应用于侧向免疫层析方法学的高特异性抗吗啡单克隆抗体的制备

目的:制备高特异性抗吗啡(morphine,MOP)单克隆抗体(mAb),用于建立快速检测MOP的侧向免疫层析方法。方法:用吗啡BSA偶联蛋白(MOP-BSA)免疫纯系Balb/c小鼠并测定免疫效价后,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备杂交瘤,通过间接ELISA及竞争ELISA法,在筛选过程中即采用自建参考品进行灵敏度和药物交叉反应评价检测,获得能稳定分泌抗MOP的单克隆杂交瘤细胞株。制备腹水并纯化获得特异性抗MOP单克隆抗体(mAb),对抗体的效价、特异性、纯度、亚类进行鉴定分析后将其应用于侧向免疫层析方法检测尿液样本中的MOP。结果:成功获得1株稳定分泌抗体的阳性细胞株,用建立的侧向免疫层析方法检测临床样品达到国内、国际市场要求的灵敏度、特异性要求。结论:成功筛选出一株稳定分泌抗MOP抗体的杂交瘤细胞株,该细胞株分泌的抗体应用于侧向免疫层析检测方法中,能快速、特异、灵敏地检测出临床样品中的MOP,为MOP快速诊断试剂的研制提供了关键材料。

抗美沙酮单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用

目的:制备抗美沙酮(MTD)单克隆抗体(mAb),并将筛选到的抗体应用于侧向免疫层析方法检测尿液中MTD。方法:用美沙酮BSA偶联蛋白(MTD-BSA)免疫纯系Balb/c小鼠,采用直接及间接ELISA法进行药物交叉反应,筛选获得能稳定分泌抗MTD的单克隆杂交瘤细胞株。制备腹水,纯化后得到特异性抗MTD单克隆抗体(mAb),进行效价、特异性、纯度、亚类的鉴定分析,并用筛选到的抗体建立检测MTD的侧向免疫层析方法。结果:成功获得1株稳定分泌抗体的阳性细胞株,用建立的侧向免疫层析方法检测临床样品与对照方法比较总符合率为100%。结论:成功筛选出了能稳定分泌mAb的细胞株,抗体应用于侧向免疫层析检测方法中,能快速、特异、灵敏地检测出临床样品中的MTD,为临床应用快速检测MTD指标提供了方法。