mTORC1抑制剂影响谷氨酰胺代谢抑制人胰腺神经内分泌肿瘤细胞增殖

目的体外研究雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)抑制剂对人胰腺神经内分泌肿瘤(pNET)细胞株BON增殖的影响,探讨谷氨酰胺(Gln)代谢在mTORC1抑制剂影响BON细胞增殖中的作用。方法体外培养人胰腺神经内分泌肿瘤细胞BON,分别用1、5、10、25、50、100nM的雷帕霉素处理后,应用CCK-8检测BON的生长抑制率。用100nM雷帕霉素处理BON细胞12h后,检测其对Gln的吸收水平。在无葡萄糖(Glc)和(或)无谷氨酰胺(Gln)的情况下,应用CCK-8检测BON的增殖情况以及流式细胞术检测细胞周期情况。结果雷帕霉素可明显抑制BON细胞的增殖,抑制率呈时间-浓度依赖性(P<0.05)。同时雷帕霉素影响BON对Gln的吸收,而BON明显依赖于Gln生长,Glc-/Gln+组、Glc-/Gln-组、Glc+/Gln-组生长速率较Glc+/Gln+组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mTORC1抑制剂可能通过影响Gln代谢抑制BON细胞的增殖。

^(99)Tc^m标记多肽VEGF125-136及其生物学分布

目的探讨一种理想的99Tcm标记小分子多肽VEGF125-136的方法,并研究标记物的生物学分布。方法在合成多肽的过程中直接完成多肽VEGF125-136与双功能螯合剂MAG3的偶联,然后采用正交设计探讨99Tcm的最佳标记条件,并研究标记物稳定性和小鼠体内分布。结果①简化了偶联步骤,提高了偶联产率;②最佳标记条件下标记率约78%,经HPLC纯化后放化纯度>95%,且在室温条件下稳定性好;③99mTc-VEGF125-136-MAG3在正常小鼠的血液中清除较快,在肾、肝中摄取较高。结论以MAG3为螯合剂用99Tcm标记VEGF125-136有良好的标记率。

缺氧诱导因子1α和2型谷氨酰胺酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和2型谷氨酰胺酶(glutaminase 2,GLS2)在结直肠癌中的表达,探讨其临床意义。方法应用免疫组化法检测本院结直肠癌术后108例组织标本(其中23例含癌旁黏膜组织)中HIF-1α和GLS2的表达,分析二者的表达与临床病理参数的相关性;采用Spearman等级相关分析检测HIF-1α和GLS2表达的相关性,Kaplan-Meier法分析结直肠癌中HIF-1α和GLS2的表达与患者预后的关系,Cox回归模型分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果结直肠癌组织中HIF-1α和GLS2的表达均高于癌旁黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α的表达与结直肠癌患者年龄、TNM分期、淋巴结转移、术后远处转移密切相关(P<0.05),而GLS2的表达与结直肠癌患者年龄、浸润深度、术后远处转移密切相关(P<0.05)。HIF-1α和GLS2的表达显著正相关(r=0.464,P<0.01),且均与结直肠癌的预后有关,Cox回归分析显示TNM分期、术后远处转移及HIF-1α、GLS2的表达均是结直肠癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者中HIF-1α、GLS2高表达预后均较低表达差,提示二者在结直肠癌的发生、发展中可能发挥重要作用。

丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义

目的检测丙酮酸脱氢酶激酶-I(pyruvate dehydrogenase kinase-I,PDK1)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫荧光法、Western blot检测结肠癌组织、癌旁组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在PDK1抑制剂(dichloroacetate,DCA)的诱导下,通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高;在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性,抑制效应随药物浓度而递增,其中90 mmol/L DCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌组织和细胞中高表达,在癌旁组织中低表达,抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性,PDK1可望成为结肠癌有效治疗靶点。

