miR-155调控THP-1巨噬细胞炎症的作用机制

目的miR-155在巨噬细胞炎症反应中被诱导,但其调控巨噬细胞炎症的作用尚未完全探索,文章旨在探讨miR-155在脂多糖(LPS)诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应中的调控作用及其机制。方法使用LPS诱导THP-1来源的巨噬细胞为体外炎症细胞模型。细胞进行分组:①miRNA转染:空白组、LPS组、miR-155 mimics+LPS组、mimics NC+LPS组;②siRNA转染:对照组、LPS组、siRNA-SOCS1+LPS组、siRNA-NC+LPS组。qRT-PCR检测miR-155在THP-1巨噬细胞炎症中的表达;转染miR-155 mimics/mimics NC后用qRT-PCR和ELISA检测miR-155对巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-8转录/蛋白的影响;Targetscan数据库预测miR-155作用的靶基因,并用qRT-PCR验证miR-155和SOCS1之间的靶向关系;siRNA沉默靶基因SOCS1,qRT-PCR和Western Blot检测沉默效率;qRT-PCR检测沉默靶基因SOCS1对巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-8转录的影响;Western blot验证miR-155通过靶基因SOCS1调控THP-1巨噬细胞炎症反应。结果qRT-PCR结果显示,与空白组相比,THP-1巨噬细胞在LPS诱导后miR-155表达明显上调(P<0.05)。miR-155 mimics+LPS组较LPS组TNF-α、IL-8升高(P<0.05)。转染miR-155 mimics后,THP-1巨噬细胞中miR-155 mRNA明显升高(P<0.05),而SOCS1 mRNA显著下调(P<0.05)。Western Blot结果显示,与LPS组相比,miR-155 mimics+LPS组中SOCS1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论miR-155可上调THP-1巨噬细胞炎症中TNF-α、IL-8的表达,其调控机制可能是通过靶向降低SOCS1蛋白的表达,促进LPS所致的THP-1巨噬细胞炎症反应及免疫应答。

miR-155靶向JAK/STAT3通路促进LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应

目的探讨miR-155在THP-1巨噬细胞炎性反应中的作用及调控机制。方法使用脂多糖(LPS)处理THP-1来源的巨噬细胞构建体外巨噬细胞炎性模型,分为control组、LPS组、miR-155 mimics+LPS组和mimics NC+LPS组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述各组中miR-155、炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β)mRNA、STAT3 mRNA表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β)含量,免疫印迹(Western blot)法检测细胞中STAT3蛋白及STAT3磷酸化(p-STAT3)蛋白水平。结果LPS诱导THP-1巨噬细胞中miR-155表达增加,同时炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β)的表达增加;转染miR-155 mimics组进一步促进LPS诱导的巨噬细胞中上述炎性细胞因子的表达;Western blot法分析显示miR-155 mimics+LPS组中p-STAT3蛋白表达水平较LPS组进一步增加。结论miR-155可上调THP-1巨噬细胞炎症中TNF-α、IL-1β的表达,其调控机制是增加转录因子STAT3的磷酸化活化,进而靶向JAK/STAT3信号通路促进LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应。

MicroRNAs在黏膜屏障及炎症反应中的作用

黏膜屏障是机体直接接触外源性异物的主要界面,同时也是病原体入侵机体的重要位点。因此,黏膜表面需要严格的调节以维持黏膜屏障功能或平衡黏膜炎症反应。近年来研究表明,MicroRNAs(miRNAs)在调节黏膜屏障功能和黏膜炎症反应过程中起到重要的作用。本文综述了相关miRNAs与黏膜炎症的研究,进一步理解miRNAs参与黏膜生理和炎症过程中的作用,找到具有防治黏膜炎症的新作用靶点。

hsa-miR-221-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-221-3p进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-221-3p的靶基因、基因功能及信号通路。方法利用UCSC和miRBase在线数据库对hsa-miR-221-3p进行基因定位、分析其序列保守性,然后利用miGator v3.0数据库分析hsa-miR-221-3p在人类不同疾病和组织器官中的表达情况,利用Target Scan、miRTarBase和miRDB数据库交叉预测hsa-miR-221-3p的靶基因,使用在线软件Venny2.1对上述3个数据集绘制维恩图推导得到交集靶基因,再将预测的靶基因利用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号转导通路富集分析,采用String11.0数据库构建交集靶基因编码的蛋白间相互作用(PPI)网络图,进行编码蛋白间相互作用分析。结果hsa-miR-221-3p基因成熟序列高度保守,在肺部组织中富集表达;hsa-miR-221-3p的34种关键靶基因存在细胞多个组分中,执行多种分子功能,参与多种生物过程;这些靶基因富集于癌症和PI3K-Akt信号通路,编码的蛋白间形成了复杂的网络图。结论hsa-miR-221-3p在多种肿瘤组织和细胞中异常表达,通过靶基因对多种癌症发挥致癌或抑癌作用,以致癌作用为主,其可作为肿瘤潜在的研究标记物和治疗靶标。