EGCG联合不同剂量放疗对人肝癌细胞系HepG2中hTERT表达的影响

目的:研究相同剂量表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达的影响,探讨EGCG成为放疗增敏剂的作用.方法:用MTT比色法检测EGCG对HepG2细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测EGCG诱导HepG2的细胞凋亡,从而找到合适的EGCG(25μmol/L)剂量用于观察其放射效果的实验;采用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0、2、4、6Gy)联合EGCG和不联合EGCG治疗后,HepG2中hTERT基因的表达.放疗用直线加速器6MVX线.结果:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡的作用.同时,不同剂量放疗联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2中hTERT基因的表达比较,空白组无显著差异;2Gy组、4Gy组、6Gy组均有显著差异(hTERT基因表达的扩增倍数:0.477±0.025vs0.973±0.024;1.110±0.083vs1.382±0.051;1.174±0.128vs1.452±0.109,P<0.01或0.05),并以2Gy组最为显著.结论:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的作用;EGCG联合不同剂量放疗可能下调HepG2中hTERT基因水平,从而抑制端粒酶活性,以放射剂量为2Gy时显著,因此,EGCG有可能成为放疗增敏剂.

cry基因保守序列克隆及其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达(英文)

[目的]对 cry 基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌 Rosetta(DE3)中进行表达。[方法]根据 NCBI 数据库信息设计引物序列,采用PCR 技术从抗虫棉基因组 DNA 中扩增出抗虫基因 cry 的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌 Rosetta(DE3)菌株中,利用 pGEX 原核表达系统诱导蛋白表达。同时,分析了不同 IPTG 浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响。[结果]扩增出抗虫基因 cry 的两段保守序列,长度分别为304 和 853 bp;SDSPAGE 检测结果显示,经 IPTG 诱导后重组质粒 pGEX4t1304 和 pGEX4t1853 成功地表达了大量 GST 融合蛋白,分子量分别为39 和 62.4 kDa,与预期结果一致;确定了 IPTG 最佳诱导浓度为 0.15 mmol/L,最佳诱导时间为 7 h。[结论]为今后检测转 Bt 基因农作物奠定了基础。

cry基因保守序列克隆及其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达

[目的]对cry基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列,采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中,利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达。同时,分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响。[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列,长度分别为304和853 bp;SDS-PAGE检测结果显示,经IPTG诱导后重组质粒pGEX-4t-1-304和pGEX-4t-1-853成功地表达了大量GST融合蛋白,分子量分别为39和62.4 kDa,与预期结果一致;确定了IPTG最佳诱导浓度为0.15 mmol/L,最佳诱导时间为7h。[结论]为今后检测转Bt基因农作物奠定了基础。

TNF-α与肥胖相关胰岛素抵抗的研究进展

肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是一种在肿瘤细胞中发挥细胞毒性作用的肽类物质，曾经被认为在体内可使体重减轻而在体外又可促进脂肪生成。1993年，首次在啮齿类动物的脂肪组织中发现了TNF-α，它在肥胖动物模型中的表达量呈显著增加，并且在肥胖人的脂肪组织中也过量表达，而缺乏TNF-α或其受体的肥胖小鼠胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）改善。因而初步确定TNF-α也是由脂肪细胞分泌的一种促炎症因子，不仅发挥介导免疫反应、细胞凋亡和存活、细胞毒性以及其他细胞因子的产生的作用，而且与肥胖相关IR的发生密切关联。现将TNF-α与肥胖相关IR的研究进展综述如下。

正交设计优化南苍术快速繁殖培养基的研究

[目的]保护野生苍术资源,并为南苍术工厂化生产提供技术指导。[方法]以南苍术[Atractylodes lancea(Thunb.)DC]种子为材料得到无菌试管苗,应用正交试验法研究6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、激动素(KT)及其配比对南苍术无菌苗增殖的影响;同时研究了NAA浓度对南苍术苗生根的影响;以泥土、河沙、棉籽壳为材料,采用正交试验法设计9种轻型基质配方,研究其对南苍术生长的影响。[结果]适合南苍术试管苗增殖的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+KT 0.4 mg/L;适合南苍术生根的培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L;最适基质配比为泥土∶河沙∶棉籽壳=3∶3∶2(体积比)。[结论]筛选出了南苍术增殖培养和生根的最佳配方,以及基质的最佳配比,为苍术资源的实验室保存和种苗工厂化生产提供了技术依据。

应用正交设计优化南苍术快速繁殖培养基的研究(英文)

[目的]为保护野生苍术资源,并为南苍术工厂化生产提供技术指导。[方法]以南苍术(Atractylodes lancea(Thunb.)DC)种子为材料得到无菌试管苗,应用正交试验法L(934)研究6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、激动素(KT)及其配比对南苍术无菌苗增殖的影响;NAA浓度对南苍术苗生根的影响;以泥土、河沙、棉籽壳为材料,采用正交试验方法设计9种轻型基质配方,研究其对南苍术生长的影响。[结果]适合南苍术试管苗增殖的培养基为MS+6RR鄄BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L+KT0.4mg/L;适合南苍术生根的培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L;最适基质配比为泥土:河沙:棉籽壳(体积比)=3:3:2。[结论]筛选出了南苍术增殖培养,生根的最佳配方,基质的最佳配比,为苍术资源的实验室保存和种苗工厂化生产提供了技术依据。