不同病毒培养方式制备森林脑炎灭活疫苗的比较

目的比较3 L转瓶及14 L篮式生物反应器培养病毒制备的森林脑炎灭活疫苗的产量及质量。方法分别采用3 L转瓶及14 L篮式生物反应器培养Vero细胞,3 L转瓶培养细胞96 h后感染SZV株森林脑炎病毒(MOI=0.01、0.04、0.1及0.4),培养至80~96 h收获第1次,每隔48 h收获1次(500 m L/次);14 L生物反应器培养Vero细胞7 d后感染SZV株森林脑炎病毒(MOI=0.01、0.04、0.1及0.4),感染后96 h开始流加病毒维持液,并收获病毒液,每24 h收获10~15 L。两种培养方式收获的森林脑炎病毒液经超滤浓缩、β-丙内酯灭活、柱层析纯化后获得疫苗原液,并进行相关检定。结果 4种MOI感染Vero细胞,采用3 L转瓶方式培养可连续收获6~7次,病毒液产量为3~3.5 L,收获液平均滴度为7.4 lgLD_(50)/m L;采用14 L篮式生物反应器培养可连续收获14 d,病毒产量140~160 L,收获液平均滴度高达8.4 lgLD_(50)/m L。两种方法制备森林脑炎灭活疫苗原液各项质量指标均合格,且14 L篮式生物反应器制备原液的效力及蛋白含量优于3 L转瓶。结论应用生物反应器培养工艺制备Vero细胞森林脑炎灭活疫苗的产量及质量高于转瓶培养工艺,本实验为生物反应器制备Vero细胞森林脑炎灭活疫苗的大规模生产及工艺改进奠定了基础。

生物反应器制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的免疫原性及安全性评价

目的评价生物反应器工艺制备森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)在动物体内的免疫原性及安全性。方法采用生物反应器培养Vero细胞,感染森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV),连续收获,经Sepharose 4FF柱层析纯化后,制备森林脑炎灭活疫苗,免疫昆明小鼠,检测疫苗在动物体内的免疫原性;通过疫苗接种豚鼠主动过敏性试验、ICR小鼠急性毒性试验、新西兰兔局部刺激性试验,评价疫苗在动物体内的安全性。结果制备的森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)对小鼠的免疫保护指数大于5.0×10^5,符合《中国药典》三部(2015版)标准。豚鼠主动过敏试验无豚鼠出现过敏性反应;急性毒性试验ICR小鼠未见明显毒性反应;局部刺激试验新西兰兔注射部位局部大体观察未见明显异常改变。结论生物反应器工艺制备的森林脑炎灭活疫苗(Vero细胞)具有良好的免疫原性和安全性。