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细菌几丁质酶基因的表达调控
被引量:
6
1
作者
谢池楚
贾海云
陈月华
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1029-1038,共10页
几丁质酶可以降解几丁质,广泛存在于各类微生物中。几丁质的降解产物几丁寡糖在医药、食品及农业生防领域有很重要的应用价值及广泛的应用前景。细菌在利用几丁质时,需要先分泌几丁质酶,将几丁质降解成几丁寡糖或单体,再通过特异的转运...
几丁质酶可以降解几丁质,广泛存在于各类微生物中。几丁质的降解产物几丁寡糖在医药、食品及农业生防领域有很重要的应用价值及广泛的应用前景。细菌在利用几丁质时,需要先分泌几丁质酶,将几丁质降解成几丁寡糖或单体,再通过特异的转运系统送进细胞而被利用。胞内的几丁质降解产物作为特定的信号分子,可以激活或阻遏相应chi基因的转录,从而影响细菌几丁质酶的合成。在各种调节蛋白及应答元件的参与下,细菌几丁质酶的合成受到精密的控制。文章以链霉菌和大肠杆菌为代表综述了细菌在转运系统和基因表达两个层面上控制几丁质酶合成的最新研究进展。
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关键词
细菌
几丁质酶基因
转运系统
表达调控
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职称材料
一株抑真菌、对甜菜夜蛾高效的苏云金芽胞杆菌菌株
被引量:
3
2
作者
韩苗苗
肖亮
+2 位作者
蔡峻
谢池楚
陈月华
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1750-1754,共5页
为了扩大苏云金芽胞杆菌的杀虫谱及生防范围,通过抑真菌和杀虫生物活性测定,筛选到一株抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt519-1。此菌株对所测试的小麦赤霉、黄瓜灰霉等8种真菌都有不同程度的抑制作用,且完全抑制这些真菌孢子的萌发。通...
为了扩大苏云金芽胞杆菌的杀虫谱及生防范围,通过抑真菌和杀虫生物活性测定,筛选到一株抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt519-1。此菌株对所测试的小麦赤霉、黄瓜灰霉等8种真菌都有不同程度的抑制作用,且完全抑制这些真菌孢子的萌发。通过室内生物测定发现该菌株对甜菜夜蛾具有很高的杀虫活性,半致死浓度(LC50)仅为5.5μg/mL。经特异引物检测,证明该菌株含有6种杀虫蛋白基因:cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1I、cry2和vip3A。经SDS-PAGE分析,Bt519-1菌株分别产生分子量大约为135 kD~130 kD、95 kD、80 kD、70 kD和65 kD~60 kD的几种杀虫晶体蛋白。在有无几丁质的培养基中都能产生较高活性的几丁质酶。试验证明苏云金芽胞杆菌Bt519-1是一株既杀虫又拮抗真菌的多功能生防菌株。
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关键词
苏云金芽胞杆菌
拮抗
甜菜夜蛾
棉铃虫
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职称材料
Bt几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象
被引量:
3
3
作者
谢池楚
陈月华
+2 位作者
蔡峻
刘传
陈艳玲
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1532-1538,共7页
多数微生物可以产生几丁质酶。一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。采用DNS法检测77株Bt在有或无诱导...
多数微生物可以产生几丁质酶。一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。采用DNS法检测77株Bt在有或无诱导物培养基中的几丁质酶活力。研究了葡萄糖对4株不同表达类型菌株酶活力的影响,以及葡萄糖抑制与几丁质诱导之间的关系。研究发现在无几丁质诱导条件下,全部试验菌株都可以产生几丁质酶,保持一定量的基础表达,说明Bt能组成型合成几丁质酶,不需要诱导。添加诱导物之后,31株菌的酶活力没有任何变化,44株菌有不同程度的提高,但其中绝大部分诱导特性并不典型,酶活力提高不显著。许多Bt菌株几丁质酶表达兼具组成型和诱导型的特点。葡萄糖能够抑制几丁质的诱导作用,但是不能完全抑制Bt菌株几丁质酶的基础表达。比较组成型和诱导型菌株的几丁质酶基因chiA、chiB调节区域核苷酸序列,发现仅存在个别碱基的差异。
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关键词
苏云金芽胞杆菌
几丁质酶
基础表达
诱导多态性
原文传递
地衣芽孢杆菌MY75菌株几丁质酶基因的异源表达及特性
被引量:
5
4
作者
肖亮
刘传
+3 位作者
谢池楚
蔡峻
刘东
陈月华
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期749-754,共6页
【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PC...
