肝病患者血脂检测的临床意义

目的探讨肝病患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apoA1、apoB)的变化情况及其临床意义。方法测定228例肝病患者(其中急性肝炎60例,慢性肝炎53例,肝硬化55例,肝癌60例)TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoA1、apoB的水平,与60例健康人进行对照。结果各种肝病患者的以上各项指标水平较均正常对照组有所下降,其中肝硬化和肝癌患者以上各项指标与正常对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)。结论对肝病患者进行定期的血脂测定,能及时反映体内脂质代谢状况,了解肝脏损害程度,观察病情,估计预后都有重要价值。

血清总胆汁酸测定在肝胆疾病中的应用

目的:探讨血清总胆汁酸(TBA)测定在肝胆疾病诊断中的临床价值。方法:采用酶法测定血清TBA,与传统肝功能指标ALT、AST、GGT、ALP、TB作对比,并对其在肝胆疾病中的应用作探讨。结果:健康对照组的TBA为(4.9±3.0)μmol/L,各类肝胆疾病的TBA均较对照组明显增高(P<0.01),其急性肝炎、肝癌阳性率均为100%,肝硬化为87.5%,慢性肝炎为65.7%,胆道疾病为71.4%。结论:TBA测定是一个良好的肝功能指标,能反映肝实质损伤的一项重要指征。

干湿化学法测定血清葡萄糖结果的比较

目的分析干化学法与湿化学法测定患者血清葡萄糖(GLU)时的偏倚,比较检测结果的可比性。方法依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCLLS)EP9-A文件方案,每天随机选取临床标本8份,分别用两种方法测定样本葡萄糖含量,共测定6天,记录检验结果,去除离散点,计算线性方程和相关系数并进行偏倚估计。结果以湿化学法(X)为对比方法,对干片法(Y)进行评估。干片法(Y)和湿化学法(X)测定GLU的回归方程式为Y=0.9938X-0.10,相关系数γ=0.9958。GLU浓度为5.5mmol/L、13.5mmol/L、23.5mmol/L时,干化学法(Y)的相对偏倚分别为2.36%、1.62%、1.12%。结论干化学法与湿化学法测定血清葡萄糖的结果具有很好的相关性,测定结果的相对偏倚随浓度升高而降低,但变化不大。

AU-600自动生化分析仪性能评价

目的 对AU - 6 0 0自动分析仪 (AU - 6 0 0 )性能进行评价 .方法 选用AST、TP、BUN、GLU等项目从精密度、准确度、线性范围、交叉污染率对AU - 6 0 0析进行评价 .结果 AU - 6 0 0的精密度好 ,CV值AST为 2 5 %、TP为 1 3%、BUN为 2 0 %、GLU为 1 4% ;准确度高 ,回收率AST为 10 3 5 %、TP为 10 1 4%、BUN为 10 1 3%、GLU为 96 0 % ,有良好的线性范围 ;交叉污染率低 <1% .结论 AU - 6 0 0全自动化操作、标本用量少、速度快捷、精密度好、准确度高、线性范围宽、交叉污染率低 。

稳定表达乙型肝炎病毒含前S2的表面抗原重组细胞系的建立

目的建立稳定表达含有pre-S2的HBsAg的细胞系。方法构建在真核细胞表达pre-S2-HB- sAg的重组质粒PCI-HBs2。用此质粒转染HepG2细胞,经克隆化培养以及G418筛选,建立稳定表达HB2Ag的细胞系。对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性等生物学特性做了鉴定。同时对该细胞实验室大量培养的条件进行了优化。结果成功构建表达pre-S2-HBsAg的重组质粒。转染细胞后筛选到一个稳定表达pre-S2-HBsAg的细胞系3E3。ELISA检测表明该细胞系分泌的HBsAg水平高,生物学性状研究结果表明稳定表达HBsAg的3E3细胞纯度好,遗传性状稳定。结论成功建立了稳定表达pre-S2-HBsAg的细胞系。该细胞系遗传性质稳定,表达蛋白产量高。此细胞系可用于pre-S2-HBsAg的制备及纯化。

