2018年~2021年河北省部分地区鸡源沙门菌的生物学特性及致病性研究

为调查河北地区鸡源沙门菌及其血清型的流行及分布情况,并分析其的致病性,本研究于2018年~2021年在河北省7个地区34个养鸡场共收集631份发病鸡肛拭子和62份病料样品共计693份,分别接种普通琼脂培养基分离细菌并纯化后经革兰氏染色镜检;将分离菌分别接种不同的培养基培养,并对分离菌经生化及16S r RNA基因的PCR及测序鉴定,随机选择32条测序序列经NCBI的BLAST比对,并采用DNAStar软件分析该基因的同源性。采用玻片凝集法鉴定分离菌的血清群及血清型并统计各血清群与血清型在河北不同地区的分布。结果显示,从693份病料样品中共分离到238株沙门菌,除3株未定群外,其余分离菌分属于A、B、C、D、E、F 6个血清群,其中D群最多达69.7%(166/238);238株沙门菌分属于7个不同的血清型和未定型,依次为鸡白痢沙门菌(91/38.2%)、甲型副伤寒沙门菌(43/18.0%)、鸡伤寒沙门菌(40/16.8%)、肠炎沙门菌(39/16.4%)等。血清群与血清型分布的统计结果显示,除张家口地区流行A群血清群外,其余地区流行的血清群均为D群;张家口地区流行鸡白痢沙门菌;秦皇岛地区有14种血清型,其中甲型副伤寒沙门菌为其流行血清型;石家庄、承德、唐山流行的均为鸡白痢沙门菌,邢台及保定地区分别流行肠炎沙门菌与鸡伤寒沙门菌。通过K-B药敏纸片法检测238株分离菌对7类共22种药物的敏感性;采用PCR检测分离菌的相关耐药基因并采用SPSS26.0软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。选取12株不同血清型的分离菌以0.2 m L/只(3×108cfu/mL)感染雏鸡,分析各分离菌对雏鸡的致病性。药敏试验结果显示,对苯唑西林、红霉素、青霉素、甲氧苄啶、氨苄西林、四环素耐药的菌株分别占97.5(232/238)、89.1%(212/238)、78.6%(187/238)、74.8%(178/238)、74.4%(177/238)、64.3%(153/238),对其它药物耐药的菌株均在32%以下,但均对头孢类药物敏感;且分离菌多呈多重耐药性(58.4%,139/238),耐6重药物的菌株(32.8%,78/238)与耐5重药物的菌株(11.8%,28/238)最多。耐药基因检测结果显示,对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类、四环素类、氨基糖苷类药物的耐药基因tem、erm(B)a、tetA、strA-B的检出率分别为100%(238/238)、75.2%(178/238)、71%(169/238)、65.6%(156/238)及31.9%(76/238)。未检测到喹诺酮类和醛胺醇类耐药基因。经分析,氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、β-内酰胺类、大环内酯类药物的耐药表型与其耐药基因的符合率分别为94.7%、98.1%、99.4%、97.5%、79.9%,相关性均较强。致病性试验结果显示,12株分离菌均能致感染鸡出现不同的临床症状及肝脏和肠道的剖检病变,且能对鸡造成不同程度的死亡,其中以致鸡死亡10只(100%)、7只(87%)为主,并从死亡鸡的肝脏再次分离到相应细菌。上述结果表明,本研究从河北不同地区分离的238株沙门菌血清群与血清型众多,大多数沙门菌的耐药性较强且多呈多重耐药性,其携带的5类药物的耐药基因与其相对应的耐药表型均呈较强的相关性,且分离菌对雏鸡呈不同的致病性。本研究为河北地区鸡源沙门菌的流行病学调查及其感染的防治提供参考依据。

2012年—2016年云南省部分地区规模猪场4种常见病毒感染情况的调查

为了解云南省部分地区4种常见病毒感染情况,2012年-2016年在云南省部分地区共采集1 632份样品,用PCR、RT-PCR进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的抗原检测。检测结果显示,CSFV的阳性率在2012年—2016年分别为16.27%、9.09%、9.09%、4.11%和7.14%,PRRSV的阳性率分别为13.16%、10.48%、29.93%、16.87%和29.58%,PRV的阳性率分别为2.38%、0.00%、2.65%、13.33%和1.37%,PVC2的阳性率分别为43.75%、37.25%、28.38%、53.06%和47.83%;有二重感染,其中PRRSV+PCV2最多,为6.32%,CSFV+PRV最少,为0.62%;三重感染CSFV+PRV+PCV2与PRRV+PRV+PCV2分别为0.71%和0.68%;无四重感染。CSFV、PRRSV、PRV、PCV2在滇中的阳性率分别为5.31%、28.33%、4.44%和48.62%,在滇南的阳性率分别为12.12%、20.37%、3.70%和29.03%,在滇西的阳性率分别为6.38%、20.41%、7.69%和47.37%,在滇东的阳性率分别为15.57%、7.58%、0.90%和27.27%。说明云南省规模猪场以上4种病毒感染比较严重,应加强监督和防控工作。

