Hela细胞早孕因子基因的克隆与原核表达

为了获取大量具有免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白,通过PCR技术扩增得到Hela细胞EPF基因片段,与pREST-A连接。将质粒pREST-A-EPF转化大肠埃希菌BL21后IPTG进行诱导表达,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白后,再用SDS-PAGE和Western blot分别鉴定其纯度和特异性。结果表明,EPF cDNA以正确的阅读框架插入表达载体pREST-A,经IPTG诱导后高效表达EPF重组蛋白,Western blot表明其与抗EPF抗体特异性结合。论文构建了EPF的原核表达载体,纯化获得了重组蛋白,为进一步开展EPF蛋白的相关研究和猪早孕诊断试剂盒的开发奠定了基础。