生防菌EN5的定殖能力及其对根际土壤微生物类群的影响

[目的]明确生防菌EN5菌株在番茄根、茎及根际土壤中和在黄瓜、烟草体内的定殖情况,及对根际土壤微生态的影响,为细菌性青枯病的生态治理提供理论依据。[方法]采用抗生素抗性标记法测定生防芽胞杆菌EN5的定殖能力;以平板培养及ERIC-PCR法分析菌株EN5对番茄根际土壤微生物种群的影响。[结果]菌株EN5在番茄根、茎及根际土壤中均能稳定定殖,当菌株EN5处理植株15 d时,其在番茄茎内的定殖量可达5.6×104cfu/g;此外,菌株EN5在烟草和黄瓜体内亦可定殖,其在烟草体内的定殖量较大。菌株EN5处理使根际土壤中细菌、真菌和放线菌的数量明显高于对照土壤,对氨化细菌、固氮菌、纤维素降解菌等微生物群体有促进作用,对反硫化细菌群体有抑制作用。同时,菌株EN5处理还改善了根际土壤中细菌群体的多样性。[结论]菌株EN5可以在其自然寄主番茄的根、茎及根际土壤中稳定定殖。同时,菌株EN5处理有助于改善根际土壤微生态环境,抑制病菌繁殖。

天然抗烟草花叶病毒大分子物质研究进展

天然大分子物质主要包括蛋白、核酸和糖类。本文主要阐述了植物、动物和微生物中天然抗烟草花叶病毒大分子物质的研究与应用现状。关于这些大分子物质的抗病毒机理是多方面的,主要包括抑制病毒的侵染、对植物病毒增殖过程中的干扰和抑制作用、诱导植物的抗病性反应等,并对今后的研究进行了展望。

鸦胆子素D对烟草抗烟草花叶病毒的诱导抗性和保护作用

为明确植物源抗病毒化合物鸦胆子素D(Bruceine D)对烟草抗烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)的诱导抗性及其对TMV感染后的保护作用,本研究分别设置清水处理作为阴性对照,接种TMV作为阳性对照,检测施用Bruceine D对烟草体内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,并检测了Bruceine D对烟草感染TMV后体内叶绿素、丙二醛(MDA)、可溶性糖和可溶性蛋白含量的影响,以及对烟草POD和PPO同工酶的诱导作用。结果表明,Bruceine D能够系统性地诱导烟草体内POD,PPO,PAL以及SOD活性的提高;能够抑制烟草因感染TMV造成的叶绿素含量的下降以及MDA含量的升高;诱导烟草产生新的POD和PPO的同工酶;阻止TMV造成的烟草体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的降低。Bruceine D能够诱导烟草产生对TMV的抗性并对感染TMV的烟草起到保护作用。

孔石莼质体蓝素氨基酸序列分析和分子进化

以孔石莼(Ulvapertusa)质体蓝素氨基酸序列在NCBI以BLASTp进行同源性检索,将获得具有一定同源性的不同生物的质体蓝素氨基酸序列进行生物信息学分析。共比较37种生物的38个氨基酸序列,包括13种藻类,1种苔藓,23种陆生被子植物的24个氨基酸序列。发现孔石莼质体蓝素的氨基酸序列与其它序列的同源性从26.4%￣88.8%不等,所有生物的质体蓝素氨基酸序列表现出较大的保守性和进化性;基于不同生物质体蓝素成熟肽的氨基酸序列之间的同源性,构建了它们的系统进化树,这些系统进化树能够较准确地表现各种生物系统进化关系,可以说生物的质体蓝素的氨基酸序列可作为生物系统进化的一个分子依据。

药用植物提取物抗烟草花叶病毒活性的研究

目的研究我国传统药用植物抗烟草花叶病毒(tobacco m osa ic v irus,TM V)的作用,为从植物中开发抗病毒类生物农药提供依据。方法采用局部枯斑法和叶碟法对我国78科162种药用植物提取物的抗TM V侵染和增殖作用进行测定。结果在10 m g/mL水平下,19种植物提取物可有效抑制TM V侵染,9种植物提取物有明显抑制TM V增殖作用。结论大多数药用植物提取物具有一定抗TM V侵染活性,仅少数药用植物提取物有较好的抗TM V增殖作用。

杨梅叶提取物抗烟草花叶病毒活性及其化学成分初步研究

以烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)为供试病毒,对杨梅叶提取物抗病毒活性进行测定.结果表明,杨梅叶提取物具有较强的体外钝化和抗病毒侵染作用;通过系统预试和含量测定,初步确定杨梅叶提取物中主要含有黄酮和鞣质2类成分,两者含量分别在水和体积分数为70%的乙醇提取物中较高.

