HPLC法测定刺五加、五加皮与红毛五加皮中3种成分的含量

目的建立刺五加、五加皮、红毛五加皮中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸的质量分数测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%（体积分数）H3PO4溶液,梯度洗脱;检测波长为270 nm;流速为1.0 m L/min;柱温为30℃。结果刺五加中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸达到基线分离,线性关系良好（r≥0.999 9）,平均加样回收率分别为98.7%、99.7%、101.0%,RSD均小于3.0%（n=6）。刺五加、五加皮、红毛五加皮中原儿茶酸质量分数分别为0.022 5~0.028 7、0.076 3~0.132、0.013 8~0.071 2 mg/g;紫丁香苷质量分数分别为0.445~0.616、0.023 8~0.025 9、0.037 3~0.069 3 mg/g;绿原酸质量分数分别为1.834~2.169、0.659~0.713、0.372~0.709 mg/g。刺五加中紫丁香苷、绿原酸质量分数最高,其中紫丁香苷约为五加皮、红毛五加皮中质量分数的7~25倍,绿原酸约为五加皮、红毛五加皮中质量分数的3~5倍;而原儿茶酸在五加皮中质量分数最高,其次为红毛五加皮、刺五加。结论该方法灵敏、可靠,可用于刺五加、五加皮和红毛五加皮类药材质量控制的参考。

有瓜石斛HPLC特征图谱研究

目的 建立有瓜石斛HPLC特征图谱分析方法。方法 采用ZORBAX SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）;检测波长分别为220 nm和340 nm;柱温为35℃;流速为1.0 m L·min-1。结果在220 nm检测波长下,12批有瓜石斛分为4类,共标示出16∽26个特征峰,有14个特征共同峰。其中第Ⅰ类5批有16个共有峰,相似度为0.950--0.988;第Ⅱ类3批有26个峰,相似度为0.943--0.987;第Ⅲ类3批有23个峰,相似度为0.977∽0.988;第Ⅳ类1批与第Ⅲ类相比,多一个特征峰,差异较大。同类样品的相似度为0.943∽0.998,相似度较高;不同类样品共有模式间的相似度仅为0.568∽0.882,有明显差异。在340 nm检测波长下,12批有瓜石斛可分2类,共标示出7∽8个黄酮类特征峰,其中第Ⅰ’类11批标示出7个共有峰,相似度为0.966∽0.988;第Ⅱ’类1批,比第Ⅰ’类多1特征峰,以11批模式为对照,其相似度仅为0.671。结论该方法准确可靠,重复性好,在340 nm检测波长下,黄酮类成分特征峰比较稳定,样品差异较小;在220 nm检测波长下,特征峰信息丰富,可为有瓜石斛的质量控制及鉴别提供方法学依据。

齿瓣石斛中5种黄酮苷类成分的含量测定

目的:建立齿瓣石斛中5种黄酮苷类成分的含量测定方法。方法:采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:340 nm。结果:新西兰牡荆苷Ⅱ、新西兰牡荆苷Ⅰ、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、芦丁线性范围分别为0.04625～0.5550μg、0.04215～0.5058μg、0.03570～0.4284μg、0.03265～0.3918μg、0.08250～0.9900μg(r≥0.9998);平均加样回收率为99.76%～102.06%,RSD均小于3.0%。7批齿瓣石斛样品中上述5种成分的含量分别为0.0276～0.0426 mg/g、0.0297～0.0535 mg/g、0.0158～0.0298 mg/g、0.0220～0.0401 mg/g、0.0362～0.1924 mg/g。结论:该含量测定方法准确可靠,重复性好,可为齿瓣石斛的质量控制提供参考依据。

山楂HPLC指纹图谱研究

目的：优化山楂高效液相色谱指纹图谱分析方法。方法：色谱柱为ZORBAX SB C18柱;流动相为乙腈-1%乙酸溶液,梯度洗脱;检测波长为238 nm;柱温为35℃;流速为1.0 m L·min^-1。采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A版）进行相似度评价。结果：不同来源的10批山楂样品均标示出12个共有峰;10批样品的相似度为0.964-0.995,提示山楂成分质量较稳定。结论：本方法准确可靠、重复性好,为山楂质量控制提供了依据。

党参HPLC指纹图谱研究

目的优化党参高效液相色谱指纹图谱分析方法。方法采用ZORBAX SB-Aq色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）;检测波长为267nm;柱温为30℃;流速为1.0m L·min-1。结果不同来源的14批党参样品均标示出13个共有峰;利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价,14批样品的相似度为0.883-0.980,提示党参指纹图谱差异相对较大。结论方法准确可靠,重复性好,为党参质量控制提供了方法依据。

