注射用灯盏花素Beagle犬和小鼠安全药理学差异性研究

目的观察注射用灯盏花素对Beagle犬呼吸系统、心血管系统以及ICR小鼠协调功能和自发活动的影响,考察药物可能关系到人安全性的非期望药理作用。方法 24只Beagle犬雌雄各半,按体重随机分为10、30、90 mg·kg-1和溶媒对照组,每组6只,平行测定动物给药前和给药后2 min、30 min、1 h、2 h及4 h的心电图、呼吸、血压及肛温;ICR小鼠80只雌雄各半,其中40只按体重随机分为10、100、500mg·kg-1和溶媒对照组,分别尾静脉给予不同剂量注射用灯盏花素后观察动物机体协调能力;另外40只同样分组测定给药后不同时间点的小鼠自发活动次数。结果相同时间点各剂量组与溶媒对照组及给药前自身比较发现,Beagle犬心电指标、体温、收缩压、舒张压和平均动脉压均有一定程度的波动,但差异无统计学意义(P>0.05)。ICR小鼠给药后高剂量组出现闭眼和运动减少等反应,1 h左右恢复正常;与溶媒对照组比较,各组动物协调功能差异没有统计学意义(P>0.05),高剂量组雌雄小鼠给药后2 min和30min自发活动次数均有下降的趋势,雌鼠给药后2 min自发活动次数明显减少(P<0.05)。结论在本实验条件下,单次静脉给予注射用灯盏花素对Beagle犬的呼吸、心血管系统及体温无明显影响。单次给予注射用灯盏花素对小鼠协调功能无明显影响,500 mg·kg-1注射用灯盏花素对雌性小鼠在2 min时会产生一过性的轻度躯体运动障碍或中枢抑制作用。

^(131)Ⅰ-单克隆抗体对人卵巢癌细胞株OC-3-VGH裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:探索^(131)Ⅰ-单克隆抗体对人OC-3-VGH卵巢癌裸鼠肿瘤的抑制作用。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将28只移植瘤模型裸鼠随机分成7组,即阴性对照组(等体积生理盐水)、60mg/kg环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)阳性组、单抗高131131131(10mg/kg)、低(2mg/kg)剂量组、I-单抗高剂量组(10mg/kg+125μCi)、^(131)Ⅰ-单抗中剂量组(6mg/kg+75μCi)、^(131)Ⅰ-单抗低剂量组(2mg/kg+25μCi),各组连续腹腔给药14d,分别在第0天(d0)、d4、d8、d12、d15称量裸鼠体质量,测量肿瘤体积,于末次给药后13124h,剖瘤称取质量,计算相对肿瘤增殖率和抑瘤率。结果:与阴性对照组相比,单抗高剂量组、I-单抗中、高剂量组均显著抑制肿瘤生长,相对肿瘤增殖率分别是54%、48%、30%,抑瘤率分别为33.59%、45.80%、64.89%,差异均具有统计学意义131131(P<0.01),单抗高剂量组与I-单抗高剂量组间的差异也具有统计学意义(<0.05)。结论:单克隆抗体和^(131)Ⅰ-单克隆抗体对人OC-1313-VGH卵巢癌均有明显的抑制作用,^(131)Ⅰ-单克隆抗体高剂量组有明显的增效作用。

人OC-3-VGH卵巢癌细胞裸小鼠肿瘤模型的建立

目的建立人OC-3-VGH细胞株卵巢癌裸小鼠模型并观察该肿瘤生物学生长特性。方法OC-3-VGH细胞株复苏后加入10 mL RPMI-1640培养液,放入培养箱,传2～3代后,取细胞悬液,均以4×106个细胞,每只0.2 mL分别接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2月后处死取材,观察肿瘤生长特性和转移情况。结果皮下接种一周后,裸鼠长出肿瘤,并随时间而增大,体积呈指数增长,第42天始,明显增大(P<0.05)。组织学检查发现裸鼠皮下肿瘤细胞均细胞体积较大,细胞核大而染色深,核分裂相较多、异型性明显,接种2个月时,未发生其他组织转移。结论建立了新的卵巢癌动物模型,并初步研究了其生物学特性,为卵巢癌治疗方法的研究拓宽了道路。

三种固定液对眼球组织固定效果的比较研究

目的从甲醛-戊二醛混合液、Davidoson液和10％福尔马林三种固定液中优选一种，用于对眼球组织的固定。方法取SD大鼠和新西兰兔的双侧眼球，分别用三种固定液固定，然后做成5μm厚的切片并HE染色，观察各自的组织结构及染色效果。结果用甲醛一戊二醛混合液固定的眼球组织，大鼠眼球切片厚度5μm，而新西兰兔切片时厚度8μm，才能切出完整的切片；Davidoson液和10％福尔马林固定的眼球，切片厚度5μm即可。HE染色后，10％福尔马林固定的眼球组织结构不完整，而Davidoson液固定后的眼球，结构清晰、组织完整。结论Davidoson液对大鼠和新西兰兔的眼球固定效果均佳，甲醛-戊二醛混合液对大鼠眼球固定效果也较佳。

