温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因分布及遗传多样性研究

目的了解温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因分布及遗传多样性特征。方法对温州市食品及食源性疾病腹泻病人中分离得到的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行生物型、血清型和耐药性分析,并基于全基因组测序进行菌株的毒力基因、多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)分析。结果71株食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌,94.4%(67/71)的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5占比最高(29.6%,21/71)。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到95.8%以上。共获得了16种126个毒力基因,其中2株菌株携带pYV质粒和染色体相关毒力基因。分离株以ST3型最常见(31.6%,12/38),cgMLST分析显示除具有相同ST型的菌株外,菌株无明显基因型簇形成。结论温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌存在致病性菌株,菌株呈高度遗传多态性,需加强此类菌株的监测,以预防其引起食源性疾病的暴发。

三种痰涂片前处理方法的染色及消毒效果评价

目的 :评价紫外线照射、次氯酸钠溶液消毒及高压蒸汽灭菌三种抗酸染色痰涂片前处理方法的效果。方法:将痰液混匀后分别采用三种方法处理。紫外线照射法是将涂片置于生物安全柜内紫外灯下,分别照射10、20、40、60、80 min;次氯酸钠溶液消毒法是向痰液中加入等量次氯酸钠溶液处理10～15 min后,采用离心及过夜沉淀两种方式集菌;高压蒸汽灭菌法将痰液高压灭菌后离心取沉淀。处理之后,再分别进行萋-尼氏抗酸染色、镜检并接种于改良罗氏培养基上培养。结果:紫外线照射不影响涂片抗酸染色镜检,当辐照剂量达到1 195 200～1 296 000μw.s/cm2时,培养均为阴性;次氯酸钠溶液消毒组其镜检结果分级低于对照组(P<0.05),该组所有培养均为阴性;高压蒸汽灭菌组镜检结果分级高于对照组(P<0.05),但在染色过程中,痰膜易脱落。结论:利用紫外线消毒痰涂片辐照剂量要达到1 195 200μw.s/cm2;有效氯浓度为50 g/L的次氯酸钠溶液处理痰液10～15 min可有效杀灭痰液中的分枝杆菌,但对抗酸染色镜检结果有一定的影响;高压蒸汽灭菌法安全,集菌效果显著,但染色时应谨防痰膜脱落。

温泉水中嗜肺军团菌污染调查及分子分型研究

目的探讨温泉水环境中嗜肺军团菌的污染状况和分布规律,了解其主要血清型别及基因型别。方法采取随机抽样方法采集温泉场所蓄水池、温泉池、客房淋浴水等,浓缩后用细菌培养法分离得到可疑菌株,用血清学与荧光定量PCR技术进行嗜肺军团菌的鉴定。对分离的菌株用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型方法(SBT)进行基因分型。结果65份温泉水中35份检出嗜肺军团菌,检出率为53.85%。嗜肺军团菌计数范围在20CFU/100mL-16 000CFU/100mL之间。血清分型以LP1、LP3为主。分离的嗜肺军团菌菌株均携带dot基因。对40株嗜肺军团菌菌株进行了PFGE聚类分析,得到10种不同的带型。40株菌株13种ST型可以被分为3个克隆群和1个单态群。结论本地区温泉水嗜肺军团菌污染程度较高,分子分型结果表明这些菌株具有遗传多样性。

