Pp2cm基因沉默对小鼠巨噬细胞通过TLR通路抵抗金黄色葡萄球菌感染的影响

目的探究蛋白磷酸酶2Cm(protein phosphatase 2Cm,PP2Cm)的基因Pp2cm沉默对感染金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)后巨噬细胞炎症因子表达的影响及作用机制。方法通过腺病毒(adenovirus,Ad)转染Raw264.7小鼠巨噬细胞系分析了Pp2cm基因敲低对巨噬细胞炎症因子、细胞增殖凋亡和Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路的影响。细胞处理分为4组,包括Ad-Ctrl组、Ad-Pp2cm组、Ad-Ctrl+S.aureus组和Ad-Pp2cm+S.aureus组。分别在细胞中加入对照腺病毒(Ad-Ctrl)或针对Pp2cm基因的腺病毒(Ad-Pp2cm),使用或不使用金黄色葡萄球菌进行炎症诱导。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1 beta,IL-1β)、TLR2、TLR4、Toll样受体衔接蛋白(Tolllike receptor adaptor protein,Tirap)和髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,Myd88)基因表达,蛋白印迹法(Western blot)技术检测PP2Cm蛋白表达,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果Ad-Pp2cm组巨噬细胞Pp2cm mRNA和PP2Cm蛋白表达水平均低于Ad-Ctrl组,差异有统计学意义(P<0.05)。与AdCtrl+S.aureus组相比,Ad-Pp2cm+S.aureus组巨噬细胞中TNF-α与IL-1β基因表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与Ad-Ctrl组巨噬细胞相比,Ad-Pp2cm组巨噬细胞中TLR2、TLR4、Tirap和Myd88基因表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Ad-Ctrl组与Ad-Pp2cm组巨噬细胞的细胞凋亡和细胞增殖差异无统计学意义。结论Pp2cm基因沉默促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌感染的炎症响应。TLR通路在巨噬细胞炎症激活过程中发挥重要作用。