不同细胞株建立人前列腺癌裸小鼠移植模型及转移特性比较

目的比较人前列腺癌细胞DU145和CWR22Rv1(22Rv1)(下面简称22Rv1)分别在皮下和前列腺原位接种后的成瘤性和转移率。方法采用原位接种及皮下接种两种方法将前列腺癌细胞DU145和22Rv1分别接种于裸小鼠体内,以裸鼠出现恶液质、处于濒死状态作为观察终点,颈椎脱臼法处死。尸解并观察荷瘤部位肿瘤的生长情况及局部淋巴结自发性转移情况,并取皮下肿瘤、原位肿瘤、肝、肺、肾、膀胱、盆腔淋巴结标本,甲醛固定、石蜡包埋和HE染色后显微镜下观察。结果原位接种22Rv1组的裸小鼠成瘤率达到10/10,淋巴结转移率为9/10；原位接种DU145组的裸小鼠成瘤率达到10/10,而淋巴结转移率为1/10。两种细胞皮下接种法的裸小鼠成瘤率均达10/10,但未检测到任何淋巴结转移。结论对这两种细胞株采用原位接种法建立裸鼠人前列腺癌原位模型获得成功,用22Rv1细胞建立的原位模型淋巴结转移率高于DU145组,为前列腺癌转移机制的研究及筛药提供了模型。

OC-3-VGH卵巢癌细胞简捷培养方法的研究

目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响。方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml/只接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2个月后处死,取肿瘤组织制片,并与传统培养方法结果进行比较。结果:两种方法培养的细胞均生长活跃,皮下接种7d左右,裸鼠长出肿瘤,组织学检查未见明显差异。结论:改良细胞培养方法减少了传统方法的繁琐步骤,方便细胞培养。

比卡鲁胺抑制CWR22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌的机制研究

目的:探讨比卡鲁胺抗CWR22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌的作用机制。方法:采用瘤块接种的方法制作裸小鼠前列腺癌模型,观察比卡鲁胺治疗后的移植瘤重量和体积,并计算抑瘤率,收集移植瘤标本,使用光镜观察法、免疫组化法、基因芯片法和实时定量RT-PCR法比较比卡鲁胺组和阴性对照组肿瘤相关指标的差异。结果:①比卡鲁胺低、中、高剂量组抑瘤率分别为10.77%、37.32%和63.28%(P<0.01)。②光镜观察:对照组肿瘤内癌细胞生长旺盛,移植癌细胞保持原有异型性。而比卡鲁胺低、中和高剂量组呈腺癌典型表现,癌细胞出现不同程度的退变。③免疫组化:低、中、高剂量组增殖细胞核抗原增殖指数同阴性对照组相比明显减小(P<0.01)。对照组每200个细胞中平均有180±8个细胞雄激素受体(androgen receptor,AR)呈阳性表达,而高剂量组中AR阳性细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。④基因芯片:高剂量组在前列腺癌相关基因表达丰度上明显低于对照组,主要为AR和关联蛋白、细胞黏附分子和细胞周期相关基因,并且实时定量RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论:比卡鲁胺抗22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌效果显著,主要通过降低细胞核AR表达、减少细胞黏附、调控细胞周期和抑制细胞增殖等发挥作用。

GLP机构档案室的建立和管理与科研档案管理之比较

档案的建立和管理在药物非临床安全性评价和科学研究中都起到非常重要的作用。我们通过查阅文献发现,关于GLP机构档案管理的文献综述极少,涉及到将它与科研档案管理作系统全面的比较的文章是没有的。现从资料档案保存机构的硬件设施、档案管理规范和应注意的问题3个方面详细介绍了资料档案管理的相关规定和经验,并将GLP档案管理规范与科研档案管理规范作比较,我们根据国家档案局发布的《科学技术研究档案管理暂行规定》和7年GLP档案管理经验以及多次国家食品药品监督管理局(SFDA)认证现场检查的经历,总结出两者在功能实现、硬件设施、温湿度要求、档案防护、制定SOP、档案管理人员资质、各方人员职责、归档范围、归档形式、资料档案的接收与审查、归档时间、保管期限、借阅返还规定、资料的书写规范性、进出记录和电子文件的保存这16个方面的异同之处,突出GLP档案管理规范的特点和重点。通过这一深入全面的比较分析,得出GLP档案管理更加明确、具体、细致和可操作。

慢性非细菌性前列腺炎对大鼠生育力的影响

目的:探索2种慢性非细菌性前列腺炎对雄性SD大鼠生育力的影响。方法:通过造模的方式,将患有化学性前列腺炎(A组)的雄鼠和慢性自体免疫性前列腺炎(B组),按1∶1与雌鼠合笼交配,检查雄鼠的精子活力、雌鼠受孕率、仔鼠的生长发育和行为活动等指标;并以无前列腺炎的正常雄鼠为阴性对照(C组)进行比较。结果:与C组比,A组的精子活力明显下降且有统计学差异(P<0.05)。雄性大鼠所交配的雌鼠,其妊娠率和产仔数,仔鼠性别比例、外观畸形率及其死亡率,组间无统计学差异。结论:①慢性化学性非细菌性前列腺炎能明显降低雄鼠的精子活力,而慢性自体免疫性非细菌性前列腺炎并不降低雄鼠的精子活力;②两型慢性非细菌性前列腺炎对大鼠的妊娠率和产仔数、仔鼠性别比例、外观畸形率及其死亡率都不产生实质性影响。

睾丸组织固定法优选研究

目的:从福尔马林-蔗糖-醋酸混合液(FSA固定液)、Bouin液和福尔马林3种固定液中优选一种,用于对睾丸组织的固定。方法:取健康SD大鼠双侧睾丸,分别用3种固定液固定,然后制成5μm厚切片并行HE染色,观察不同方法固定睾丸组织结构及染色效果。结果:经福尔马林-蔗糖-醋酸混合液和福尔马林固定的睾丸组织结构较清楚,但组织易收缩,而经Bouin固定液固定的睾丸组织结构和染色效果俱佳。结论:3种固定液都可用于固定睾丸组织,以Bouin效果最好。