重组人抗缪勒氏管激素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨重组人抗缪勒氏管激素(AMH)对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。方法:采用浓度为25、50、100、200、400 nmol/L重组人AMH处理对数生长期的SKOV3细胞,并设阿霉素(DOX)组为阳性对照组,同时设3个阴性对照孔(DOX和AMH浓度0 nmol/L),作用72小时后通过CCK-8法检测SKOV3细胞增殖抑制率;采用重组人AMH 100 nmol/L作用于SKOV3细胞48小时后使用Annexin-V和PI染色,并设1 nmol/L DOX为阳性对照组,同时设3个阴性对照孔(DOX和AMH浓度0 nmol/L),通过流式细胞仪检测AMH对SKOV3细胞的促凋亡作用。结果:浓度100、200、400 nmol/L的AMH对SKOV3细胞增殖抑制率分别为50.6%、64.5%、78.3%,与阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01),且随AMH浓度加大,抑制效果明显提高;流式细胞仪检测AMH组SKOV3细胞总凋亡率为(30.6±2.82)%,与阴性对照组比较,细胞凋亡率明显升高,有统计学差异(P<0.01)。结论:重组人AMH在体外能够明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡。

重组人抗缪勒管激素C-末端蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达重组人抗缪勒管激素(human anti-Müllerian hormone,hAMH)C-末端蛋白,并进行纯化。方法PCR法扩增hAMH C-末端蛋白基因,插入至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-hAMH C。重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达h AMH C-末端蛋白。扩大培养后进行Ni亲和层析柱纯化,12%SDS-PAGE分析纯化产物。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pET-28a-hAMH C构建正确。表达及纯化产物均可见相对分子质量约12500的目的蛋白条带,纯度达90%以上。结论原核表达了重组hAMH C-末端蛋白,纯化后获得了较高纯度的目的蛋白。