纤维粘连蛋白EDA片段调控结肠癌SW480细胞的增殖、凋亡

目的研究纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响。方法慢病毒感染结肠癌SW480细胞干扰纤维粘连蛋白EDA片段表达,建立纤维粘连蛋白EDA片段低表达的SW480细胞。利用MTT检测干扰前后细胞增殖的变化,并采用流式细胞术检测干扰前后细胞凋亡的变化。同时使用Western blot分别检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果慢病毒感染结肠癌SW480细胞后,纤维粘连蛋白EDA片段持续低表达。MTT法结果显示,干扰纤维粘连蛋白EDA片段24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低。转染组与未转染组及空载体组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示未转染组、空载体组及转染组的细胞凋亡率分别为(3.09±1.13)%、(3.71±0.42)%、(47.76±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot的结果显示干扰纤维粘连蛋白EDA片段后促凋亡因子Bax表达上调,同时,凋亡抑制因子Bcl-2表达降低。结论纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞具有促增殖、抗凋亡作用。

^(188)Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像。方法以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的最佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像。结果采用SPSS13.0进行分析。结果188Re标记QKRKRKKSRYKS在最佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30)。此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退。结论188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织。

基于TEM-8新型颗粒性疫苗的制备、鉴定和体外激发CTL杀伤活性的研究

目的制备、鉴定基于肿瘤抗原TEM-8(tumor endothelial marker-8)的复合颗粒性疫苗,研究其在体外激发CTL杀伤活性。方法在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成复合颗粒性的结构,以透射电镜、DNA阻滞试验、DNa-seI保护试验、Westernblot等对该疫苗进行制备和鉴定,同时进行体外激发CTL杀伤活性的标准51Cr释放实验。结果在NaCl浓度为87.5mmol/L、电荷比为2的制备条件下,电镜扫描结果显示该疫苗能形成颗粒;Westernblot鉴定其可有效介导TEM-8蛋白表达;该疫苗有明显的杀伤毒性,杀伤率为59.7%,与对照组性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备了基于肿瘤抗原TEM-8的复合颗粒性疫苗,其在体外能够有效激发出特异性CTL应答。

医学本科生教育应强化肿瘤多学科综合治疗的理念

多学科综合治疗是恶性肿瘤治疗的主要模式,但目前在我国的实施状况并不乐观。医学生作为未来医疗服务的主体,将肿瘤多学科综合治疗理念在本科生教育阶段植入医学生内心,不失为推进肿瘤多学科综合治疗的一种有效策略。针对课堂教学和临床带教过程中的具体环节进行简要阐述,以期提高教学效果。

^(99)Tc^m直接标记α_yβ_3受体拮抗剂环形RGD多肽

目的探讨^(99)Tc^m 直接标记α_vβ_3受体配体——含2个二硫键的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)-九肽(RGD-4CK)的可行性和不同标记条件对标记率的影响。方法采用预锡化法^(99)Tc^m 直接标记 RGD-4CK,3 MM 色谱纸层析测定^(99)Tc^m-RGD-4CK 的 Rf 值,计算标记率与比活度。研究各种标记条件对^(99)Tc^m-RGD-4CK 标记率的影响。通过高效液相色谱仪(HPLC)分析,Sep-Pak C18柱层析,进行体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验以及血清蛋白结合实验,评价^(99)Tc^m-RGD-4CK 的放射化学性质。结果 ^(99)Tc^m-RGD-4CK 在以丙酮和V(氨水):V(乙醇):V(水)=1:2:5为流动相中的 Rf 值分别为0与0.8～0.9,标记率为(97.8±0.4)%,基础标记条件下的比活度为(11.90±0.05)TBq/mmol。在以下条件下放化纯均>95%:(1)酒石酸亚锡为150～300 μg;(2)预锡化反应 pH 值为2.0～3.5,温度60℃,保温时间6 h 以上;(3)^(99)Tc^m O_4^-活度为37～185 MBq,体积在200μl内;(4)标记温度为95℃,标记时间30 min。^(99)Tc^m-RGD-4CK HPLC 的保留时间与其洗脱液的放射峰基本一致;^(99)Tc^m-RGD-4CK 室温放置6 h,放化纯仍>95%;Sep-Pak C18柱层析测定的^(99)Tc^m O_4^-峰仅比3 MM 纸层析高0.5%;标记物与300 mmol/L 半胱氨酸37%保温1 h,^(99)Tc^m O_4^-峰仅增加1.88%;^(99)Tc^m-RGD-4CK 与血清蛋白无明显结合。结论预锡化法^(99)Tc^m 直接标记 RGD-4CK 方法简便、标记率高,无需分离纯化即可直接应用,还可用于制备冻干品药盒。标记产物^(99)Tc^m-RGD-4CK 具有良好的放射化学性质。

