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拮抗鲶爱德华氏菌的高地芽孢杆菌Yab4的鉴定及其应用前景
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作者 陈长松 张钊 +5 位作者 江修龙 韩冬 郑劲松 黄爱优 谢珍玉 谢海侠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2122-2132,共11页
为筛选拮抗鲶爱德华氏菌的肠道益生菌,从鲶形目鱼类的肠道中分离耐热菌株,通过体外抑菌实验及宿主黏附实验,筛选出一株既对鲶爱德华氏菌具有良好抑菌活性,又能高效定植鲶爱德华氏菌易感宿主的菌株Yab4。通过16S rDNA与gyrB构建系统发育... 为筛选拮抗鲶爱德华氏菌的肠道益生菌,从鲶形目鱼类的肠道中分离耐热菌株,通过体外抑菌实验及宿主黏附实验,筛选出一株既对鲶爱德华氏菌具有良好抑菌活性,又能高效定植鲶爱德华氏菌易感宿主的菌株Yab4。通过16S rDNA与gyrB构建系统发育树,Yab4菌株被鉴定为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)。该菌在pH 4.0—7.0及30—40℃耐受性较强,同时对大部分水产常用抗生素敏感。将高地芽孢杆菌Yab4以喷雾的形式喷洒至饲料表面(5×10^(9) CFU/kg),经饲喂实验检测其对黄颡鱼的生长性能及免疫指标的影响。结果显示,饲喂高地芽孢杆菌Yab428d的黄颡鱼生长性能高于对照组;其血清中碱性磷酸酶、溶菌酶及总蛋白等先天免疫指标在28d时均显著上升,IL-1β、TNF-α和NF-κB p65等免疫相关基因表达水平呈显著性增高。通过腹腔注射鲶爱德华氏菌HSN-1的方式感染饲喂高地芽孢杆菌Yab428d的黄颡鱼,发现高地芽孢杆菌Yab4饲喂组存活率达到60%,较对照组提高了35%。研究筛选得到的拮抗鲶爱德华氏菌的高地芽孢杆菌Yab4具有良好的抗菌和益生效果,并且有望作为一种饲料添加剂应用于鲶形目鱼类的替抗健康养殖。 展开更多
关键词 高地芽孢杆菌 鲶爱德华氏菌 饲料添加剂 益生机理 黄颡鱼
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杀鱼爱德华氏菌ETAE_1309基因的启动子研究
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作者 刘鹿忆 何弯弯 +5 位作者 朱泽亮 邓平 艾桃山 谢海侠 朱文欢 张立强 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第5期3-12,共10页
为研究杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)ETAE_1309蛋白的表达调控机制,本实验利用序列截短方式和定点突变技术鉴定了ETAE_1309基因的启动子,并检测了不同培养条件下启动子的活性。结果显示:ETAE_1309上游-139~-1 bp具有启动子活... 为研究杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)ETAE_1309蛋白的表达调控机制,本实验利用序列截短方式和定点突变技术鉴定了ETAE_1309基因的启动子,并检测了不同培养条件下启动子的活性。结果显示:ETAE_1309上游-139~-1 bp具有启动子活性,ETAE_1309的核心启动子为-10元件TATACT和-35元件CTGGCG,该启动子属于σ38依赖型启动子。ETAE_1309转录水平受到RpoS_(Ep)(σ^(38))强烈的正调控,与毒力相关的调控蛋白EsrB、EsrC和与生理过程相关的Fur、CpxR、ETAE_2077对ETAE_1309转录水平影响不大。当杀鱼爱德华氏菌在DMEM培养基中生长时,随着培养时间延长ETAE_1309启动子活性逐渐增加,24 h(稳定期)和36 h(衰亡期)启动子活性分别为12 h(对数期)的2.4倍和2.9倍。当培养温度升高至35℃时ETAE_1309启动子活性显著下降,约为25℃时启动子活性的44.0%。本研究确证了杀鱼爱德华氏菌ETAE_1309的启动子序列及调控蛋白,随着培养时间延长该启动子活性逐渐增加,随着培养温度升高该启动子活性显著降低,研究结果为精准控制ETAE_1309蛋白表达及其介导的细菌毒力奠定了基础。 展开更多
关键词 ETAE_1309 启动子 sigma因子 转录调控 杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)
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鱼类胸腺研究进展 被引量:14
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作者 谢海侠 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期90-96,共7页
Fish thymus is phylogenetically the first welldeveloped lymphoepithelial structure for most fish species. It supplies microenvironment for Tcell differentiation and is directly involved in defense mechanism. The... Fish thymus is phylogenetically the first welldeveloped lymphoepithelial structure for most fish species. It supplies microenvironment for Tcell differentiation and is directly involved in defense mechanism. The current status of the fish thymus research was reviewed in the following aspects: 1) structure and possible functions; 2) origin, histogenesis and degeneration; 3) ontogeny and function of Tlymphocyte obtained with monoclonal antibody. 展开更多
