五味子乙素对4℃保存后猪精子质量和获能状态的影响

试验旨在研究五味子乙素(SchB)对4℃保存后猪精子质量及获能状态的影响,根据在冷藏基础液中添加不同浓度的SchB,将精液分为6组,分别为0(对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L组,检测冷藏后精子的活力、顶体完整率、质膜完整率、畸形率、平均运动速率、摆动性、线粒体膜电位(MMP)、DNA损伤、总抗氧化能力(T-AOC)等表观指标;用多功能酶标仪检测各组Ca^(2+)浓度,用乳酸试剂盒检测精子获能状态。结果表明:SchB可以提高精子活力、顶体完整率、质膜完整率、MMP、平均运动速率、摆动性、T-AOC,显著降低精子畸形率、DNA损伤、Ca^(2+)浓度、乳酸含量(P<0.05),且浓度为10μmol/L时效果最佳。综上,SchB可以抑制精子冷藏过程中的被动获能,提高冷藏后精子质量。

枸杞多糖对获能新鲜和冻后猪精子抗氧化能力的影响

为探究枸杞多糖(LBP)对猪精子获能过程中抗氧化功能的影响,用不同浓度LBP(2、4、8和16 mg/mL)处理获能过程中的猪精子,测定精子活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整性,筛选出最适LBP浓度,进一步测定最适浓度下的抗氧化指标。另外,以氧化激动剂氯化镉孵育猪精子后,用RT-qPCR方法分析SOD-1和Caspase-8处理前后的相对表达量。结果表明:LBP浓度分别为2 mg/mL和8 mg/mL时,鲜精和冻精质量较空白组显著提高(P<0.05)。鲜精和冻精获能试验组总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性较获能空白组显著增加(P<0.05),丙二醛含量差异不显著(P>0.05)。加氯化镉诱导氧化应激后,新鲜精子和冻后精子获能试验组较获能空白组SOD-1 mRNA表达量均显著上调(P<0.05),Caspase-8 mRNA表达量显著下调(P<0.05)。结论:添加LBP能够在一定程度上提高获能新鲜和冻后猪精子抗氧化能力。

金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因表达的影响

【目的】探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据。【方法】采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blotting、SDS-PAGE、免疫荧光、ELISA和实时荧光定量PCR等检测各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平、精子不同部位蛋白酪氨酸磷酸化位点变化情况、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)活性及黏附蛋白家族基因(AQN1、AQN3、AWN、PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ)和精子运动抑制因子(SPMI)基因mRNA的表达水平,分析金雀异黄酮对冻融猪精子的保护机制。【结果】与CK组相比,G组的32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平、顶体+顶体后区磷酸化位点、PKA活性显著降低(P<0.05,下同);AWN基因相对表达量极显著升高(P<0.01,下同),PSP-Ⅰ基因相对表达量显著降低,PSP-Ⅱ和SPMI基因相对表达量极显著降低。F组中未检测到32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化,而37和58 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平和PKA活性显著降低;AQN1、AQN3和AWN基因相对表达量极显著升高,PSP-Ⅱ基因相对表达量显著降低,SPMI基因相对表达量极显著降低。【结论】金雀异黄酮既能降低冻融猪精子顶体+顶体后区蛋白酪氨酸磷酸化水平,且PKA活性降低可能与p32和p69蛋白表达量降低有关,又可有效提高冻融猪精子中AWN基因及有效降低PSP-Ⅰ、PSP-Ⅱ和SPMI基因的表达量,在一定程度上提高冻融猪精子质量。

他克林对猪精子冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响

旨在研究他克林对猪精液冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响机制。手握法采集12头18~24月龄健康杜洛克种公猪精液,在其冷冻保存稀释液中加0.10 mmol/L他克林并冷冻保存,检测冻后精子活率、质膜完整率、顶体完整率和畸形率、线粒体膜电位、DNA完整性,同时利用试剂盒检测总抗氧能力、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、总胆固醇含量、丙酮酸含量及己糖激酶活性。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活率和质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、DNA完整性、抗氧化能力及糖代谢指标均极显著下降,畸形率极显著升高。与空白组相比,他克林显著提高冻后精子顶体完整率、DNA完整率、超氧化物歧化酶、丙酮酸含量;极显著提高精子活率、质膜完整率、线粒体膜电位、总抗氧能力、丙二醛含量、总胆固醇含量及己糖激酶活性,极显著降低畸形率。总之,猪精液冷冻前添加浓度为0.10 mmol/L的他克林可能通过提高抗氧化能力和糖代谢水平改善冻融后猪精子的质量。