【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PCR引物对MY75菌株的几丁质酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适反应温度及pH,温度耐受性及金属离子对酶活力的影响等特性进行了研究,并测定了表达蛋白对真菌孢子萌发的抑制活性和对甜菜夜蛾幼虫的杀虫增效作用。【结果】酶谱分析证明MY75菌株培养上清液中仅含有一种55kDa的几丁质酶。将该编码基因chiMY克隆及序列分析后发现,基因长度为1797bp,编码599个氨基酸。在大肠杆菌中异源表达的几丁质酶ChiMY蛋白的分子量为67kDa。质谱分析证明,55kDa蛋白与67kDa蛋白序列相同。ChiMY最适pH和最适温度分别为7.0和50°C,为中性几丁质酶。Li+,Na+,和Mg2+离子对表达蛋白的酶活力具有促进作用,Mn2+,Cr3+,Zn2+和Ag+离子则能显著抑制酶活力,Cu2+和Fe3+离子完全抑制酶活性。生物测定的结果显示,异源表达的MY75几丁质酶能够抑制小麦赤霉及黑曲霉的孢子萌发,并且对苏云金芽孢杆菌的杀虫活力具有增效作用。【结论】地衣芽孢杆菌MY75菌株中仅有一种55kDa几丁质酶,其编码基因能够在大肠杆菌中大量表达,表达蛋白分子量与野生型蛋白之间有显著差异,由此证明MY75菌株中存在着几丁质酶的剪切加工过程。明确了地衣芽孢杆菌几丁质酶ChiMY具有抑制真菌活性及杀虫增效作用。上述全部研究结论在国内首次报道。
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关键词
地衣芽孢杆菌
几丁质酶
质谱
特性
抑真菌
杀虫增效
原文传递
组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性
被引量:
1
5
作者
李蓬飞
罗洋
+3 位作者
谢池楚
蔡峻
边强
陈月华
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期891-900,共10页
【目的】通过构建能够组成型高效表达几丁质酶的苏云金芽胞杆菌工程菌株,以提高其抑真菌活性。【方法】首先通过PCR扩增获得Bti75菌株chiB全长及系列缺失启动子片段,与本室构建的启动子探测型载体pCB连接,转化Bti75菌株,通过β-半乳糖...
【目的】通过构建能够组成型高效表达几丁质酶的苏云金芽胞杆菌工程菌株,以提高其抑真菌活性。【方法】首先通过PCR扩增获得Bti75菌株chiB全长及系列缺失启动子片段,与本室构建的启动子探测型载体pCB连接,转化Bti75菌株,通过β-半乳糖苷酶活性检测及β-半乳糖苷酶mRNA的Real time-PCR检测,确定了一段长度为190 bp的组成型高效表达启动子。将这一启动子分别与Bti75自身几丁质酶基因chiA以及地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)的几丁质酶基因chiMY连接构建了组成型高效表达的工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)。应用几丁质酶酶活检测、SDS-PAGE及酶谱分析检测了工程菌几丁质酶的表达情况。最后,通过检测工程菌发酵粗酶液对真菌孢子萌发和菌丝生长的影响,评估了工程菌对3种植物病原真菌的抗真菌活性。【结果】在没有诱导物存在的情况下,Bti75(pBPΔ7)菌株表达的β-半乳糖苷酶酶活和β-半乳糖苷酶mRNA的转录量分别是Bti75(pBP)菌株的7倍和2.5倍左右。在没有几丁质诱导的情况下,与野生株Bti75相比,工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)的几丁质酶活性均提高了3.5倍左右。SDS-PAGE及酶谱分析证明目的几丁质酶在非诱导条件下达到组成型高效表达,抑真菌实验显示工程菌Bti75(pDA)和Bti75(pDM)抑制3种植物病原真菌的活性明显提高。【结论】发现190 bp的缺失启动子能够组成型高效表达不同来源的几丁质酶,无需诱导物的诱导,工程菌株就能展现良好的抗真菌能力。
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关键词
苏云金芽胞杆菌
几丁质酶
缺失启动子
组成型表达
抑真菌活性
原文传递
题名
细菌几丁质酶基因的表达调控
被引量:
6
1
作者
谢池楚
贾海云
陈月华
机构
南开大学微生物学系
分子微生物学与技术教育部重点实验室
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1029-1038,共10页
基金
国家自然科学基金项目(编号:30971957)资助
文摘
几丁质酶可以降解几丁质,广泛存在于各类微生物中。几丁质的降解产物几丁寡糖在医药、食品及农业生防领域有很重要的应用价值及广泛的应用前景。细菌在利用几丁质时,需要先分泌几丁质酶,将几丁质降解成几丁寡糖或单体,再通过特异的转运系统送进细胞而被利用。胞内的几丁质降解产物作为特定的信号分子,可以激活或阻遏相应chi基因的转录,从而影响细菌几丁质酶的合成。在各种调节蛋白及应答元件的参与下,细菌几丁质酶的合成受到精密的控制。文章以链霉菌和大肠杆菌为代表综述了细菌在转运系统和基因表达两个层面上控制几丁质酶合成的最新研究进展。
关键词
细菌
几丁质酶基因
转运系统
表达调控
Keywords