基于全基因组测序的甲型副伤寒沙门菌暴发疫情分离株分子特征研究

目的分析一起甲型副伤寒暴发疫情菌株的分子分型特征,为病原菌的确定和暴发疫情的防控提供科学依据。方法利用生化试验、血清学试验对病原菌进行鉴定,并将分离到的病原菌进行微量肉汤稀释法药物敏感性试验、PFGE分子分型分析、全基因组测序,利用全基因组数据与沙门菌MLST标准数据库比对获得序列型别(ST)、cgMLST序列号以及rMLST序列号并进行聚类分析,通过细菌基因组分析平台fIDBA分析病原菌的耐药、毒力相关基因。结果11株沙门菌血清型均为甲型副伤寒沙门菌,具有100%相似性的PFGE带型,MLST、cgMLST、rMLST的型别均分别为ST129型、cgST-2191型、rST3678型,表明此次暴发疫情菌株从分子特征角度可诊断为同一传染源导致。对萘啶酸100%耐药,对链霉素100%中介。发现本次疫情菌株基因组均携带29种耐药基因。通过毒力因子数据库比对,均携带21类250种已知毒力基因,其中以Ⅲ型分泌系统、粘附、鞭毛等最为常见。结论本次暴发疫情是由共同来源的、具有相同分子分型特征的甲型副伤寒沙门菌引起。在病原溯源研究中,应用全基因组数据可更精细分析菌株遗传进化特征、亲缘关系及毒力基因、耐药基因携带情况,可以作为替代PFGE、MLST的技术用于更精准的传染病分子流行病学调查分析研究。

2006-2021年温州地区沙门菌感染流行病学特征分析

目的分析2006—2021年温州地区沙门菌感染流行病学特征,为沙门菌感染的防控提供科学依据。方法对沙门菌进行鉴定确认和血清学分型,并对流行病学特征进行深入分析。结果2006—2021年在温州地区42300份食源性疾病腹泻患者中,共分离出沙门菌1232株,总分离率为2.91%,共鉴定出90个血清型(14个血清群),其中菌群以O:4(B)、O:9(D1)、O:3,10(E1)、O:8(C2-C3)、O:7(C1)为主;血清型以鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伦敦沙门菌和德尔卑沙门菌为主;18~60岁、61岁以上和小于2岁婴幼儿是感染的主要人群;春、夏、秋季易感,具有明显的季节性;5~11月是食源性沙门菌检出的高峰期。结论温州地区沙门菌感染在季节分布、人群分布等方面具有明显的流行病学特征,应该继续加强食源性疾病监测,进一步提高食品安全隐患的早期识别、预警与防控能力。

温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状与病原特征分析

目的 了解2020年—2021年温州市畜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的污染现状及病原特征。方法 对2020年—2021年温州市食品安全风险监测中的畜肉样本进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定、血清分型、生物分型、毒力基因检测、耐药性分析和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 356份样本共检出小肠结肠炎耶尔森菌31株,检出率为8.71%。分离菌株血清型以O:5型为主,生物型以1A型为主。检出1株4/O:3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF,其余菌型菌株仅携带ystB或不携带任何毒力基因。分离株对头孢西丁、磺胺异恶唑耐药率最高,为32.26%,多重耐药株有4株,占12.90%。31株分离株经PFGE分型,共获得31种带型。结论 小肠结肠炎耶尔森菌是温州市畜肉中的潜在污染源,菌株耐药率处于较低水平但存在多重耐药株,PFGE带型呈多态性分布。

温州市食品中沙门菌污染状况及特征分析

目的 了解温州市食品中沙门菌的污染状况,分析分离的沙门菌血清型分布、耐药性及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法 依据GB 4789. 4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行菌株分离鉴定及血清学分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,PFGE法进行分子分型。结果 6类食品2 039份样品中,37份样品检出沙门菌,检出率为1. 8%,其中生禽肉和生畜肉检出率较高,分别为6. 9%(20/290)和3. 4%(10/290)。37株沙门菌分属16种血清型,居前三位分别为鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌和肠炎沙门菌。81. 1%(30/37)的菌株对17种抗生素产生不同程度的耐药,呈现24种耐药谱,多重耐药率为56. 8%(21/37)。PFGE图谱分为31种PFGE带型,呈多态性。结论 沙门菌在温州市食品中存在一定的污染率,耐药情况形式严峻,PFGE图谱的聚集性与沙门菌的血清型有一定的联系,与耐药谱之间的关联性并不明确。