水稻齿叶矮缩病毒的研究进展

水稻齿叶矮缩病毒(rice ragged stunt virus,RRSV)属呼肠孤病毒科水稻病毒属,其所致的水稻齿叶矮缩病是东南亚、东亚和南亚一些国家的重要病害,病害的发生对当地的水稻生产造成严重影响。综述了国内外有关RRSV的生物学、分子生物学方面的研究进展及其所致病害的控制策略。

水稻草矮病特异蛋白抗血清的制备及应用

采用不同ｐＨ 值沉淀法及超速离心获得提纯的水稻草矮病特异蛋白。提纯的Ｓ－ 蛋白具有典型的蛋白紫外吸收曲线，提纯产量为２８ ｍｇ／１００ ｇ 病叶。从ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 精提纯的Ｓ－ 蛋白免疫兔子上获得抗血清，经微量沉淀反应、琼脂双扩散测定，其效价分别为１∶１０２４ 和１∶２５６ 。获得的Ｓ－ 蛋白抗血清与提纯的Ｓ－ 蛋白及感病植株，在琼脂双扩散反应中，均有明显的沉淀线出现，对照健株及提纯的水稻草矮病毒则无反应。利用制备的Ｓ－ 蛋白抗血清经Ａ－ 蛋白酶联免疫吸附法检测，结果表明：Ｓ－蛋白抗血清与提纯Ｓ－ 蛋白及感病植株有专化性反应，且不同品种、不同部位、接种后不同发病时间的水稻病株中Ｓ－ 蛋白的积累量有差异，这就为ＲＧＳＶ 的检测提供了一种快速。

孔石莼(Ulva pertusa)中一种抗TMV活性蛋白的纯化及其特性(英文)

采用硫酸铵盐析和阳离子交换柱层析(CM—Sepharose Fast Flow)，从孔石莼(Ulva pertusa Kjellm)藻体中分离纯化得到1个蛋白，命名为UPCM40。经SDS—PAGE确定其分子量约为36kD，Native—PAGE可知其为单一组分；该蛋白不含糖；其全波长扫描结果显示，该蛋白在190～220nm和250～300nm处有特征吸收峰，在250～300nm范围中的最大吸收峰在270～275nm处。经测定发现该蛋白具较好的抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)的活性，当蛋白质浓度为50μg/mL时，对TMV的抑制效果为：在枯斑寄主心叶烟上的侵染抑制率达85．6％，在苋色藜上为90．2％。测定该蛋白对6种供试真菌的抑制效果发现，对镰刀菌(Fusarium oxysporum f．sp．cucumerinum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和香蕉炭疽菌(Gloeosporium musarum)均有一定程度的抑菌作用，但抑制活性很低。

灰飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建及分析

以灰飞虱（Laodlphax striatellus Fallen）mRNA为起始模板，利用Gateway技术构建了灰飞虱酵母双杂交cDNA文库。经过检测表明：构建的初级cDNA文库的库容量为1．85×10 7cfu；扩增文库滴度为7．7×10 8cfu／mL，重组率约为97％；扩增文库插入片段主要集中在1000-1500bp之间。随机挑取10个克隆，经测序与GenBank数据库比对结果显示7个克隆具有同源序列，其中L2、L9为已公布的灰飞虱序列。灰飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建为克隆全长目的基因及研究灰飞虱与其传播的水稻病毒间的互作奠定了基础。

毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(TMV)活性研究初报

【目的】为探讨毛头鬼伞多糖(Coprinus comatus)的生物活性,对毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行测定,明确活性部位,为进一步分离纯化提供理论依据。【方法】从毛头鬼伞子实体和菌丝体提取多糖,并初步纯化,采用半叶法和叶碟法对抗病毒活性进行测定。【结果】毛头鬼伞多糖对TMV具有较强的体外抑制和抗病毒侵染作用,对TMV具有明显的体内抑制复制效果;在TMV接种前施用可以显著降低TMV侵染能力。【结论】毛头鬼伞多糖具有较好的抗TMV活性,为其进一步开发利用提供理论依据。

毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖的理化性质及体外抗氧化活性

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖。经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖=10.5∶1.7∶1。通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(.OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性。

海藻蛋白质提取物对香蕉炭疽菌的抑制作用

以香蕉炭疽菌(Gloeosporium musarum)为作用靶标,测定了8种海藻的硫酸铵分级盐析蛋白对其菌丝生长和分生孢子萌发的作用效果.发现8种海藻的不同蛋白质组分对香蕉炭疽菌菌丝生长和分生孢子萌发的作用效果不同,其中有些蛋白质组分能抑制菌丝生长;有些能抑制其分生孢子的萌发,使其萌发率降低,并对孢子萌发的芽管长度、着生位置、芽管数产生影响.表明海藻中存在对香蕉炭疽菌具有抑制作用的蛋白质组分.

抗病毒蛋白抑制植物病毒的应用前景

探索应用外源性抗植物病毒蛋白进行植物病毒病的防治,已经取得了一定的成效;但不同来源的抗植物病毒蛋白,它们的作用机理是不完全一样的.根据近年的研究结果,对这类蛋白的抗病毒作用的机理进行了综述,并对抗病毒蛋白的应用前景进行了展望.