云南10种中草药水煎剂对猪源大肠杆菌体外抑菌实验

为了研究云南省10种中草药水煎剂对猪源大肠杆菌的体外抑菌作用,用两次煎煮法将黄芩、黄连、黄柏、当归、板蓝根、灯盏花、马蹄香、茯苓、白头翁、岩坨等10种云南主产中药材制成生药浓度为1g/ml的水煎液,用牛津杯法测定抑菌圈,试管法测定最小抑菌浓度(MIC)。结果显示当归、黄连、黄芩、白头翁水煎剂体外抑菌效果较好,抑菌圈分别为18、17、16、12cm;MIC分别为250mg/ml、62.5mg/ml、125mg/ml、500mg/ml。该实验所选10种中药材除茯苓和马蹄香外,其余中药材水煎液对猪源大肠杆菌皆有不同程度的体外抑菌效果。该研究对临床应用中草药防治猪大肠杆菌病及筛选效果良好的抑菌中草药物进行抗菌兽药研发有一定的指导意义。

中草药黄酮类化合物在动物上的应用

黄酮类化合物是许多中草药重要的有效成分之一,具有抗菌、抗病毒、抗氧化、调节免疫力、抗应激、消炎以及抗肿瘤等作用。近年来,随着中药黄酮提取和加工工艺的改进及兽药残留等社会问题的出现,黄酮类化合物在动物生产上的应用越来越引起广泛关注,对其继续深入研究,开发成新兽药或药物饲料添加剂,并在动物生产上使用,具有深远的意义。

中药多糖在动物生产上的研究进展

中药是我国宝贵的药用资源,兽用中草药被广泛应用于预防和治疗畜禽疾病、促进动物生长、提高饲料报酬等。中药多糖为中药重要的有效成分之一,广泛存在于中草药中。本文主要从中药多糖的结构、提取、生物活性作用、动物生产上的应用等方面进行阐述,并展望未来中草药多糖的应用前景。

云南4个规模化猪场猪瘟抗体水平监测及免疫效果分析

为检测云南省某地区规模化养猪场猪瘟病毒抗体水平及免疫效果分析,通过监测整体猪瘟抗体水平来制定有效的免疫程序,并对抗体效价不合格的猪只及时补种疫苗,对猪瘟的防控有重大意义。本试验应用猪瘟正向间接血凝试验,检测了云南省某地区4个规模化猪场283份血清的猪瘟抗体水平。结果表明,猪瘟血清抗体水平≧1∶8的有74份,免疫合格率为73.9%。哺乳仔猪检测65份,猪瘟血清抗体水平≧1∶8的有22份,免疫合格率为66.2%。断奶仔猪检测74份,猪瘟血清抗体水平≧1∶8的有28份,免疫合格率为62.1%。育肥猪检测75份,猪瘟血清抗体水平≧1∶8的有21份,免疫合格率为72%。母猪检测69份,猪瘟血清抗体水平≧1∶8的有3份,免疫合格率为95.6%。所有猪群中断奶仔猪免疫合格率最低,与临床上断奶仔猪猪瘟发病率较高相吻合。

猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒混合感染对仔猪血液生理生化指标的影响

为了解猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒混合感染对仔猪血液生理生化指标的影响,本实验将34头仔猪分为第I组(PRV单感染组)、第Ⅱ组(PCV2单感染组)、第Ⅱ组(PCV2和PRV混合感染组)及对照组。分别在实验0、3、7、14、21、35天空腹前腔静脉采血分离血清,检测血清中IgG和血液生理指标。结果表明混合感染组IgG和对照组差异不显著,红细胞和血红蛋白和对照组比较在第14天差异显著,白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞各时间段均显著低于对照组。该研究从血液学方面解释了PCV2和PRV混合感染的发病机制。