^(188)Re-RGD-4CK的制备及其示踪动力学研究

目的:探讨^(188)Re标记RGD-4CK的方法及其在健康家兔体内的示踪动力学特性。方法:采用预锡化法^(188)Re直接标记RGD-4CK,纸层析测定标记多肽的标记率并计算比活度。测定9只家兔经耳缘静脉注射37MBq ^(188)Re-RGD-4CK后不同时相点血液中的放射性浓度,采用DAS软件评价标记多肽示踪动力学行为,以F值检验、AIC值、R2值并结合α_vβ_3受体在正常机体表达实际,对血液放射性浓度-时间数据进行房室模型曲线拟合,根据拟合结果计算示踪动力学参数。结果:^(188)Re-RGD-4CK的标记率大于97%,比活度为3.97±0.02TBq/mmol。^(188)Re-RGD-4CK在健康家兔体内的放射浓度实测值符合以1/C2为权重系数拟合的二室模型理论计算值。结论:预锡化法^(188)Re直接标记RGD-4CK制备方法简便,标记率高,无需分离纯化。^(188)Re-RGD-4CK在健康家兔体内的示踪动力学符合以1/C2为权重系数拟合的二室模型。

肿瘤学临床实习带教探讨

临床肿瘤学有其专业特殊性。在医学生临床肿瘤学实习带教过程中,应注重医学人文思想的熏陶、医患沟通技巧的提高、临床思维的培养和基本操作技能的训练。

2型脯氨酸羟化酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测脯氨酸羟化酶(proline hydroxylase domain 2,PHD2)在结直肠癌及癌旁肠黏膜中的表达,探讨分析其临床意义。方法应用组织芯片技术结合免疫组化法检测本校3所附属医院收治的结直肠癌患者术后149例组织标本以及相应50例癌旁肠黏膜和50例结直肠癌原发及转移灶中PHD2蛋白的表达。结果 PHD2在149例结直肠癌组织中阳性表达率显著低于癌旁肠黏膜(48.9%vs 72.0%,P<0.01),并与肿瘤的分化程度、临床分期、转移等密切相关(P<0.01);在50例结直肠癌原发灶中阳性表达率高于相应转移灶(64.0%vs 46.0%,P<0.01)。结论 PHD2在结直肠癌组织中表达低于癌旁肠黏膜,在结直肠癌原发灶中表达高于相应转移灶,在结直肠癌的恶性进展中发挥着重要作用。

脂肪酰胺水解酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测脂肪酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)在结直肠癌及正常肠黏膜中的表达,探讨其临床意义。方法应用Western blot和组织芯片技术结合免疫组化法检测结直肠癌组织以及对应正常肠黏膜中FAAH蛋白的表达。结果 FAAH在结直肠癌组织中的表达低于正常肠黏膜,169例结直肠癌组织中FAAH的阳性表达率显著低于正常肠黏膜(56.8%vs 97.4%,P<0.01),并与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.01)。结论 FAAH在结直肠癌组织中低表达,在正常肠黏膜中高表达,在结直肠癌的恶性增殖中发挥着重要作用。