bacteria
chitinase gene
transport system
regulation
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
一株抑真菌、对甜菜夜蛾高效的苏云金芽胞杆菌菌株
被引量:
3
2
作者
韩苗苗
肖亮
蔡峻
谢池楚
陈月华
机构
南开大学生命科学学院微生物学系
南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期1750-1754,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30570052
No.30600015)
天津市自然科学基金(No.06YFJMJC11200)
文摘
为了扩大苏云金芽胞杆菌的杀虫谱及生防范围,通过抑真菌和杀虫生物活性测定,筛选到一株抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt519-1。此菌株对所测试的小麦赤霉、黄瓜灰霉等8种真菌都有不同程度的抑制作用,且完全抑制这些真菌孢子的萌发。通过室内生物测定发现该菌株对甜菜夜蛾具有很高的杀虫活性,半致死浓度(LC50)仅为5.5μg/mL。经特异引物检测,证明该菌株含有6种杀虫蛋白基因:cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1I、cry2和vip3A。经SDS-PAGE分析,Bt519-1菌株分别产生分子量大约为135 kD~130 kD、95 kD、80 kD、70 kD和65 kD~60 kD的几种杀虫晶体蛋白。在有无几丁质的培养基中都能产生较高活性的几丁质酶。试验证明苏云金芽胞杆菌Bt519-1是一株既杀虫又拮抗真菌的多功能生防菌株。
关键词
苏云金芽胞杆菌
拮抗
甜菜夜蛾
棉铃虫
Keywords
Bacillus thuringiensis,Antagonistic,Spodoptera exigua,Helicoverpa armigera
分类号
S476.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
Bt几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象
被引量:
3
3
作者
谢池楚
陈月华
蔡峻
刘传
陈艳玲
机构
南开大学微生物学系
分子微生物学与技术教育部重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1532-1538,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.30971957)资助~~
文摘
多数微生物可以产生几丁质酶。一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。采用DNS法检测77株Bt在有或无诱导物培养基中的几丁质酶活力。研究了葡萄糖对4株不同表达类型菌株酶活力的影响,以及葡萄糖抑制与几丁质诱导之间的关系。研究发现在无几丁质诱导条件下,全部试验菌株都可以产生几丁质酶,保持一定量的基础表达,说明Bt能组成型合成几丁质酶,不需要诱导。添加诱导物之后,31株菌的酶活力没有任何变化,44株菌有不同程度的提高,但其中绝大部分诱导特性并不典型,酶活力提高不显著。许多Bt菌株几丁质酶表达兼具组成型和诱导型的特点。葡萄糖能够抑制几丁质的诱导作用,但是不能完全抑制Bt菌株几丁质酶的基础表达。比较组成型和诱导型菌株的几丁质酶基因chiA、chiB调节区域核苷酸序列,发现仅存在个别碱基的差异。
关键词
苏云金芽胞杆菌
几丁质酶
基础表达
诱导多态性
Keywords
Bacillus thuringiensis
chitinase
essential expression
inducible synthesis polymorphism
分类号
TQ925 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
地衣芽孢杆菌MY75菌株几丁质酶基因的异源表达及特性
被引量:
5
4
作者
肖亮
刘传
谢池楚
蔡峻
刘东
陈月华
机构
南开大学微生物学系
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期749-754,共6页
基金
国家自然科学基金(30971957,30600015)~~
文摘
【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PCR引物对MY75菌株的几丁质酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适反应温度及pH,温度耐受性及金属离子对酶活力的影响等特性进行了研究,并测定了表达蛋白对真菌孢子萌发的抑制活性和对甜菜夜蛾幼虫的杀虫增效作用。【结果】酶谱分析证明MY75菌株培养上清液中仅含有一种55kDa的几丁质酶。将该编码基因chiMY克隆及序列分析后发现,基因长度为1797bp,编码599个氨基酸。在大肠杆菌中异源表达的几丁质酶ChiMY蛋白的分子量为67kDa。质谱分析证明,55kDa蛋白与67kDa蛋白序列相同。ChiMY最适pH和最适温度分别为7.0和50°C,为中性几丁质酶。Li+,Na+,和Mg2+离子对表达蛋白的酶活力具有促进作用,Mn2+,Cr3+,Zn2+和Ag+离子则能显著抑制酶活力,Cu2+和Fe3+离子完全抑制酶活性。生物测定的结果显示,异源表达的MY75几丁质酶能够抑制小麦赤霉及黑曲霉的孢子萌发,并且对苏云金芽孢杆菌的杀虫活力具有增效作用。【结论】地衣芽孢杆菌MY75菌株中仅有一种55kDa几丁质酶,其编码基因能够在大肠杆菌中大量表达,表达蛋白分子量与野生型蛋白之间有显著差异,由此证明MY75菌株中存在着几丁质酶的剪切加工过程。明确了地衣芽孢杆菌几丁质酶ChiMY具有抑制真菌活性及杀虫增效作用。上述全部研究结论在国内首次报道。
