾第虫、芽囊原虫和毕氏肠微孢子虫的阳性率及基因型。结果显示,贾第虫有11份样品呈阳性,阳性率为7.86%。贾第虫基因型共鉴定出2种集聚体,集聚体E(n=10)为优势集聚体,有1份为集聚体A阳性的样品;芽囊原虫鉴定出ST5、ST10和ST14共3种基因型,ST10(n=28)为优势基因型,ST5检出6份,ST14检出3份;毕氏肠微孢子虫检出12份呈阳性,阳性率为8.57%,毕氏肠微孢子虫阳性样品中共鉴定出2种基因型,其中仅在奶牛场中检测到J型(n=1),BEB4型(n=11)仅在肉牛场中被检出。调查结果表明,贾第虫、芽囊原虫和毕氏肠微孢子虫在这些地区存在流行,可能对当地人畜健康存在潜在风险,应当加强牛肠道寄生原虫的防控。

玉溪霍尔多巴吉鹅感染贝氏隐孢子虫的分子鉴定

为了对云南省玉溪市某养殖场的霍尔多巴吉鹅进行隐孢子虫检测,本试验采集疑似感染隐孢子虫的霍尔多巴吉鹅的粪便样品,利用饱和盐水漂浮法进行镜检,并结合分子生物学鉴定方法,提取粪便样品DNA,采用巢氏PCR扩增隐孢子虫核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因,测序后通过NCBI进行Blast在线比对,构建系统发育进化树。结果显示,所采集的鹅粪便样品中,隐孢子虫检出率为20.45%(9/44);隐孢子虫SSU rRNA基因的PCR扩增结果显示,该鹅源隐孢子虫与贝氏隐孢子虫同源性达100%;系统进化分析显示,二者位于同一分支。结果表明,该养殖场的霍尔多巴吉鹅存在贝氏隐孢子虫感染。

滇金丝猴尖尾食道口线虫的鉴定

云南某动物园发现滇金丝猴肠道线虫感染严重,为进一步确诊感染虫种,通过形态学和PCR方法对其线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列进行扩增、测序和分析,并利用MEGA6.0软件构建遗传系统进化树,分析其种系发育关系。结果显示,该滇金丝猴虫体样本形态学鉴定结果为食道口线虫,扩增所获得的线虫分离株其cox 1序列长度为442 bp,与尖尾食道口线虫(Oesophagostomum aculeatum)相似度高达99.74%,表明滇金丝猴体内分离的线虫样本为尖尾食道口线虫。

云南部分地区家畜寄生蜱携带病原情况调查

为了解云南省部分地区家畜寄生蜱的携带病原(贝氏柯克斯体、伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体)情况,从云南玉溪市、昆明市、楚雄市、普洱市的牛、羊体表收集455只蜱,形态学及分子生物学鉴定为微小扇头蜱,通过贝氏柯克斯体ComⅠ基因、伯氏疏螺旋体5S-23S rRNA基因、回归热螺旋体16S rRNA基因对这些蜱传病原进行检测,并对阳性扩增产物进行测序、序列比对,并构建进化树。结果发现检测到47份蜱虫样品呈贝氏柯克斯体阳性,2份蜱虫样品呈回归热螺旋体阳性,序列比对发现检测到的回归热螺旋体与色勒疏螺旋体序列高度一致,但未检测到伯氏疏螺旋体。发现云南省贝氏柯克斯体呈散发流行状态,首次在云南发现并报道了色勒疏螺旋体的存在和传播。

滇金丝猴毛首线虫分子鉴定及其ITS序列分析

为了解从滇金丝猴(Rhinopithecus bieti)消化道检获的线虫种属关系,对虫体进行形态学鉴定、PCR扩增虫体ITS基因序列、测序分析,并利用MEGA 6.0软件构建遗传系统进化树。结果显示:检获虫体与毛首线虫(Trichuris sp.)相似度为99.05%,滇金丝猴所感染虫体为毛首线虫。进化树结果显示样品与人感染的毛首鞭形线虫(Trichuris trichura)亲缘关系较近,表明二者为近缘种,具有人兽共患风险,这可为灵长类动物毛首线虫的鉴别诊断、种群结构等更深入地研究提供理论依据。

云南部分地区牛羊体表寄生蜱的形态及分子鉴定

为了解云南部分地区牛羊体表寄生蜱的种类,对云南6个地区采集的445只蜱的形态进行观察,并采用PCR技术对虫体的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(coxⅠ)基因序列进行扩增,于NCBI-BLAST在线比对有效序列,利用MEGA 6.0软件构建系统进化树。结果显示:经形态学特征初步鉴定,采集的蜱属为扇头蜱属(Rhipicephalus)。coxⅠ基因序列比对分析显示,研究中所获分离株与微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus)同源性达100%,系统进化分析显示分离株与微小扇头蜱处于同一分支。本研究可为云南牛羊体表寄生蜱的种类鉴定和防治提供参考。