紫苏子油微囊脂肪酸甲酯化GC指纹图谱研究

目的:建立紫苏子油微囊脂肪酸甲酯化GC指纹图谱分析方法。方法:采用HP-5(30m×320μm,0.25μm)毛细管色谱柱;程序升温:初始温度140℃,以5℃/min升温至160℃(维持5min),然后以1℃/min升温至200℃(维持5min),再以5℃/min升温至240℃(维持10min);进样口温度250℃;FID检测器温度270℃;载气:氮气,流速0.3m L/min;进样量:1μL,分流比20∶1。采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度评价。结果:10批样品均标示出4个共有峰,鉴别了1个共有峰(亚油酸甲酯);10批样品的相似度大于0.99,提示紫苏子油微囊脂肪酸质量较稳定。结论:本方法准确可靠、重复性好,为紫苏子油微囊质量控制提供了依据。

有瓜石斛水煎液HPLC特征图谱研究及其与药材的相关性分析

目的建立有瓜石斛水煎液HPLC特征图谱,并与药材进行相关性分析。方法采用ZORBAX SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长分别为220nm、340nm;柱温为35℃;流速为1.0m L·min-1。结果在220nm检测波长下,11批有瓜石斛共标示出21~25个特征峰,可分为3类,均检出17个特征共同峰。其中第Ⅰ类5批有21个共有峰,相似度为0.906~0.972;第Ⅱ类3批有25个峰,相似度为0.955~0.986;第Ⅲ类3批有21个峰,相似度为0.979~0.989;同类样品的相似度为0.906~0.989;不同类样品共有模式间的相似度仅为0.481~0.763,有明显差异。在340 nm检测波长下,11批有瓜石斛共标示出7个黄酮类特征峰,相似度达0.909~0.985。两种检测波长条件下,有瓜石斛煎液基本能检出原药材相应特征峰,但相对峰面积比值有一定差异;每批药材与其煎液之间的相似度为0.733~0.919。结论方法准确可靠,重复性好,提示常规水煎煮工艺能保留有瓜石斛的主要特征成分,为评价有瓜石斛水煎液物质基础提供参考依据。

HPLC法测定有瓜石斛中原儿茶酸的含量

目的：建立有瓜石斛中原儿茶酸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法。色谱柱为Zorbax SB-Aq色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液;检测波长为220nm;流速为1.0m L·min-1;柱温为30℃。结果：原儿茶酸达到基线分离,线性关系良好（r=1.0000）;平均加样回收率为101.71%,RSD为2.48%（n=6）。12批市售样品含量在0.0374～0.203mg·g^-1范围内,差异相对较大。结论：该方法灵敏,可靠,可用作有瓜石斛药材的质量评价指标之一。

3种种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱比较

目的:研究不同产地种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱,并初步比较丹霞地貌种源(广东、福建、浙江、江西)、浙江本地种、铁皮兰种(广西、云南)特征图谱的差异。方法:采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水(梯度洗脱),检测波长340 nm,柱温25℃,流速0.8 m L·min^(-1)。采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2004A版)生成共有模式。结果:3种种源的23批样品共标示出14个共有特征峰。其中,10批丹霞种源样品标示出12个共有特征峰(峰14为最强峰),样品相似度为0.880~0.996;6批浙江本地种源样品标示出13个共有特征峰(主要峰的相对峰面积较接近),样品相似度0.774~0.981;7批铁皮兰种源样品标示出9个共有特征峰(峰10,峰11相对峰面积较大),样品相似度0.922~0.974。丹霞种源对照图谱与浙江本地种对照图谱、铁皮兰种对照图谱的相似度分别为0.395,0.061,铁皮兰种对照图谱与浙江本地种对照图谱相似度仅为0.370。结论:该分析方法准确可靠,重复性好;相同种源铁皮石斛叶黄酮类成分群基本一致,显示铁皮石斛叶内在的稳定性;不同产地种源成分群组成及比例存在明显差异,亦为快速区分丹霞种源、浙江本地种、铁皮兰种区域特征提供了依据。

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0.02mol·L^-1乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长250nm;流速1.0mL·min^-1;柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290nm;流速0.8mL·min^-1;柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0.15~3.0,0.075~2.25μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.01%(RSD2.1%),101.69%(RSD2.0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12.75%~36.40%,2.93%~18.39%,19.23%~54.58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14.33%~29.47%,6.64%~15.20%,25.73%~44.37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0.0208~0.8320μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为101.96%(RSD1.8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0.0532~0.1224mg·g^-1(均值为0.0810mg·g^-1),0.0403~0.0900mg·g^-1(均值为0.0683mg·g^-1),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0.02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。

铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340nm;柱温30℃;流速1.0mL·min^-1。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即"丹霞种"),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了"云南广南种""广西铁皮兰种"),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即"浙江本地种"),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较"丹霞种"与"广西铁皮兰种"的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛"丹霞种""云南广南与广西铁皮兰种"与"浙江本地种"的判断依据。

丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。