PCV2和PRV混合感染对仔猪血清白细胞介素和IFN-γ水平的影响

研究PCV2和PRV混合感染对仔猪血清白细胞介素及IFN-γ水平的影响。将34头仔猪分为PRV单感染组(Ⅰ组)、PCV2单感染组(Ⅱ组)、PCV2和PRV混合感染组(Ⅲ组)及对照组,Ⅰ组颈部肌内注射PRV 2 mL,Ⅱ组颈部肌内注射PRV2 2 mL,Ⅲ组颈部肌内注射PRV、PRV2各1 mL,对照组颈部肌内注射生理盐水2 mL。分别在实验第0、3、7、14、21、35天空腹前腔静脉采血、分离血清,用ELISA方法检测仔猪血清中IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ含量。结果显示,混合感染组猪第8~14天发生死亡,IL-4、IL-10水平均呈上升趋势;IL-6水平呈先下降、后上升、再下降的趋势,第3天达到最低值;IFN-γ水平呈先下降、后上升的趋势,第3天达到最低值。PCV2和PRV混合感染对仔猪免疫系统的影响及PCV2引起的免疫抑制机制对该病的防治提供了科学依据。

猪伪狂犬病毒和圆环病毒2型人工混合感染仔猪病理学特征

为进行猪群猪伪狂犬病、猪圆环病毒病及其混合感染组织病理特征比较,对34头仔猪进行人工接种病毒感染实验研究。实验仔猪在攻毒后第7~14天症状明显,单一感染仔猪表现为耐过,混合感染仔猪表现为发病较重且第14天全部死亡。实验结果从细胞水平揭示了猪伪狂犬病和猪圆环病2型感染对猪各器官组织的嗜性,从而为研究猪伪狂犬病和猪圆环病2型的致病性及其防治提供了理论依据。

人工感染PRV仔猪不同组织器官病毒分布及排毒规律研究

为了研究伪狂犬病毒在猪体不同组织部位的分布和对外排毒规律,将14头50日龄仔猪随机分为实验组(10头)和对照组(4头)。实验组肌内注射半数致死为10^(6.5) TCID_(50)/mL PRV 2 mL,记录不同时间猪只的临床症状,并采用RT-PCR法对攻毒后不同时期各组织器官及血液、鼻拭子、肛门拭子的病毒载量进行研究。结果显示,PRV感染后12 h,试验猪只表现为体温升高、食欲不振、精神萎靡、咳嗽、打喷嚏等症状,攻毒后第3天逐渐出现神经症状;PCR检测表明PRV在体内分布较广,以淋巴结、肺脏、脑组织中病毒载量最高;攻毒不同时期病毒载量的变化规律为先上升后下降的趋势,以第7天或第14天病毒载量最高;对外排毒由高到低依次为鼻拭子、血液、肛门拭子,排毒时间持续35 d。通过研究PRV的分布规律和对外排毒规律,对于揭示PR的发病机制具有重要意义。

植物多酚的提取及在动物上的应用研究进展

植物多酚广泛存在于各种植物之中,其运用前景广阔,是值得中兽药开发的重点研究对象。本文简述了植物多酚的提取方法,总结了其在动物应用上的研究进展,简述了其研究方法和方向,为下一步中药多酚的提取和开发提供依据。

岩陀多糖和灯盏花黄酮复合物对免疫抑制大鼠的免疫调节作用

研究中药岩陀多糖和灯盏花黄酮对免疫抑制大鼠免疫调节作用。实验室水提法提取岩陀多糖,醇提法提取灯盏花黄酮。将岩陀多糖和灯盏花黄酮提取物按1∶1配制成复合物,21只SD大鼠随机分为空白对照组、免疫抑制模型组、岩陀多糖和灯盏花黄酮复合物组,适应性饲养3 d后除空白对照组外,其余2组腹腔注射环磷酰胺3 d致其免疫力低下,第8天复合物组灌胃200 mg/kg复合物,其余2组灌喂等量蒸馏水,灌胃7 d。在第0天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天眼部采血,分别进行白细胞数、淋巴细胞数和IgG的检测。复合物按照4.0 mg/mL、2.0 mg/mL、1.0 mg/mL、0.5 mg/mL浓度进行猪外周血淋巴细胞体外试验。结果显示,在第7d与空白对照组比较,免疫抑制模型组的白细胞数、淋巴细胞数、IgG含量极显著降低(P<0.01),表明免疫抑制模型建立成功。白细胞数,淋巴细胞数、IgG含量整体呈先下降后升高最后接近于正常值,与模型组比较,复合物组能提升白细胞数及淋巴细胞数,其中白细胞数在21 d出现峰值(P<0.01),淋巴细胞数在第14天出现峰值(P<0.01),对Ig G含量无明显的影响;各浓度复合物的刺激指数均大于1,且浓度越大,刺激指数越大,说明复合物的浓度越大,越能刺激淋巴细胞转化。试验表明中药岩陀多糖和灯盏花黄酮复合物对免疫抑制大鼠有免疫增强作用。

猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型混合感染猪场伪狂犬病净化方案研究

为研究伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染猪场伪狂犬病的净化,采用PCR和ELISA进行病毒核酸与抗体检测,采用不同的净化方法,选取云南省3个自繁自养种猪场,A场同时净化PRV和PCV2,免疫接种PRV疫苗;B场净化PRV,免疫接种PRV疫苗;C场同时净化PRV和PCV2,免疫接种PRV和PCV2疫苗。结果表明,C场实施猪伪狂犬病净化前gE阳性率为15.94%,gB阳性率为86.96%,实施猪伪狂犬病净化3年后gE阳性率为1.43%,gB阳性率100%。结果提示,C场在同时净化PRV和PCV2,同时接种猪伪狂犬病和圆环病毒2型疫苗的模式下,净化效果最优,为地区种猪场提供疾病净化思路。

猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型混合感染对仔猪肝肾损伤的研究

为研究猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染对仔猪肝肾的损伤,选择32头仔猪进行分组攻毒。攻毒后进行临床观察、病理剖检,分别在第3、7、14、21、35天采集肝、肾组织样品。通过HE染色、免疫组化染色、实时荧光定量PCR病毒检测,对感染仔猪肝和肾的病理损伤进行研究。结果发现,混合感染仔猪出现神经衰竭,第8~14天死亡。HE染色肝细胞水泡变性,浆液渗出,淋巴细胞浸润,中央静脉消失,肝细胞索紊乱,大量巨噬细胞增生。肾小球出血,肾小体结构被破坏。免疫组化定位可见病毒侵袭肝脏的细胞浆和汇管区,肾脏的肾小体边缘的细胞内。实时荧光定量PCR检测肝脏和肾脏病毒载量呈现上升趋势,PRV和PCV2均在感染第14天达峰值,PRV在肝脏和肾脏的载量分别为1 907.52拷贝/μL和938.97拷贝/μL,PCV2载量分别为635.28拷贝/μL和522.83拷贝/μL。表明PCV2和PRV混合感染仔猪肝和肾受到严重损伤,混合感染较各自单感染严重。

云南省昌宁县猪伪狂犬病血清学调查

为了解云南省昌宁县猪伪狂犬病流行情况,2015年以昌宁县养猪示范基地、规模户、公猪站为对象,采集7个乡镇115家养猪场的2 943头种猪血液,用ELISA法分别检测了感染抗体和免疫抗体。结果表明:昌宁县种猪伪狂犬病免疫抗体阳性率为78.70%,感染抗体阳性率为4.79%;种母猪的免疫抗体阳性率为80.30%,感染抗体阳性率为4.84%;种公猪的免疫抗体阳性率为60.34%,感染抗体阳性率为4.22%,猪场伪狂犬病的感染率低于全国平均值。说明昌宁县猪群伪狂犬病得到了一定的控制。

岩陀黄酮化合物毒理性试验

为研究岩陀黄酮化合物的毒理性,通过对小鼠的急性经口试验和35d亚慢性毒理试验的方式进行安全计量范围的测定。饲喂小鼠的岩陀黄酮化合物含量为67.462%,小鼠急性经口试验无死亡情况,最大耐受量为3 000mg/kg体质量。连续灌胃小鼠35d后,低、中、高剂量组小鼠体质量、内脏系数和生化指标与对照组相比无显著性差异,组织切片无明显的病变损伤。结果表明,岩陀黄酮化合物在本试验计量范围内属于安全无毒。

一起猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型混合感染的诊断

为了给某规模化猪场提供疫病诊断防控依据,试验对该规模化猪场3头发病猪进行了临床诊断、病理解剖和实验室检测。采集3份组织样品提取核酸后进行PCR检测,采集169份血清采用ELISA方法检测抗体。结果表明：猪群整体食欲下降,病猪体温为39.8~41.5℃,部分病猪四肢末端呈蓝紫色,剖检可见猪肾脏表面密布点状出血,肺脏有明显出血点,肠壁变薄;有1份病料为猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）阳性,有2份病料为PRRSV和PCV-2阳性;PRRSV抗体平均阳性率为76.92%,CSFV抗体平均阳性率为81.66%。说明该猪场出现CSFV、PRRSV、PCV-2混合感染,免疫抗体整齐度差,保护率低,应加强饲养管理,降低饲养密度,实行严格的全进全出制度和混群制度,减少环境应激因素,控制并发感染,保证猪群具有稳定的免疫状态。