PEG3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的研究

采用冻融-冻干法制备目标产品,用MTT法以刺激指数作为主要评价指标,通过单因素方差分析确定最佳处方;最佳处方制备的目标产品,通过腹腔免疫小鼠7、14和28 d后,用MTT法和表面标记法以刺激指数和CD4+/CD8+比值为评价指标进行细胞免疫原性研究;用微量血凝抑制法以抗体滴度比为评价指标检测体液免疫原性,探讨聚乙二醇(PEG)3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的最佳制备工艺和免疫原性。结果表明:PEG3000占卵磷脂的摩尔百分比为4%时,脂质体成膜后加入PEG3000制备的流感疫苗脂质体冻干粉为最佳处方;在1个免疫周期中, PEG3000修饰的流感疫苗脂质体组和其他组有显著差异(P<0.05)。这说明最佳处方制备的PEG3000修饰流感疫苗脂质体免疫原性增强且免疫时效延长。

DC-Chol阳离子脂质体佐剂对流感疫苗免疫效果的影响

目的观察阳离子脂质体DC-Chol修饰的四价流感疫苗的免疫原性。方法采用薄膜分散结合冻融-冻干法制备DC-Chol脂质体,检测其包封率。将小鼠分为七组,为DC-Chol脂质体疫苗组(250μg/只、500μg/只、750μg/只、900μg/只)、PBS组、中性脂质体组、疫苗原液组(n=3),通过MTT法确定DC-Chol脂质体的最佳剂量。将小鼠分为四组,DC-Chol脂质体组、疫苗原液组、中性脂质体组以及PBS对照组,腹腔免疫小鼠,于第7天、14天、28天处死,MTT法和T淋巴细胞表面标记实验检测小鼠淋巴细胞增殖情况观察免疫原性。结果MTT实验表明,DC-Chol修饰脂质体的最佳用量为500μg/鼠(P<0.05);T淋巴细胞表面标记实验显示,DC-Chol阳离子脂质体能明显增强脾淋巴细胞数(P<0.05)。结论与中性脂质体相比,DC-Chol阳离子脂质体作为四价流感疫苗的佐剂具有良好的免疫增强作用。

流感疫苗脂质体的制备方法及粒径对免疫原性的影响

目的 采用薄膜分散法和冻融冻干法制备四价流感疫苗脂质体冻干粉,通过考察其粒径、包封率和免疫原性,筛选最佳制备方法;使用最佳制备方法制备不同粒径流感疫苗脂质体,比较包封率和免疫原性,筛选最优脂质体粒径。方法 采用Lowry法测定脂质体包封率;腹腔免疫小鼠,通过脾淋巴增殖实验以刺激指数(SI)为指标进行细胞免疫原性研究;采用血凝抑制实验以免后与免前抗体滴度比(HI)为指标,评价体液免疫原性。结果 冻融冻干法是制备流感疫苗脂质体冻干粉的最佳方法,以最佳方法制备出平均粒径为3.7μm、2.0μm、1.0μm、0.45μm的4种不同粒径脂质体冻干粉,在一个免疫周期内,各实验组能显著刺激脾淋巴细胞增殖,产生细胞免疫,且3.7μm组与其他各组比较差异有统计学意义(P <0.05);各免疫组免后与免前抗体滴度比始终≥4,且3.7μm组高于其他组,表明其能产生较强的体液免疫。结论 冻融冻干法制备的四价流感疫苗脂质体能产生较好的免疫原性,其中以粒径3.7μm的流感疫苗脂质体免疫增强效果最佳。

多价流感疫苗及通用型流感疫苗的研究进展

目前,接种流感疫苗是预防和控制流感的重要手段,常用的流感疫苗按组分可分为三价和四价流感疫苗,随着对流感疫苗研究的深入,从疫苗病毒株的选择、疫苗佐剂的添加和改变生产手段等方面对现有多价流感疫苗进行了优化。由于流感疫苗在不同亚型之间的交叉保护力较差,开发可诱导具有广谱和长期免疫效应的通用型流感疫苗是当前流感疫苗研发的主要趋势。近年,可引起病毒广泛反应抗原的发现、对病毒保守区域的改造及细胞免疫机制的研究等为通用型流感疫苗研发提供了新思路。本文就现有多价流感疫苗的研究现状和正在研发的通用型流感疫苗相关研究进展作一综述。

狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性评价

目的评价狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性。方法将狂犬病疫苗原液稀释至15 IU/mL,制备为稀释液冻干粉(Y1组);将该稀释液冻干粉与脂质体冻干粉按5∶3的体积比混合,制成物理混合物(Y2组);同时采用冻融-冻干法将狂犬病疫苗稀释液和脂质体配制成狂犬病疫苗脂质体冻干粉(Y3组)。将各组疫苗复溶后,分别于0、3、7、14、21 d经小鼠腹腔给药,0. 5 mL/只。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测T淋巴细胞表面标记,ELISA法测定小鼠体液中狂犬病病毒抗体IgG(RV-IgG)浓度。结果与Y1组及Y2组比较,Y3组初次免疫后3 d小鼠脾细胞刺激指数(stimulatingindex,SI)值明显升高(P <0. 01);初次免疫后7、14、21、28 d,CD4^+/CD8^+值明显升高(P <0. 05),初次免疫后7、14、21 d,RV-IgG浓度明显升高(P <0. 05)。结论狂犬病疫苗脂质体冻干粉在小鼠体内具有良好的免疫原性,脂质体能提高疫苗免疫原性,延长疫苗的免疫时间,有望开发成为新一代广泛应用的疫苗佐剂。