RNA干扰PDK-1对5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的促进作用

目的探讨以丙酮酸脱氢酶激酶-1(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1,PDK-1)为靶标的短发夹RNA(shRNA)与化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌LS174T细胞的促凋亡作用。方法针对PDK-1序列设计3段干扰序列及1个阴性对照,分别构建pGenesil.1-PDK-1重组质粒表达载体及pGenesil.1-NC阴性对照载体,利用脂质体分别将质粒转染入LS174T,并用G418对细胞进行药物筛选,并通过Real-time PCR和Western blot检测有干扰序列的有效性。MTT实验检测5-FU对干扰组和对照组细胞生长、增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 Real-time PCR和Western blot证实3个干扰组均抑制PDK-1表达,其中最大敲减效率超过70%。MTT实验结果显示,经5-FU同样处理48 h后,PDK-1干扰的LS174T细胞生长抑制率较对照组显著增高(P<0.05);流式细胞仪结果显示,干扰组细胞凋亡率较对照组增高(P<0.05)。结论 PDK-1 shRNA能特异性下调LS174T细胞中PDK-1的表达,PDK-1干扰联合5-FU可促进结肠癌细胞化疗诱导凋亡。

CSCO胆道系统肿瘤诊断治疗专家共识(2019年版)

胆道系统肿瘤(biliary tract carcinoma,BTC)主要包括胆囊癌(gallbladder cancers,GBC)和胆管癌(cholangiocarcinomas,CC),约占所有消化系肿瘤的3%[1],绝大多数为腺癌,侵袭性强,预后极差,5年存活率<5%。BTC全球发病率呈现上升趋势,其中亚洲国家最为常见。BTC的诊疗明显有别于肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),但是目前多数指南或共识将其并入HCC一起阐述,国内尚无广泛接受的BTC共识。为了提高对BTC的认识,规范诊疗和研究,经CSCO胆道肿瘤专家委员会充分酝酿讨论,最终形成本共识,以供临床医生参考。

卡培他滨或贝伐单抗用于结直肠癌维持治疗的回顾性分析

目的分析卡培他滨或贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗的疗效和安全性。方法回顾性分析2012年1月至2016年5月在我院病理诊断为"任何原发肿瘤"(primary tumor,T)、"任何区域淋巴结"(regional lymph nodes,N)、"远处转移"(distant metastasis,M)1期(TXNXM1)的结直肠癌接受维持治疗的患者病例资料。予以一线标准方案化疗,待病情缓解或稳定后,按照维持治疗方案的不同分为卡培他滨维持治疗组和贝伐单抗维持治疗组,评价两组患者维持治疗的疗效及不良事件。结果本研究共纳入病例66例,卡培他滨组41例,贝伐单抗组25例。卡培他滨维持化疗组中位无疾病进展生存时间(progression-free survival,PFS)为5.6个月,贝伐单抗维持治疗组中位PFS为7.7个月,两组比较无统计学差异(HR:1.171,95%CI:0.701~1.966,P>0.05)。卡培他滨维持治疗组中位总生存时间(overall survival,OS)为28.2个月,贝伐单抗维持治疗组中位OS为31.9个月,两组比较无统计学差异(HR:1.143,95%CI:0.602~2.180,P>0.05)。两组均无Ⅳ级不良事件发生,卡培他滨维持治疗组手足综合征发生率较高(P<0.05),贝伐单抗维持治疗组出血发生率较高(P<0.05),其他不良反应差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗相较卡培他滨显示出更长的疾病控制时间和总生存时间,但无统计学差异;有出血风险的患者建议选择卡培他滨进行维持化疗。

PBL教学在肿瘤放射治疗学住院医师规范化培训教学中的应用

目的探讨LBL+PBL教学法在肿瘤放射治疗学住院医师规范化培训(住培)教学中的价值。方法选取2017级肿瘤放射治疗学住培学员作为研究对象,采用LBL+PBL模式教学(研究组,n=37);回顾分析2016级肿瘤放射治疗住培学员作为对照组,采用LBL模式教学(对照组,n=35)。对比、分析两组学员出科考核成绩及教学满意度评分。结果研究组考试成绩及教学满意度评分高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论 PBL教学法作为新的教学理念与方法,有助于培养学员临床思维、发挥学生主动性、培养创新能力等,从而提高肿瘤放射治疗科临床教学质量。