POCT血糖仪比对试验及其质量管理的研究

目的定期监测番禺区中心医院POCT血糖仪的检测结果与生化分析仪血糖测定结果的一致性,了解血糖仪检测质量,规范血糖仪的管理。方法用新鲜乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血对全院25台POCT血糖仪进行精密度试验,与生化分析仪作比对试验,并对结果进行分析。结果 23台血糖仪检测高、中值标本所得结果的变异系数(CV)在1.7～5.74之间,低值标本结果的标准差0.16～0.39mmol/L,符合国家对血糖检测系统的测量重复性要求;与生化分析仪测定结果比对,23台血糖仪检测5个标本的测定值均小于生化分析仪的测定值,测定值高于4.2mmol/L,其偏倚在-12～5.6之间,测定值低于4.2mmol/L,二者差异为0.11～0.79mmol/L,偏差均符合临床实和验室标准化协会对POCT血糖仪的准确度要求。结论 POCT血糖仪的精密度和准确度在可接受范围内,血糖仪的检测结果可信,人员培训与完善的质量管理是保证血糖仪检验质量的重要措施。

Hsa-miR-203联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病K562细胞的作用

目的探讨hsa-miR-203联合甲磺酸伊马替尼(mesylate imatinib MI)对人慢性粒细胞白血病K562细胞的影响。方法体外培养K562细胞,利用LipofectamineTM2000将has-miR-203模拟物转染至K562细胞,MTT法检测使用miR-203、MI以及两者联合使用对细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测对细胞早期凋亡率的影响。结果 miR-203转染至K562细胞(24、48、72 h)后,联合MI显著抑制K562细胞增殖,抑制效果较各单独使用组作用明显增强。单用miR-203浓度为50μmol·L-1时的抑制率分别为19.69%、25.62%、35.21%。而联合不同浓度(0.5、1、2、3、4μmol·L-1)的伊马替尼,抑制率随着作用时间增加,呈时间—依赖效应。单用hsa-miR-203、伊马替尼及两者联合作用于K562细胞48 h后,早期凋亡率分别为7.8%、8.9%、12.5%。结论当一定浓度的hsa-miR-203与不同浓度的伊马替尼联合之后,对K562细胞的增殖抑制作用增强,hsa-miR-203提高了K562细胞对伊马替尼的敏感性,其机制可能为共同促进K562细胞早期凋亡有关,并为白血病的治疗提供新的依据。

两种稀释液在高精子密度精液分析中的比较应用

目的探讨原装稀释液和生理盐水作为精子稀释液在高精子密度精液常规分析中的比较应用。方法对88例高密度精液(不液化标本12例,液化密标本76例)标本先取原液粗略估计精子密度,再根据密度大小决定其稀释倍数,分别用生理盐水及原装稀释液对同份精液标本进行稀释后用计算机辅助分析(CASA)系统分析其密度、活力。结果原液的密度、活力明显低于生理盐水(P<0.05)和原装稀释液(P<0.05)的密度与活力,两种稀释液的密度和活力相近(P>0.05);对不液化精液标本未加糜蛋白酶的原液精子密度和活力明显低于加糜蛋白酶后用生理盐水和原装稀释液稀释的精子密度和活力(P<0.05),而加糜蛋白酶后用两种稀释液的精子密度和活力则较为相近(P>0.05)。结论做精液常规分析时,高密度的精液可用生理盐水代替原装稀释液应用于检测。

血细胞分析仪性能监控体系的建立

目的建立血细胞分析仪性能监控体系,保证所有检测结果准确可靠。方法依据ISO/15189要求对实验室的血细胞分析仪建立性能监控体系,包括背景计数、携带污染率、精密度、室内质控、线性检测、仪器校准、准确度、不同仪器和不同检测模式间新鲜全血比对、仪器维护保养等9项指标进行监控,对各项指标均有明确规定,具有一定的可操作性。结果各仪器的背景计数、携带污染率,精密度均符合仪器要求;日间精密度CV<1/3 CLIA'88;线性范围满足临床要求,相关系数r均>0.990;小比对结果显示各参数之间相对偏差<1/2 CLIA'88;仪器间和不同检测模式间各参数比对结果的相关系数r均>0.975,各参数在医学决定水平处预期偏倚均未超出要求范围;卫生部及广东省临检中心室间质评结果均为100%。结论建立血细胞分析仪性能监控体系,保证不同仪器及同一仪器不同检测模式检测结果的一致和准确,有利于实验室的规范化管理。

