精氨酸对猪脂肪细胞脂肪分解的影响

为探究精氨酸对猪脂肪细胞脂肪分解的影响,该研究从仔猪皮下脂肪组织分离、培养前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,分别以终浓度为0(对照)、0.01 mmol/L、0.10 mmol/L和1.00 mmol/L精氨酸处理48 h,MTT法检测细胞活力,油红O染色提取法检测细胞内脂质含量,采用荧光定量PCR检测甘油三酯脂解酶(ATGL)和激素敏感性脂肪酶(HSL)基因的mRNA表达水平。结果表明,0.01~1.00 mmol/L精氨酸对猪脂肪细胞活力无显著影响(P>0.05),但以剂量依赖方式显著降低细胞内脂质含量(P<0.05);1.00 mmol/L精氨酸显著促进脂肪细胞ATGL和HSL mRNA表达(P<0.05)。提示0.01~1.00 mmol/L精氨酸可能通过上调ATGL和HSL表达促进猪脂肪细胞水解。

Txnip基因siRNA慢病毒表达质粒构建及促进猪前体脂肪细胞分化

硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein, Txnip)是一种氧化还原调节蛋白质,与硫氧还蛋白结合并抑制其活性,调节细胞氧化还原状态,影响细胞多种生理过程,然而其在猪脂肪细胞分化中的作用尚不明确。本文设计合成3对靶向猪Txnip基因的shRNA寡核苷酸,分别连接于重组慢病毒载体pGLV_3/H_1/GFP+Puro构建siRNA表达质粒。测序验证后,与包装质粒共转染293T细胞,获得滴度1×10~8 pfu/mL的慢病毒干扰质粒。以MOI值100转染原代培养猪前体脂肪细胞,转染率均达80%以上,其中Txnip-shRNA-2转染细胞Txnip基因沉默率达75%。转染Txnip-shRNA-2的猪前体脂肪细胞用成脂分化培养液诱导后,每隔1 d检测细胞成脂分化及相关基因表达。结果发现,其分化比阴性对照质粒转染或未转染细胞显著增强(P<0.05),PPARγ和FAS mRNA表达水平显著提高(P<0.05)。本文构建siRNA慢病毒表达质粒能有效干扰猪Txnip基因表达,Txnip表达沉默可通过上调PPARγ表达促进猪前体脂肪细胞分化。本研究提示,Txnip可能是猪脂肪细胞分化的抑制因子。