关键词 鱼类胸腺 结构 功能 起源 组织发生 退化 T细胞单抗
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强壮粗体虫寄生引起的鳜肠道病理 被引量:2
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作者 谢海侠 高谦 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期137-141,共5页
强壮粗体虫是鳜肠道最常见寄生蠕虫。通过光镜及电镜对自然感染强壮粗体虫的鳜肠道进行了组织病理观察。强壮粗体虫的寄生引起鳜肠上皮细胞脱落、肠固有膜层结缔组织增生及白细胞向病灶处浸润 ,并可观察到嗜酸性粒细胞附着在与肠上皮及... 强壮粗体虫是鳜肠道最常见寄生蠕虫。通过光镜及电镜对自然感染强壮粗体虫的鳜肠道进行了组织病理观察。强壮粗体虫的寄生引起鳜肠上皮细胞脱落、肠固有膜层结缔组织增生及白细胞向病灶处浸润 ,并可观察到嗜酸性粒细胞附着在与肠上皮及固有膜接触的虫体的体壁及吻部。在虫体吻部与肠固有膜层接触处依次观察到纤维细胞、成纤维细胞、嗜酸性粒细胞等 ,其中嗜酸性粒细胞又可分为未成熟嗜酸性粒细胞、成熟的嗜酸性粒细胞及正在脱颗粒的嗜酸性粒细胞。另外在肠壁的固有膜层观察到包裹虫体的结缔组织纤维囊 ,囊壁由三层结构构成 ,同时在鳜肠壁相同的位置观察到被宿主细胞浸润了的组织空腔 。 展开更多
关键词 观察 嗜酸性粒细胞 结缔组织 肠壁 浸润 肠道病 常见 虫体 寄生蠕虫 自然感染
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鱼用核酸疫苗研究进展 被引量:2
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作者 谢海侠 聂品 王桂堂 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期90-95,共6页
关键词 鱼类 核酸疫苗 免疫机理 接种途径
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我国淡水鱼类柱形病病原菌柱状黄杆菌的遗传多样性 被引量:21
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作者 王良发 谢海侠 +5 位作者 张金 李楠 姚卫建 张立强 熊传喜 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期367-377,共11页
为认识我国淡水鱼类烂鳃病的病原以及柱形病在我国的发生情况,实验从发生烂鳃病的病鱼中分离细菌性病原,经过生理生化特性分析以及是否在含托普霉素的Shieh培养基中生长并形成黄色假根状菌落,是否产生降解明胶和硫酸软骨素的酶类等特性... 为认识我国淡水鱼类烂鳃病的病原以及柱形病在我国的发生情况,实验从发生烂鳃病的病鱼中分离细菌性病原,经过生理生化特性分析以及是否在含托普霉素的Shieh培养基中生长并形成黄色假根状菌落,是否产生降解明胶和硫酸软骨素的酶类等特性的鉴定,并结合16SrDNA序列分析,证实柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是所分离的烂鳃病的病原。同时,研究也证实20世纪曾经命名为烂鳃(Gill-rot)病病原的鱼害黏球菌(Myxococcus piscicola Lu,Nie & Ko,1975)是柱状黄杆菌的同物异名。利用分离到的16株柱状黄杆菌的16SrDNA序列,以及已经发表的柱状黄杆菌的相关序列,构建了系统发育树,发现柱状黄杆菌的菌株聚成3枝,与柱状黄杆菌的三种基因组型(Genomovar)相对应。其中当时命名为鱼害黏球菌的强毒株G4与分别分离自日本和美国的两株聚为一枝。另外两枝包括的菌株较多,它们中的一些菌株来源于相同的鱼类宿主,如鲤形目的种类;但是,这两枝也包括一些特有的株,如从欧洲和美国的鲑形目鱼类上分离的柱状黄杆菌聚为一枝,这一枝还包括我国曾经命名为鱼害黏球菌的G18弱毒株。从我国隶属于鲈形目的鳜鱼和鲟形目的中华鲟上分离到的柱状黄杆菌则聚为另外一枝。作者认为对不同基因组型菌株的致病性和致病机理的研究将可能从根本上认识鱼类柱形病的流行规律。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 同物异名 柱形病 16SrDNA 系统发育 基因组型
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鳜鱼头肾的组织发生及成鱼头肾B淋巴细胞的分布 被引量:19
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作者 田敬云 谢海侠 +1 位作者 姚卫建 聂品 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期440-446,共7页