芽孢杆菌两菌株对香蕉炭疽病菌的抑制作用及其机制

分离了两个芽孢杆菌（Bacillus sp．）菌株25-1和25-17，均对香蕉炭疽病菌（Colletotrichum musae Berk．et Curt．）有较强的拮抗作用。平板对峙培养出现明显的抑菌环；以凹玻片法，用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子，其孢子萌发率降低53％-69％；将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上，则两者均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示，两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长，造成菌丝分支增多，顶端和中央膨大，随着时间的延长畸变结构增加，菌丝成念珠状或菌丝分支显著增多，且顶端细胞变形膨大聚集成簇，菌丝壁穿洞，内含物质泄漏，终使细胞崩解和消融，变成球状的空泡。

短小芽孢杆菌EN16诱导番茄对细菌性青枯病的抗性

采用盆栽试验法研究了短小芽孢杆菌EN16对番茄青枯病的诱导抗病效应.结果表明,菌株EN16诱导番茄产生对青枯病的防病效果达到49.45%-68.89%;分别在挑战接种间隔期为7-10 d、菌株灌根接种2种处理条件下,菌株EN16表现出较好的诱导抗病效果.测定EN16处理对番茄叶片中几种防御酶的影响,结果显示,在病菌挑战接种前后菌株EN16处理均能引起过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等防御酶活性的显著增强.

芽孢杆菌对青枯病菌-根结线虫复合侵染病害的生物防治

从感染根结线虫的番茄根系中分离到46个细菌菌株，NA平板初筛获得13个抑制青枯雷尔氏菌生长的拮抗菌株，其抑菌圈宽度达7．1～26．3mm．温室试验表明，菌株EN5、EN15、EN01和EN16对青枯病的防治效果最为显著，平均防效分别为70．82％、89．54％、85．38％和78．81％；而EN5、SW1和SB2能有效减少番茄根结线虫病的根结指数，防效均达49％．同时测定这些菌株对青枯病菌-根结线虫复合病的防治效果，结果表明，EN5、SW1和SB2均能显著降低病情指数，其中SW1的防效最佳，青枯病指数比对照下降56．66，根结指数降低5．21．通过形态、生理生化特征和16SrDNA序列分析，初步鉴定菌株EN5、SW1和SB2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）．

一种植物提取物对CMV、PVY^N及其昆虫介体的作用

以植物Pt为材料,对其抗两种植物病毒———CMV(Cucumbermosaicvirus,CMV)和PVYN(PotatovirusYN,PVYN)及其昆虫介体[蚜虫Myzuspesicae(Suzer)]的作用进行研究。结果表明:(1)VT1具有较高的抗病毒活性,1mg/ml浓度下对CMV和PVYN的抑制率分别为91.6%和96.2%;(2)VT1对蚜虫有较强的触杀作用,24h和48h的LC50值分别为1.953mg/ml和0.8125mg/ml。生物活性跟踪发现,氯仿组分为植物Pt对蚜虫起触杀作用的有效部位;(3)VT1对蚜虫具有一定的忌避和内吸作用,但无明显熏蒸作用。

水稻病毒介体叶蝉和飞虱的规模饲养技术

稻叶蝉和飞虱是水稻上的两类重要害虫,除可直接为害水稻外,它们中的许多种类,如黑尾叶蝉、电光叶蝉,褐飞虱和灰飞虱等,还可作为多种水稻病毒的介体传播病毒病害,给水稻生产带来严重损失。在水稻病毒病研究中,无毒介体昆虫的规模饲养是一项重要技术,它对病毒的诊断和鉴定具有特别重要的意义,也是病株繁殖和介体传播特性研究的前提和病毒分子生物学研究的基础。同一般昆虫饲养方法相比,无毒介体昆虫的饲养要严格得多,下面就以稻黑尾叶蝉和褐飞虱为例,说明其规模饲养技术。

毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV外壳蛋白的影响

对毛头鬼伞(Coprinus comatus Muell.ex Fr.)子实体中的多糖CCP60a进行了提取分离及检测,研究了不同温度条件下CCP60a对烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白体外聚合的影响,并用Western blotting法研究了CCP60a对TMV外壳蛋白表达的影响。结果表明,经沸水浸提、乙醇分级沉淀、DEAE Sephadex A-25离子交换柱层析、Sepharose-6B凝胶柱层析和抗TMV活性跟踪检测可得到均一的多糖CCP60a。随温度的提高,CCP60a处理组在320nm处的吸光度值增加幅度明显小于对照组,表明CCP60a对TMV外壳蛋白体外聚合有一定的抑制作用。Western blotting检测结果显示,CCP60a可以使TMV外壳蛋白的表达明显降低。