临床药师参与晚期直肠神经内分泌瘤患者的药学服务

目的探讨临床药师在晚期直肠神经内分泌瘤患者抗肿瘤治疗中的作用。方法临床药师参与1例晚期直肠神经内分泌瘤患者的药学服务过程中,结合患者实际情况,从用药的有效性和安全性方面提供治疗方案建议,并进行全程药学监护。结果依维莫司可引起高血糖的严重不良反应,用药时需注意监测;阿帕替尼可作为晚期直肠神经内分泌瘤患者后线化疗的选择。结论新型抗肿瘤药物不良反应的监护和缺乏循证药学证据的情况下,后线如何选择抗肿瘤药物,是临床药师工作的切入点,此对提高晚期直肠神经内分泌瘤患者的用药安全性和有效性方面起着重要作用。

抑制PDK对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响及其机制的探讨

目的:探讨抑制丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)对结肠癌细胞增殖和化疗敏感性的影响及可能机制。方法:应用MTT法观察PDK抑制剂(DCA)对人结肠癌细胞化疗增敏效应;应用Hoechst33258染色通过激光共聚焦显微镜观察DCA诱导的LoVo细胞凋亡;用流式细胞术观察DCA诱导的细胞凋亡、线粒体膜电位和Ca2+通道开放的情况。结果:抑制PDK(DCA)能明显影响结肠癌细胞增殖,其中90mmol/LDCA刺激SW620、LoVo、HT29、LS174T和293T细胞48h后,活性细胞率分别为(23.90±2.79)%、(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%、(29.72±3.03)%和(84.86±0.50)%。与小剂量DCA(2.5和5mmol/L)联合作用LoVo细胞48h,低剂量5-FU(5mmol/L)的活性细胞率由(66.03±3.95)%分别降至(50.78±2.05)%和(39.8±2.86)%;而低剂量奥沙利铂(0.5mmol/L)的活性细胞率由(71.18±0.62)%,分别降至(58.24±3.27)%和(53.17±2.65)%。30mmol/LDCA作用4种结肠癌细胞48h后,LS174T、SW620、HT29、LoVo和293T凋亡的发生率分别为(22.27±1.75)%、(14.42±2.36)%、(25.55±0.78)%、(13.20±1.58)%和(10.73±1.49)%。30mmol/LDCA作用LoVo细胞48h后,线粒体膜电位值由4.04±1.47下降为2.09±0.86;胞内Ca2+浓度下降了83.6%。结论:抑制PDK能抑制结肠癌细胞增殖活性,增加化疗敏感性。该作用可能是通过线粒体功能异常引起结肠癌细胞凋亡。

基于TEM-8新型颗粒性疫苗对结肠癌小鼠模型免疫治疗的作用

目的:用基于TEM-8(tumor endothelialmarker-8)真核表达的颗粒性疫苗免疫荷结肠癌小鼠,探讨该疫苗的免疫治疗作用。方法:用阳离子肽[K]16-tat49-57与带有负电荷的真核表达质粒结合成颗粒性疫苗,用透射电镜和免疫印迹法鉴定,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测疫苗所诱导的特异性CTL分泌IFN-γ,并对荷瘤Balb/c小鼠进行免疫治疗后,观察荷瘤体积和小鼠生存率,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长情况,并计算肿瘤微血管密度。结果:在电荷比为r=2的制备条件下,所构建的颗粒性疫苗进行电镜扫描,显示疫苗能形成颗粒,转染COS-7细胞后可有效介导TEM-8蛋白表达。ELISPOT检测显示在体内疫苗能有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,肿瘤治疗实验证实,颗粒性疫苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤小鼠的生存率,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.05。结论:基于TEM-8的新型抗肿瘤血管生成疫苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤小鼠模型中有效抑制肿瘤血管生成,提高荷瘤小鼠的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。