通过整体连续切片,研究了鳜鱼不同发育时期的头肾结构,并利用原位PCR方法检测了B淋巴细胞在鳜鱼头肾中的分布。在孵化后第1d观察到了肾组织,主要由肾小管组成。尔后头肾的发育经历了三个结构和功能的转变。第一个阶段为孵化后第1d到第7d... 通过整体连续切片,研究了鳜鱼不同发育时期的头肾结构,并利用原位PCR方法检测了B淋巴细胞在鳜鱼头肾中的分布。在孵化后第1d观察到了肾组织,主要由肾小管组成。尔后头肾的发育经历了三个结构和功能的转变。第一个阶段为孵化后第1d到第7d,头肾作为滤过性器官存在,由肾小管及少量淋巴细胞组成。第二个阶段从第8d到第36d,是一个功能混合型阶段,头肾中既有肾小管,又有造血组织;随时间推移,肾小管数量减少,淋巴细胞数量剧增。紧接着进入第三个阶段:肾小管完全消失,头肾中开始出现大量的嗜铬细胞,头肾作为淋巴-肾上腺组织而存在。肾上腺首先出现在头肾前端,随发育成熟,集中分布于头肾门静脉周围。IgM在鳜头肾中大量表达,IgM分泌细胞分布于整个头肾组织,在血管周围有集中趋势[动物学报51(3):440-446,2005]。 展开更多
关键词 鳜鱼 头肾结构 组织发生 B淋巴细胞 分布 原位PCR法
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柱状黄杆菌胞外多糖对草鱼的免疫促进作用 被引量:3
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作者 刘毅 谢海侠 +3 位作者 昌鸣先 隗黎丽 姚卫建 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期683-689,共7页
将柱状黄杆菌胞外多糖(EPS)溶液经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后,分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA,并通过RT-PCR半定量的方法检测不同组织中C-反应蛋白(CRP)、白介素1(IL-1)、... 将柱状黄杆菌胞外多糖(EPS)溶液经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后,分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA,并通过RT-PCR半定量的方法检测不同组织中C-反应蛋白(CRP)、白介素1(IL-1)、主要组织相容性复合体I(MHC I)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素(IFN)等5种免疫基因的表达情况。结果显示,CRP在受免鱼肝脏中的表达显著上升;MHC I在受免鱼脾脏、体肾中的表达显著下降;IgM在受免鱼4种组织中的表达皆显著上升;IL-1在受免鱼4种组织中的表达与对照组没有显著差异;无论受免组还是对照组都只能检测到微弱的IFN表达,且两组之间没有显著差异。结果表明,柱状黄杆菌EPS对草鱼的先天免疫能力以及特异性体液免疫能力具有促进作用。 展开更多
关键词 胞外多糖 柱状黄杆菌 草鱼 免疫促进 免疫基因
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鳜鱼消化道内寄生强壮粗体虫的形态学及致病机理的初步观察
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作者 谢海侠 《鱼类病害研究》 2001年第2期7-10,共4页
关键词 鳜鱼 消化道 寄生虫 强壮粗体虫 形态 致病机理
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柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达
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作者 张立强 谢海侠 +1 位作者 李楠 聂品 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期786-790,共5页
利用PCR方法从柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因(GenBank登录号EF501979)。同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因(GenBank登录号EAZ95511.1)最为相近,有84%的一致性和93%的相似性。... 利用PCR方法从柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因(GenBank登录号EF501979)。同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因(GenBank登录号EAZ95511.1)最为相近,有84%的一致性和93%的相似性。该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsoniae)和嗜冷黄杆菌(F.psychrophilum)都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%。该基因经KpnI和SalI酶切后连接到表达载体pET-32a上,转入大肠杆菌BL21(DE3)plysS内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在44kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不溶的包涵体形式存在,变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔抗柱状黄杆菌胶原蛋白酶抗体,Western blotting表明该胶原酶在柱状黄杆菌的胞内和胞外都存在。这些结果为进一步研究这种胶原蛋白酶的功能及柱状黄杆菌的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 胶原蛋白酶 克隆 表达
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嗜水气单胞菌asd-1基因功能研究 被引量:1
