甘蔗转录激活因子ScCBF1基因的克隆与表达分析

植物在受到低温、高盐、干旱等非生物逆境胁迫后,CBF结合因子(C-repeat/dehydration-responsive element binding factor)会诱导一系列非生物胁迫应答基因的表达,在提高植物抗逆性方面具有重要作用。本研究利用生物信息学和RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)方法从甘蔗中克隆到1个新的CBF类基因,命名为Sc CBF1。该基因的开放读码框(open reading frame,ORF)长度为603 bp,编码200个氨基酸,编码蛋白相对分子质量为22.80 k D,理论等电点为10.31。氨基酸序列比对结果表明,Sc CBF1与高粱(Sorghum bicolor)和玉米(Zea mays)中该蛋白相似度分别是96%和94%。进化分析表明Sc CBF1与高粱的亲缘关系最近。q RT-PCR表达分析结果表明,Sc CBF1在甘蔗根、茎、叶中均有表达,在根中表达量最高。Sc CBF1在低温、干旱、脱落酸(ABA)胁迫下诱导表达,而高盐抑制Sc CBF1的表达。成功构建了原核表达载体p GEX-6P-1-Sc CBF1,通过IPTG诱导,实现了Sc CBF1蛋白在大肠杆菌中的表达。