hsa-miR-203真核表达载体的构建及对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的构建hsa-miR-203(人微小非编码RNA-203)的真核表达载体,观察其对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)增殖和凋亡的作用。方法构建hsa-miR-203靶向基因的真核表达载体PmiR-203,用脂质体转染法将PmiR-203转染K562细胞;可溶性噻唑盐-8(WST-8)法检测转染后的K562细胞增殖的情况,流式细胞术检测转染后K562细胞的早期凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测bcr/abl mRNA的表达水平,比色法测定caspase-3、caspase-9的活性。结果本法成功构建了重组真核表达载体PmiR-203,流式细胞术结果表明,K562细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率52.6%。PmiR-203转染K562细胞48 h后,能明显抑制K562细胞的增殖,并促进细胞的早期凋亡。实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的PmiR-203能显著下调bcr/ablmRNA的表达水平,转染后K562细胞的caspase-3、caspase-9的活性明显增强。结论成功构建了hsa-miR-203的真核表达载体PmiR-203,后者主要通过下调bcr/abl融合基因的表达抑制K562细胞的增殖,并通过活化caspase-3、caspase-9促进K562细胞的早期凋亡。

马钱子碱对人慢性粒细胞白血病KCL-22细胞的增殖及凋亡作用

目的：探索马钱子碱对人慢性粒细胞白血病KCL-22细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，为白血病的治疗提供新的方向。方法体外培养白血病 KCL-22细胞株，采用 MTS法检测不同浓度马钱子碱对 KCL-22细胞增殖的影响；通过FITC-Annexin V／PI双染法检测不同浓度马钱子碱处理后细胞的凋亡作用；运用 Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达水平变化。结果马钱子碱可明显抑制 KCL-22细胞增殖，且具有浓度和时间依赖性。马钱子碱可诱导 KCL-22细胞发生凋亡，并以早期凋亡为主，在50～400μg／ml范围内呈剂量效应关系。经马钱子碱处理后，Bcl-2蛋白表达降低、Bax和Cyt-C蛋白表达增高，Caspase-9，Caspase-3均被切割活化。结论马钱子碱可显著抑制慢性白血病 KCL-22细胞增殖，并可能通过调控Bax／Bcl-2平衡、释放Cyt-C及激活Caspase-3，9依赖的内源性线粒体途径诱导细胞凋亡。

Apollon反义核酸促进肝癌HepG_2细胞凋亡机制的探讨

目的研究凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员Apollon反义核酸(ASO)对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将化学合成的Apollon ASO经脂质体包裹后作用于肝癌HepG2细胞48 h,采用WST-8法检测不同浓度的Apollon ASO对肝癌细胞增殖抑制作用,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测细胞Apollon mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hochest33258染色观察HepG2细胞凋亡形态;线粒体膜电位检测细胞凋亡;比色法测定半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3、Caspase-9)活性的改变;蛋白质免疫印记技术检测细胞色素C蛋白的表达水平。结果 Apollon ASO转染HepG2细胞48 h能明显抑制细胞增殖,并呈浓度依赖关系。Apollon ASO能促进HepG2细胞凋亡。不同浓度的Apollon ASO能显著下调Apollon mRNA的表达水平,同时Caspase-3、Caspase-9的活性明显增加,细胞色素C蛋白表达水平也增加。经荧光显微镜观察,ASO组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体。结论 Apollon ASO可下调Apollon mRNA表达水平,抑制HepG2细胞增殖,其诱导细胞早期凋亡可能通过线粒体介导的途径。

孕妇常规检验阴道分泌物1226例的结果分析

正常性成熟后,女性由于雌激素及卵巢功能的影响,使阴道上皮细胞有周期变化及脱落,在阴道杆菌的作用下,使阴道pH值保持在4.0~4.5之间,健康妇女阴道的本身自净作用具有自然的防御功能。但孕妇阴道上皮细胞糖原含量增加,阴道酸度升高,给各种病原微生物的入侵有了可乘之机,阴道分泌物常规涂片检查可快速了解阴道基本的感染状况,为了解本地区孕妇阴道感染情况。对2011年1月至12月在我院就诊的1 226名孕妇的阴道分泌物检查结果进行统计分析,现报告如下。

KX-21手工复检结果分析

目的:对日本Sysmex公司KX-21全自动血液分析仪制定手工复检操作规程并进行评价。方法:对需手工复检标本进行涂片、染色、镜检,必要时用ADVIA120或显微镜计数法复查。结果:白细胞的复检有53.37%有临床意义,其中幼稚细胞、异常淋巴细胞及有核红细胞的检出有重要意义;红细胞的复检46.98%形态有比较明显的异常,对于贫血的分类具有重要意义,而8例计数结果的不相符反映了仪器固有的缺陷,2例疟原虫的检出对疟疾的诊断有确诊价值;从PLT的复检来看:有56.09%反映的是标本中血小板的真实情况,具有临床意义;43.91%反映的是血小板的假性增高和减少,完全有手工复检的必要性。

