单克隆抗体LC-1轻重链可变区基因的克隆及序列分析

本实验室获得的单克隆抗体（ｍＡｂ）ＬＣ１在体外及体内实验中，能与不同病理类型的肺癌细胞结合，具有作为肺癌病理诊断与鉴别诊断的辅助工具的潜在应用价值。本文应用分子生物学技术，从分泌ＬＣ１的杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，并经过反转录、ＰＣＲ分别分离得ＶＬ基因及ＶＨ基因，并通过序列测定对ＶＨ基因和ＶＬ基因进行了分析。结果表明：ＬＣ１的ＶＨ基因为３５９ｂｐ，ＶＬ基因为３３７ｂｐ；从推导出的氨基酸序列分析证实，它们均符合小鼠Ｉｇ可变区的氨基酸序列特征。根据Ｋａｂａｔ分类体系，ＬＣ１的ＶＨ基因中的ＶＨ基因片段隶属于抗体重链第５个家族，其ＶＬ基因中的ＶＬ基因片段隶属于抗体轻链的Ｖκ２１家族。

抗人肺癌mAbLC-1的人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒的构建与表达

目的表达抗人肺癌单克隆抗体(mAb)LC 1的人 鼠嵌合基因工程抗体。方法将mAbLC 1的VL 和VH 基因插入质粒 pWS1 中 ,构建成表达mAbLC 1人 鼠嵌合Fab片段基因的质粒pLC 1 ,转化大肠杆菌TG 1并在其中表达。结果酶切鉴定表明 ,mAbLC 1的VL 和VH 基因插入方向正确 ,该载体能在大肠杆菌TG1中表达预期相对分子质量的蛋白 ,表达产物对mAb具有较强的竞争结合抗原的活性。结论成功地表达了具有较高亲和活性的人 鼠嵌合抗人肺癌的基因工程抗体。

通过维持微环境IL－2水平抑制肿瘤形成

为研究肿瘤微环境中ＩＬ－２对肿瘤生长的抑制效应，用转基因方法，将携带ｍＩＬ－２ｃＤＮＡ基因的牛乳头瘤病毒载体（ＢＣＭＧ）转染小鼠Ｂ１６瘤细胞，获稳定持久分泌ｍＩＬ－２的Ｂ１６细胞株（ｍＩＬ－２＋Ｂ１６）。动物实验结果显示：ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞的致瘤性明显下降，但体外生长率与其亲代Ｂ１６细胞相比较无区别。用ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞诱导的小鼠腹腔渗出细胞（ＰＥＣ）对ＹＡＣ－１靶细胞和Ｂ１６靶细胞的体外杀伤能力比对照组ＰＥＣ（Ｂ１６诱导的ＰＥＣ）高一倍以上（Ｐ＜０．０１）。表明提高微环境中的ＩＬ－２水平能提高抗肿瘤免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，从而抑制肿瘤的形成。