肠胶质细胞系TRPV4依赖性Ca^(2+)内流、ATP释放与炎症因子表达

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在调节肠胶质细胞外Ca^(2+)内流中的作用及其意义。方法收集大鼠肠胶质细胞系CRL-2690、大鼠肠上皮细胞系IEC6和人胚肾细胞系HEK293T样本,采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法检测TRPV4的mRNA、蛋白表达与定位;将CRL-2690细胞依次分为GSK组与GSK+HC组,低渗组与低渗+HC组,GdCl_(3)组与GdCl_(3)+HC组以及CaCl_(2)组与CaCl^(2+)HC组,采用Fura-2荧光探针和单细胞荧光Ca^(2+)检测仪评估CRL-2690细胞中TRPV4通道活性。将CRL-2690细胞分为对照组、GSK组与GSK+HC组,通过荧光素-荧光素酶实验测量细胞ATP的释放水平;采用RT-qPCR检测炎症相关基因GFAP、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达。结果在大鼠肠胶质细胞系CRL-2690中检测到TRPV4 mRNA和蛋白表达;TRPV4特异性激动剂GSK1016790A和低渗透压刺激明显增强了CRL-2690细胞内钙荧光强度,而TRPV4特异性抑制剂HC067047可抑制此作用(0.43038±0.06365 vs 0.00423±0.00578,P<0.0001);钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)激活诱导的外Ca^(2+)内流也可被HC067047所抑制(P<0.05);功能上,激活TRPV4可促ATP释放、EGC反应性增生标志物GFAP和炎症因子IL-1β、IL-6的表达,并抑制抗炎因子IL-10的表达,该作用可被HC067047所抑制(P<0.05)。结论激活TRPV4可引起肠胶质细胞外Ca^(2+)内流,并促进ATP释放与炎症因子表达,可能参与肠道炎症的发生。

川东岳门行意真传《长生内丹功》祛病养生探讨

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