非洲鸵鸟源芽囊原虫基因型鉴定及分析

芽囊原虫是一种呈世界性分布的常见机会致病性原虫,为鉴定云南某非洲鸵鸟养殖专业合作社芽囊原虫感染情况及其基因型,对采集的90份鸵鸟粪便样品,通过套式PCR扩增芽囊原虫SSU rRNA基因。结果发现,62份样本为阳性,芽囊原虫感染率为68.89%(62/90);其中,90日龄感染率最高,为86.36%(19/22),60日龄感染率最低,为6.25%(20/32),但不同日龄鸵鸟芽囊原虫的感染率差异不显著(P>0.05,χ^(2)=6.67,df=3);基于SSU rRNA基因的序列分析,鉴定出ST5、ST7及ST20共3种芽囊原虫亚型,ST5为优势亚型。其中,ST5、ST7属人兽共患亚型。研究结果丰富了云南地区养殖非洲鸵鸟感染芽囊原虫的情况背景及基因分型的数据,为芽囊原虫的防控工作提供了参考。

动物园笼养鸽肠道线虫感染情况调查与分析

针对昆明某动物园鸽子病死及感染肠道线虫病情况进行调查,并采取药物治疗分析效果。对送检2只病死鸽检获虫体进行形态学鉴定,并采集园内40份鸽粪样(用药前的14份和用药后的26份)进行寄生虫的检测和鉴定。结果表明:2只病死鸽肠道解剖检获蛔虫161条;驱虫前线虫感染率为57.14%(8/14);采用阿苯达唑驱虫后的肠道线虫感染率为7.7%(2/26)。本次调查发现该动物园观赏鸽死于严重的肠道线虫感染,同时也发现高海拔地区鸽肠道线虫,尤其是蛔虫感染率高低同其所在地域的海拔高度可能存在相关性;从驱虫前后的结果发现,阿苯达唑对治疗肠道线虫感染有极显著效果;对其防治应采取定期肠道寄生虫检测,制定科学防控措施和方案。

云南永善县牛及猪消化道寄生虫感染情况调查

研究旨在了解云南永善县牛及猪消化道寄生虫感染情况。研究于该县5个乡镇分别采集牛粪便样品46份,猪粪便样品41份,采用饱和盐水漂浮法及水洗沉淀法检测线虫虫卵、球虫卵囊及吸虫虫卵。结果显示:87份样品的消化道寄生虫虫卵及卵囊检出率为20.69%(18/87)。46份牛粪样品中线虫虫卵、球虫卵囊及吸虫虫卵的检出率分别为26.08%(12/46)、8.69%(4/46)和4.35%(2/46),检出线虫虫卵和球虫卵囊的混合感染率为6.52%(3/46)。41份猪粪样品中,球虫卵囊检出率为7.32%(3/41),吸虫虫卵检出率为2.44%(1/41),并未发现线虫虫卵。不同乡镇养殖家畜的消化道寄生虫检出率差异显著(P<0.05),不同养殖形式养殖的家畜消化道寄生虫检出率差异显著(P<0.05)。研究表明,永善县牛、猪等家畜的消化道寄生虫感染较为严重,需及时防治。