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作者 张立强 贺甜甜 +3 位作者 艾桃山 谢海侠 魏朝辉 丁桂珍 《湖北农业科学》 2016年第10期2667-2670,共4页
asd-1基因编码天冬氨酸半醛脱氢酶,该酶可影响革兰氏阴性菌的细胞壁正常合成。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)asd-1基因的功能,采用Overlap PCR方法敲除该基因,结果显示asd-1基因的敲除明显降低了嗜水气单胞菌的生长速度,... asd-1基因编码天冬氨酸半醛脱氢酶,该酶可影响革兰氏阴性菌的细胞壁正常合成。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)asd-1基因的功能,采用Overlap PCR方法敲除该基因,结果显示asd-1基因的敲除明显降低了嗜水气单胞菌的生长速度,但是不会导致突变株对二氨基庚二酸(DAP)的强制需求,进一步对氨基酸序列分析表明asd-1蛋白质较迟缓爱德华氏菌、鲶爱德华氏菌的asd A蛋白质多出3个氨基酸,其中Asn-257导致asd A蛋白质中的关键活性位点Arg-267在asd-1蛋白质中改变为Val-267,该研究表明嗜水气单胞菌的asd-1基因突变显著降低其生长速度。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) asd-1基因 生长速度 二氨基庚二酸(DAP)
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一种利用λRed重组技术在杀鱼爱德华氏菌基因组添加标签的方法
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作者 张淑雅 李端友 +3 位作者 刘莹莉 贺甜甜 聂品 谢海侠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期895-902,共8页
在杀鱼爱德华氏菌病原学研究中,在动物中制备杀鱼爱德华氏菌蛋白抗体耗时长,且获得的多克隆或多肽抗体在宿主细胞中特异性差,背景信号强。为解决这一问题,对在大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)中建立起来的λRed基因... 在杀鱼爱德华氏菌病原学研究中,在动物中制备杀鱼爱德华氏菌蛋白抗体耗时长,且获得的多克隆或多肽抗体在宿主细胞中特异性差,背景信号强。为解决这一问题,对在大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)中建立起来的λRed基因编辑方法进行调整和优化,建立了在杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)基因组基因上添加HA标签序列的方法,为使用标签抗体研究杀鱼爱德华氏菌基因功能提供便利。λRed重组系统利用同源线性DNA片段与基因组DNA进行重组。即以质粒pSU315为模板,在引物上引入目的基因的特异性序列,扩增FRT序列和抗生素抗性基因;以获得的PCR产物转化携带pKD46的杀鱼爱德华氏菌,在pKD46表达的λ噬菌体的3个重组蛋白(Exo、Beta和Gam)作用下,PCR产物与杀鱼爱德华氏菌基因组发生同源重组,获得引入了抗生素抗性的靶基因缺失或靶基因携带标签序列的菌株;接着利用pKD46的温敏型特性,消除引入的pKD46;最后向杀鱼爱德华氏菌引入文章构建的表达Flp重组酶的质粒pKD46-flp,在FLP作用下,两个FRT位点之间发生重组,消除抗生素抗性基因和一个FRT位点,获得携带一个FRT位点序列、靶基因缺失或靶基因添加标签序列的杀鱼爱德华氏菌菌株。该遗传操作平台的建立为杀鱼爱德华氏菌基因功能研究提供便利条件,亦为其他水产病原细菌遗传操作方法的建立提供借鉴。 展开更多
关键词 λRed重组 基因组基因标签序列添加 pKD46-flp 杀鱼爱德华氏菌
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鲤CISH基因克隆鉴定与组织特异性表达分析
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作者 杨慧 周杰 +4 位作者 高谦 刘明丽 翟万营 陈良标 谢海侠 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期491-499,共9页
克隆得到长度为1685 bp的鲤(Cyprinus carpio)CISH基因(Cytokine inducible SH-2 containing protein,CISH)的cDNA全长序列,开放阅读框(ORF)长666 bp,编码221个氨基酸,预测蛋白质分子量为24.91 ku。鲤CISH基因具有典型的SOCS家族结构特... 克隆得到长度为1685 bp的鲤(Cyprinus carpio)CISH基因(Cytokine inducible SH-2 containing protein,CISH)的cDNA全长序列,开放阅读框(ORF)长666 bp,编码221个氨基酸,预测蛋白质分子量为24.91 ku。鲤CISH基因具有典型的SOCS家族结构特征,含有N区、中央SH2结构域和C端SOCS box结构域。系统进化分析表明,鲤CISH与同属鲤科的草鱼(Ctenopharyngodon idella)和斑马鱼(Danio rerio)的亲缘关系最近。鲤CISH基因的mRNA表达水平在血液中最高,肝脏中最低。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后,鲤CISH基因在血液中表达量在12~24 h出现显著上升,在第48小时恢复正常水平,暗示鲤CISH基因在抵抗细菌感染过程中起作用。 展开更多
关键词 细胞因子信号转导抑制因子 CISH CDNA全长 组织表达
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