白介素13-1112 C>T基因多态性与尘螨变应性鼻炎的相关性

目的对尘螨诱导引起变应性鼻炎的患者行白介素13-1112 C>T基因分型,探讨白介素13-1112 C>T基因与尘螨变应性鼻炎遗传易感性的相关性。方法用PCR-RFLP法对90名无亲缘关系的尘螨变应性鼻炎患者和107名无血缘关系的健康汉族人行白介素13-1112 C>T基因分型。结果尘螨变应性鼻炎组与对照组相比,白介素13-1112 C/T,C/C基因型频率均无显著性差异(P>0.05);但白介素13-1112位点的基因TT存在显著相关(P<0.05)。结论白介素13-1112 T/T基因多态性与尘螨变应性鼻炎存在相关性,可能存在原因较多,大样本和单倍体研究将可能有助于阐明关系。

广州市番禺区孕妇弓形虫感染状况及危险因素调查

目的了解番禺区孕妇弓形虫感染状况并分析其高危感染因素,为弓形虫病的防治提供科学依据。方法随机选择2017年4月—2017年9月期间来广州市番禺区中心医院孕检的301名孕妇作为观察对象,对其开展问卷调查,问卷调查内容包括:教育程度、职业、居住地、是否喜食生/半生肉类、蔬菜、是否常喝未煮开的水、是否养宠物、是否经常接触泥土、是否接受过输血等。以了解本地区孕妇对弓形虫的熟知程度,通过单因素分析确定孕妇感染弓形虫的危险因素,再将单因素分析中有统计学意义的调查因素纳入多因素logistic回归分析确定孕妇弓形虫感染的高危因素。同时,采集孕妇静脉血液标本,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定孕妇血清弓形虫IgG及IgM抗体。结果 301例被调查的孕妇中,弓形虫抗体阳性30例,阳性率为9.97%,其中IgG阳性26名(阳性率:8.64%),IgM阳性4名(阳性率:1.33%);问卷调查结果显示,随着教育程度的增高,孕妇对弓形虫熟知程度增高;孕妇对弓形虫知晓程度随居住地的不同而不同:城镇居民的知晓率高于农村居民;单因素分析显示:是否饲养宠物(P<0.05)和是否有输血史与弓形虫感染密切相关(P<0.05),多因素logistic回归分析确定饲养宠物和有输血史是弓形虫感染的高危因素。结论孕妇是弓形虫感染的高危人群,孕妇弓形虫感染易导致不良妊娠结局。饲养宠物及有输血史是感染弓形虫的高危因素,应加大弓形虫病防治相关知识宣传力度,尤其加强对育龄妇女的健康教育,积极采取健康教育,早期检查及治疗等综合措施,以预防控制该地区孕妇弓形虫感染,提高优生优育水平。

姜黄素通过抑制HIF-1α影响MDA-MB-231细胞增殖和迁移作用

目的研究姜黄素(Cur)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移作用的影响,并探讨其作用机制。方法用姜黄素处理MDA-MB-231细胞,利用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)检测姜黄素的半抑制浓度IC50,然后通过结晶紫染色分析Cur对MDA-MB-231细胞细胞克隆形成的作用,通过划痕实验检测姜黄素对细胞迁移能力的影响。然后用姜黄素,低氧诱导因子(HIF-1α)、小分子干扰RNA和HIF-1α激动剂去铁敏(DFO)处理细胞,通过荧光定量PCR(q-PCR)、Western blot分辨检测细胞内HIF-1α,细胞迁移相关蛋白(β-catenin,E-cadherin)的表达情况。最后用姜黄素和DFO处理细胞,通过划痕实验检测细胞迁移作用的影响。结果姜黄素作用MDA-MB-231细胞24h IC_(50)为13.373μmol/L,且随浓度增加抑制能力逐步增强,实验组相对于空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),显著抑制细胞的克隆形成。10μmol/L的姜黄素作用细胞6 h后显著抑制细胞的迁移速率,DFO激活HIF-1α后能拮抗姜黄素的作用。姜黄素能够显著抑制细胞内HIF-1α的表达,并伴随β-catenin表达下调及Ecadherin的上调。结论姜黄素可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并能通过抑制HIF-1α/β-catenin信号通路抑制MDAMB-231细胞的迁移侵袭,为临床治疗乳腺癌提供了理论依据。