云南部分地区牛羊寄生蜱媒梨形虫的流行病学研究

为了了解云南省玉溪市、昆明市、楚雄市和普洱市牛羊寄生蜱媒梨形虫的流行情况,试验从上述4个地区牛羊体表共采集455份蜱样本,基于形态学和cox1基因序列对寄生蜱进行物种鉴定,通过扩增梨形虫18S rDNA基因及序列分析对寄生蜱媒梨形虫进行鉴定,并统计不同地区、不同宿主寄生蜱媒梨形虫的阳性率,分析寄生蜱感染巴贝斯虫和泰勒虫的风险因素(所在地区、宿主种类)。结果表明:采集的蜱均为微小扇头蜱。在455份蜱样本中,共鉴定到5株巴贝斯虫,其中4株为双芽巴贝斯虫,1株未定种;共鉴定到60株泰勒虫,其中54株为东方泰勒虫,6株未定种。选取2株双芽巴贝斯虫和4株东方泰勒虫构建遗传进化树,其中双芽巴贝斯虫CX-370和CX-369与双芽巴贝斯虫参考株(GenBank登录号为KY805825.1、AY603402.1)和巴贝斯虫参考株(GenBank登录号为KP410277.1)位于的同一分支,未定种的巴贝斯虫CH-367为独立分支且与上述虫株汇聚为一支,东方泰勒虫PE-423、CJ-374、KM-106和PE-394与东方泰勒虫参考株(GenBank登录号为MH208640.1、MH208639.1、MH208636.1)位于同一分支且与未定种的泰勒虫PE-417、KM-114汇聚为一支,未定种的泰勒虫PE-399、PE-390、PE-420与环形泰勒虫参考株(GenBank登录号为OQ411264.1)位于同一分支。4个地区牛羊寄生蜱媒梨形虫总阳性率为14.29%(65/455),其中巴贝斯虫总阳性率为1.10%(5/455),泰勒虫总阳性率为13.19%(60/455);玉溪市、昆明市、楚雄市和普洱市牛羊寄生蜱媒梨形虫阳性率分别为21.43%(3/14)、18.56%(31/167)、2.08%(4/192)和32.93%(27/82),牛羊寄生蜱媒巴贝斯虫阳性率分别为7.14%(1/14)、0(0/167)、2.08%(4/192)、0(0/82),牛羊寄生蜱媒泰勒虫阳性率分别为14.29%(2/14)、18.56%(31/167)、0(0/192)、32.93%(27/82)。4个地区牛寄生蜱媒梨形虫阳性率为16.89%(63/455),而羊寄生蜱媒梨形虫阳性率为2.44%(2/82);其中牛和羊寄生蜱媒巴贝斯虫阳性率分别为1.34%(5/373)和0(0/82),泰勒虫阳性率分别为15.55%(58/373)和2.44%(2/82)。寄生蜱所在地区不是影响其感染梨形虫的重要风险因素,而寄生蜱宿主种类是影响其感染梨形虫的重要风险因素,牛寄生蜱相对于羊寄生蜱更易感染泰勒虫。说明云南省玉溪市、昆明市、楚雄市和普洱市4个地区牛羊寄生优势蜱种为微小扇头蜱,牛羊寄生蜱存在巴贝斯虫和泰勒虫感染;4个地区中,普洱市的泰勒虫阳性率最高,玉溪市的巴贝斯虫阳性率最高;牛寄生蜱媒泰勒虫阳性率高于羊寄生蜱。

基于gdh基因分析云南牛源十二指肠贾第虫感染情况

【目的】了解云南省牛感染十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)的情况和基因型分布,评估贾第虫病的传播风险。【方法】采用巢式PCR方法基于十二指肠贾第虫的谷氨酸脱氢酶(gdh)基因对云南省3个地区采集的258份牛新鲜粪便样品进行检测,计算不同地区、不同年龄、不同品种牛的十二指肠贾第虫阳性率;对阳性样品进行测序,将测序结果提交至NCBI比对进行基因型鉴定;使用MrBayes 3.1程序进行贝叶斯推理法分析,采用普通时间可逆(general time reversible, GTR)替换模型,构建系统进化树。【结果】258份牛粪便样品中有23份呈十二指肠贾第虫阳性,总阳性率为8.91%(23/258)。其中,不同地区牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),大理鹤庆县阳性率最高,为20.75%(11/53,95%CI=9.47~32.04);西双版纳勐海县和昭通永善县阳性率分别为8.82%(6/68,95%CI=1.91~15.74)、4.38%(6/137,95%CI=0.91~7.85);不同年龄牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),犊牛(<5月龄)阳性率(26.19%,11/42,95%CI=12.32~40.06)极显著高于成年牛(>24月龄)(5.56%,12/216,95%CI=2.48~8.64);不同品种牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),荷斯坦奶牛十二指肠贾第虫阳性率最高,为20.75%(11/53,95%CI=12.00~39.17),黄牛、西杂牛(西门塔尔牛和本地黄牛的杂交品种)、西门塔尔牛阳性率较低,分别为17.86%(5/28,95%CI=2.73~32.98)、4.38%(6/137,95%CI=0.91~7.85)和2.50%(1/40,95%CI=0~7.56)。基于gdh基因序列分析23份十二指肠贾第虫阳性样品集聚体类型均是E型,但为7种不同基因亚型,其中6种亚型(E1、E12、E20、E30、E36和E38)与已知参考序列相似性为99.8%~100%,另一种亚型与未命名亚型参考序列相似性为99.8%。【结论】云南省牛存在十二指肠贾第虫感染,不同地区、不同年龄、不同品种牛的十二指肠贾第虫阳性率存在一定差异;集聚体主要为E型,且此类型在云南地区遗传多样性较高。