关键词
地衣芽孢杆菌
几丁质酶
质谱
特性
抑真菌
杀虫增效
Keywords
Bacillus licheniformis
chitinase
characteristics
mass spectrometry
antifungal activity
synergistic effect
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性
被引量:
1
5
作者
李蓬飞
罗洋
谢池楚
蔡峻
边强
陈月华
机构
南开大学生命科学学院微生物学系
南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室
南开大学农药国家工程研究中心
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期891-900,共10页
基金
国家863计划项目(No.2011AA10A203)
国家自然科学基金项目(No.31371979)
+1 种基金
教育部博士点基金项目(No.20120031110019)
天津市自然科学基金项目(No.12JCYBJC198000)
文摘
【目的】通过构建能够组成型高效表达几丁质酶的苏云金芽胞杆菌工程菌株,以提高其抑真菌活性。【方法】首先通过PCR扩增获得Bti75菌株chiB全长及系列缺失启动子片段,与本室构建的启动子探测型载体pCB连接,转化Bti75菌株,通过β-半乳糖苷酶活性检测及β-半乳糖苷酶mRNA的Real time-PCR检测,确定了一段长度为190 bp的组成型高效表达启动子。将这一启动子分别与Bti75自身几丁质酶基因chiA以及地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)的几丁质酶基因chiMY连接构建了组成型高效表达的工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)。应用几丁质酶酶活检测、SDS-PAGE及酶谱分析检测了工程菌几丁质酶的表达情况。最后,通过检测工程菌发酵粗酶液对真菌孢子萌发和菌丝生长的影响,评估了工程菌对3种植物病原真菌的抗真菌活性。【结果】在没有诱导物存在的情况下,Bti75(pBPΔ7)菌株表达的β-半乳糖苷酶酶活和β-半乳糖苷酶mRNA的转录量分别是Bti75(pBP)菌株的7倍和2.5倍左右。在没有几丁质诱导的情况下,与野生株Bti75相比,工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)的几丁质酶活性均提高了3.5倍左右。SDS-PAGE及酶谱分析证明目的几丁质酶在非诱导条件下达到组成型高效表达,抑真菌实验显示工程菌Bti75(pDA)和Bti75(pDM)抑制3种植物病原真菌的活性明显提高。【结论】发现190 bp的缺失启动子能够组成型高效表达不同来源的几丁质酶,无需诱导物的诱导,工程菌株就能展现良好的抗真菌能力。
关键词
苏云金芽胞杆菌
几丁质酶
缺失启动子
组成型表达
抑真菌活性
Keywords
Bacillus thuringiensis
Chitinase
Deletion mutant promoter
Constitutive expression
Antifungal activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细菌几丁质酶基因的表达调控
谢池楚
贾海云
陈月华
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011
6
下载PDF
职称材料
2
一株抑真菌、对甜菜夜蛾高效的苏云金芽胞杆菌菌株
韩苗苗
肖亮
蔡峻
谢池楚
陈月华
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
3
下载PDF
职称材料
3
Bt几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象
谢池楚
陈月华
蔡峻
刘传
陈艳玲
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
原文传递
4
地衣芽孢杆菌MY75菌株几丁质酶基因的异源表达及特性
肖亮
刘传
谢池楚
蔡峻
刘东
陈月华
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
原文传递
5
组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性
李蓬飞
罗洋
谢池楚
蔡峻
边强
陈月华
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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