温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究

目的了解温州市食品中金黄色葡萄球菌的污染状况,分析分离的金黄色葡萄球菌的耐药性、毒力基因分布及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.10—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行菌株分离鉴定,采用纸片法进行药敏试验,mini-VIDAS法和聚合酶链式反应(PCR)法分别进行肠毒素及其基因的检测,PFGE法进行分子分型。结果 4类食品388份样品中有16份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为4.12%,其中生畜肉和生禽肉检出率较高,分别为13.89%(5/36)和11.11%(4/36)。所有菌株均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(100.00%,16/16),其次为红霉素(56.25%,9/16),多重耐药率为18.75%(3/16),未检出对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌肠毒素及其基因检测阳性率均为56.25%(9/16),其中seb、seg基因检出率较高,均为37.50%(6/16)。PFGE图谱分为12种PFGE带型。结论金黄色葡萄球菌在温州市食品中存在一定的污染率,且具有分子多态性、产肠毒素率及毒素基因携带率较高的特征,提示存在潜在的食品安全隐患。

温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分布及分子分型研究

目的 了解温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分子分型及分布特征。方法 4℃增菌后用选择性培养基对食品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行分离鉴定,分析阳性菌株的生物型、血清型、毒力基因型、耐药性和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子型别。结果 采集6类食品,共676份样品,其中68份样品检出69株小肠结肠炎耶尔森氏菌,检出率为10.1%(68/676)。调理肉制品检出率最高(20.5%,9/44),其次为速冻食品(17.2%,11/64)。95.7%(66/69)的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5(29.0%)为主,其次为1A/O∶8(14.5%);88.4%(61/69)的菌株仅携带ystB基因,检出1株4/O∶3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到94%以上。32株血清已分型菌株,分为29种PFGE带型。结论 温州市食品中存在一定程度的小肠结肠炎耶尔森氏菌污染,且检出致病性小肠结肠炎耶尔森菌,菌株耐药率处于较低水平,分子分型提示菌株呈高度遗传多态性。

温州市售奶粉微生物污染状况调查

目的了解温州市售奶粉微生物污染情况。方法采集温州市售奶粉样品,并依据相关国家标准进行各类细菌的分离培养及生化鉴定。结果共采集304份奶粉样品,11.84%的奶粉存在不同程度的嗜冷微生物污染;分离出9种共98株菌株,总检出率为32.24%;蜡样芽胞杆菌检出率最高,达20.39%;肠杆菌科检出率为6.91%,主要为非脱羧勒克菌、泛菌属、阴沟肠杆菌;阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌检出率分别为1.32%、1.64%;未检出沙门菌、单核细胞增生李斯特菌及铜绿假单胞菌。结论温州市奶粉嗜冷微生物污染情况不容忽视,并存在以蜡样芽胞杆菌及肠杆菌科为主的多种细菌污染,会对健康造成潜在危害。

温州市食源性金黄色葡萄球菌耐药分析及肠毒素、毒素基因研究

目的了解温州市食源性金黄色葡萄球菌的耐药趋势、肠毒素及其基因分布情况,为金黄色葡萄球菌食源性疾病的预防控制提供参考。方法采用纸片法进行药敏试验,用mini-VIDAS法和PCR法分别进行肠毒素及其基因的检测。结果 100株金黄色葡萄球菌,其中97株(97.00%)均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(92.00%),其次为甲氧苄啶(42.00%)、红霉素(34.00%),多重耐药率达29.90%;43株(43.00%)肠毒素阳性,奶粉及餐食阳性率较高;40株检出肠毒素基因,总检出率为40.00%,其中seb基因检出率最高。形成16种基因组合,以seb基因型为主(10.00%),同时检出2种及以上肠毒素基因的菌株占20.00%。结论温州市食源性金黄色葡萄球菌具有较强耐药性,且其产肠毒素率及毒素基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。