Apollon反义核酸联合苦参碱对肝癌细胞增殖与凋亡影响的研究

目的:研究凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成员Apollon反义核酸(ASO)联合苦参碱对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:将一定浓度的人工合成的Apollon ASO经脂质体包裹转染肝癌(HepG2)细胞,并联合不同浓度的苦参碱作用于肝癌(HepG2)细胞48h后,采用WST-8法检测单用Apollon ASO、单用苦参碱、及ApollonASO联合苦参碱对肝癌细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst33258染色观察HepG2细胞凋亡形态;实时荧光定量RT-PCR检测细胞Apollon mRNA的表达水平。结果:Apollon ASO联合苦参碱作用于HepG2细胞48h后,单用苦参碱的IC50为0.9mg/mL;苦参碱与Apollon ASO联合使用,IC50为0.43mg/mL,增敏倍数为2.09,表现为协同作用。流式细胞术检测结果显示,Apollon ASO联合苦参碱能促进HepG2细胞凋亡,其早期凋亡率达36.4%;经荧光显微镜观察,Apollon ASO组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体。实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的Apollon ASO与苦参碱均能显著下调Apollon mRNA的表达水平。结论:Apollon ASO可增强肝癌细胞对苦参碱的敏感性,作用机制可能与共同下调Apollon mRNA表达水平有关,为肝癌的临床治疗提供实验依据。

广州地区353例泌尿结石成分分析及预防指导

目的分析广州地区尿结石患者结石的成分,研究结石成因并探讨相应的预防对策。方法留取本院结石患者经住院手术取出或自然排出的结石标本353例,检测其化学成份,结合患者对应的临床资料进行分析。结果 353例结石患者中男女比例为1.43∶1,上尿路结石患者明显多于下尿路结石,比例为11.6∶1。草酸钙与尿酸钙混合结石比例最高,约占27.7%,其次是单纯的草酸钙结石占25.7%,含草酸盐结石占81.6%,含磷酸盐结石占6.8%,含碳酸盐结石占26.9%,含尿酸盐结石占61.3%,钙检出率最高占95.8%。结论广州地区的尿路结石以草酸钙为主要成分,其次是尿酸钙,这可为本地区尿石症的病因探讨和预防复发提供理论依据。

慢病毒介导hsa-mir-203构建及对K562细胞增殖与凋亡影响观察

目的运用慢病毒载体系统构建人微小非编码RNA(miR-203)的重组慢病毒载体,并感染人慢性粒细胞白血病细胞(K562),观察其对K562细胞增殖与凋亡的影响。方法合成miR-203的前体序列,克隆至pLVX-IRES-ZsGreen1载体中构建成重组慢病毒质粒pLVX-shRNA2-miR-203(PremiR-203)。经酶切和测序鉴定后,采用脂质体将其与包装质粒PLD2及包膜质粒PLD3共转染293T和K562细胞。荧光显微镜观察293T和K562细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达。QRT-PCR检测miR-203在K562细胞中的表达水平,MTT实验检测对K562细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期,TUNEL染色观察细胞凋亡形态。采用完全随机设计的单因素方差分析组间差异的显著性。结果经酶切鉴定和核酸序列测定,293T细胞中GFP表达证实成功包装了携带miR-203基因的重组慢病毒,滴度为1.2×108 TU/mL。重组慢病毒感染K562细胞后,细胞中miR-203基因呈高表达;PremiR-203对K562细胞增殖抑制率24h为(8.10±0.15)%,高于阴性对照组的(5.16±0.14)%,F=3 499.1,P<0.001;48h为(32.4±0.49)%,明显高于阴性对照组的(6.4±0.19)%,F=9439.3,P<0.001;72h为(59.0±0.53)%,F=32 865.16,P<0.001。流式细胞术结果显示,细胞周期比例G1期为38%,S期为54%,G2期为8%。荧光显微镜观察到细胞核碎裂、核质固缩、细胞膜突出等典型的凋亡形态。结论成功构建重组慢病毒介导hsa-miR-203的表达载体,实现了其在细胞中的稳定表达,并有效抑制K562细胞增殖,并促进细胞凋亡。