柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链基因EtTBC的克隆、表达及特性的初步分析

鸡球虫病是一种由艾美耳属原生动物寄生虫引起的肠道疾病,是影响家禽业的最重要疾病之一。目前,球虫病的控制主要依赖于抗球虫药物的使用,但由于药物的长期广泛使用导致了球虫的严重耐药性。为研究其耐药性机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株、盐霉素耐药株进行了转录组测序分析,发现与敏感株相比,柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链(Et TBC)仅在地克珠利耐药株高表达。本研究在此基础上,克隆、表达了EtTBC,并初步分析了其功能及与地克珠利的关系;以柔嫩艾美耳球虫敏感株cDNA为模板成功克隆了EtTBC基因,构建了原核表达重组质粒pET28a-Et TBC,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TBC;利用qPCR对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段以及不同虫株(耐药株、敏感株和田间耐药株)的mRNA转录水平进行了分析,结果显示,该基因的转录水平在敏感株未孢子化卵囊阶段最高,且其mRNA转录水平仅在地克珠利耐药株上调;间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子除折光体外的细胞质和表面,第二代裂殖子的细胞质和表面。

不同宿主来源猬迭宫绦虫线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因的系统发育分析

为了分析不同宿主猬迭宫绦虫的遗传多样性和种系发育关系,本研究通过PCR方法扩增了湖南省7种不同宿主体内采集的7株猬迭宫绦虫(其中3株为裂头蚴)的线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因并测序,采用DNAStar 5.0软件分析其与其他绦虫相应基因序列的同源性;利用DnaSP V6.12软件计算并分析各基因序列的多样性;利用邻接法绘制pcox1、pcox3和prrn S基因的遗传进化树。PCR扩增及测序结果显示,7株虫株均扩增出了分别为396 bp(pcox1)、362 bp(pcox3)和280 bp(prrn S)的目的片段,且3种基因碱基差异率分别为0~2.27%、0~1.10%和0~1.79%。同源性分析结果显示,本研究的7株猬迭宫绦虫与已报道的其他猬迭宫绦虫线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因序列的同源性分别为97.20%~100.00%、98.90%~100.00%和97.90%~100.00%;与其他绦虫线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因序列同源性分别为66.70%~84.10%、51.70%~72.10%和63.80%~87.10%。基于基因序列单倍型数(H)、单倍型多样性(Hd)、核苷酸多样性(Pi)、平均核苷酸差异(K)数据的基因序列多样性分析结果显示,3个基因变异率为pcox1>prrn S>pcox3。系统进化树结果显示,7株虫株的pcox1、pcox3和prrn S基因均与已知猬迭宫绦虫相应基因聚类在同一分支,与其他绦虫所属分支相距较远,且基于pcox1、pcox3和prrn S基因均可以将猬迭宫绦虫聚为两个分支。上述结果表明,上述3种基因尤其是pcox3基因均可以作为研究不同宿主来源猬迭宫绦虫遗传变异的分子标记及用于其虫种的鉴定,且猬迭宫绦虫的遗传变异与宿主无关。该研究是国内首次通过线粒体基因探究不同宿主猬迭宫绦虫的遗传进化关系,为猬迭宫绦虫的分子鉴定、分类和群体遗传研究奠定了基础。

一例猫瘟诊断与治疗

选取长沙宠物医院中的一个猫瘟病例,观察临床症状,并进行检测与诊断。在治疗上主要进行抗病毒治疗、平衡电解质、提高免疫力控制继发感染,对于其他症状对症治疗,最后该病例经治疗后痊愈出院。

博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果试验

为了探究植物提取物博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的预防效果,本试验通过建立鸡柔嫩艾美耳球虫感染模型,进行预防给药,再采用计算抗球虫指数和测定血清中部分生化指标的试验方法,综合探究博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的预防效果。试验结果表明,博落回散200 mg/kg、400 mg/kg、800 mg/kg和1600 mg/kg添饲预防鸡球虫病效果不明显,其中800 mg/kg组的综合表现优于其余各组。