温州市市售奶粉蜡样芽胞杆菌污染情况调查及毒力基因分析

目的了解温州市市售奶粉中蜡样芽胞杆菌的污染状况及毒力基因的携带情况。方法采集温州市市售奶粉样品,依据国家标准GB 4789. 14—2014进行蜡样芽胞杆菌分离鉴定,并采用PCR法对分离株进行毒力基因检测。结果 400份奶粉样品,共检出76株蜡样芽胞杆菌,检出率为19. 00%。其中复合型非溶血性肠毒素nhe基因、溶血素BL基因携带率分别为75. 00%、21. 05%,2. 63%菌株携带呕吐毒素基因,非溶血性基因nhe基因与肠毒素FM基因为主要毒力基因。结论温州市市售奶粉存在一定程度的蜡样芽胞杆菌污染,且分离的蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。

紫外线消毒未染色抗酸杆菌涂片的效果观察

目的观察紫外线消毒未染色抗酸杆菌涂片的效果。方法将涂片置于LABCONCO B2生物安全柜内紫外灯下,进行垂直照射,痰涂片分别照射10 min,20 min,40 min,60 min,80 min,结核菌菌悬液涂片分别照射5 min,10 min,20 min,30 min,40 min,然后进行萋-尼氏抗酸染色、镜检并接种于改良罗氏培养基上培养。结果紫外线照射对涂片抗酸染色镜检没有影响;痰涂片经紫外线照射照射60 min后,培养阴性;结核菌菌悬液涂片经紫外线照射照射40 min后,培养阴性。结论利用生物安全柜中紫外灯照射涂片,照射时间应至少60 min。

温州市单核细胞增生李斯特菌的毒力基因及血清学分型和分子分型研究

目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 97株单核细胞增生李斯特菌分离株分为4种血清型,以血清型1/2b、1/2a为优势血清型,占比分别为48.45%(47/97)、35.05%(34/97);而毒力基因iap、prfA基因阳性率均为100.00%(97/97),hlyA、inlA基因阳性率均为97.94%(95/97),plcB基因阳性率为96.91%(94/97)。其中患者分离株5种毒力基因阳性率均为100.00%(6/6)。97株单核细胞增生李斯特菌分离株得到20个MLST型别,其中ST87型是优势型别,其次为ST121和ST9,ST1和ST779型是患者特有的,ST2、ST3、ST5型分布于食品和患者分离株。结论温州市不同来源的单核细胞增生李斯特菌分离株分子型别呈多态性,食品和患者分离株存在相同的ST型,且这些菌株大部分携带毒力基因,具有潜在的致病性,因此食品中单核细胞增生李斯特菌污染的潜在风险不容忽视。

温州地区艾滋病感染者和病人合并感染乙肝、丙肝、梅毒等疾病的研究

目的:研究艾滋病感染者和病人(HIV/AIDS)合并感染乙型病毒性肝炎(HBV)、丙型病毒性肝炎(HCV)、梅毒(TP)的流行现状及其特点,为HIV/AIDS的防控和治疗提供科学依据。方法:选取2008年-2010年期间在温州实验室确认阳性的艾滋病感染者和病人的标本共678例,采用ELISA法,分别对标本进行乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒抗体项目检测。结果:其中,合并感染乙肝的有102例(15.04%),感染丙肝84例(12.38%),感染梅毒145例(21.38%);同时感染乙肝、丙肝的有13例(1.91%),感染乙肝、梅毒有31例(4.57%),感染丙肝、梅毒的有13例(1.91%),同时感染乙肝、丙肝、梅毒的2例(0.29%)。结论:1、HIV感染者中HBV感染率略高于普通人群;HIV与HCV合并感染率显著高于普通人群,但低于国内外报道的HIV/HCV的30%以上;HIV与TP合并感染的比例显著高于普通人群以及其他地区艾滋病患者。2、合并感染的总体趋势有所控制。

婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌污染调查及分子分型研究

目的了解温州市市售婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌污染情况及分子分型特征,分析不同菌株间亲缘相关性。方法参照GB 4789.40—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》方法在食品中分离鉴定克罗诺杆菌。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对克罗诺杆菌进行分型研究。结果2013—2017年共采集737份婴幼儿食品和配方奶粉,克罗诺杆菌总检出率为6.1%(45/737)。其中婴幼儿谷类辅助食品检出率最高(23.4%,37/158)。45株克罗诺杆菌属于阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)、丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus)和莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。其中阪崎克罗诺杆菌最多(73.3%,33/45),其次为丙二酸盐克罗诺杆菌(24.4%,11/45)。MLST共分为25个ST型,其中ST64、ST1、ST40、ST4和ST7为优势型别。45株克罗诺杆菌PFGE分型得到38个带型,未发现有明显的优势分型和聚集现象。PFGE型和MLST型结果分析表明,绝大数具有相同PFGE型的菌株也有相同的MLST型,而相同MLST型却不一定具有较高的亲缘关系。结论温州市市售婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌的污染状况较轻,其中婴幼儿谷类辅助食品检出率最高。食品来源的克罗诺杆菌图谱具有高多态性和离散性。

温州市沙门菌血清型、耐药性和PFGE指纹图谱研究

目的了解2017年温州市沙门菌的血清型、耐药情况和PFGE指纹图谱。方法对分离自腹泻病例的77株沙门菌进行血清分型;采用微量肉汤稀释法对优势菌株进行12种抗生素的药敏试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行指纹图谱分型研究。结果 77株沙门菌共分为23种血清型,优势血清型为鼠伤寒沙门菌,22株占28.58%;肠炎沙门菌,11株占14.29%。33株优势血清型沙门菌对氨苄西林耐药率最高(84.85%),其次为四环素(69.70%)和萘啶酸(63.64%);多重耐药14株,占42.42%;除氨苄西林、萘啶酸外,鼠伤寒沙门菌的耐药率普遍高于肠炎沙门菌。22株鼠伤寒沙门菌可分成16种PFGE指纹图谱;11株肠炎沙门菌分成3种PFGE指纹图谱。结论温州市食源性沙门菌的血清型分布广泛,耐药状况严重,PFGE指纹图谱呈多样性,其聚集性与血清型存在关联性。

温州市禽肉中空肠弯曲菌检测结果及耐药性分析

目的了解温州市农贸市场禽肉中空肠弯曲菌污染现状及耐药情况,为禽肉类食品安全风险评估、弯曲菌病防控和临床用药提供依据。方法于2018年2月—2019年10月从温州市鹿城区、龙湾区、瓯海区、瑞安市、苍南县、平阳县和文成县7个县(市、区)的农贸市场采集禽肉样品。采用双孔滤膜法检测空肠弯曲菌,并进行药敏试验。结果共采集样品200份,检出空肠弯曲菌66份,检出率为33.00%。鸡肉中检出空肠弯曲菌45份,检出率为34.09%;鸭肉中检出空肠弯曲菌21份,检出率为30.88%,不同样品空肠弯曲菌检出率差异无统计学意义(P>0.05)。鹿城区、平阳县和苍南县空肠弯曲菌检出率最高,均为35.00%,不同采样地区空肠弯曲菌检出率差异无统计学意义(P>0.05)。多重耐药38株,多重耐药率为57.58%,以萘啶酸、四环素和环丙沙星耐药率较高,分别为84.85%、83.33%和80.30%。结论温州市农贸市场禽肉空肠弯曲菌污染较重,且对萘啶酸、四环素、环丙沙星等多种抗生素有显著耐药性。

不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌污染情况分析

目的对不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌污染情况进行调查分析,为预防和控制食源性疾病暴发和流行提供科学依据。方法依据GB 4789.4—2010、GB 4789.38—2012和SN/T 0738—1997标准检测不同来源熟肉制品肠杆菌科细菌。结果检测样品160份,合格69份,合格率为43.1%,共检出肠杆菌科细菌133株,居前2位的分别为肺炎克雷伯菌肺炎亚种和大肠埃希菌。定型包装合格率高于散装,网络食品和超市合格率高于农贸市场和零售店,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论本市熟肉制品被肠杆菌科细菌污染的程度较为严重,监督部门应加强熟肉制品在各个环节的监管力度,规范熟肉制品加工制作卫生行为,减少食源性疾病的发生,从而保障本市人民的饮食卫生和生命安全。