人诱导性多能干细胞建系及肝细胞定向分化的研究

目的 探讨建立人诱导性多能干细胞（iPSC）及其在体外快速高效诱导分化为肝细胞样细胞的可能.方法 用核转染的方法将含有八聚体结合转录因子3/4（Oct3/4）和p53短发卡RNA（shRNA）、转录因子性别决定区Y框蛋白（Sox）2和Kruppe样因子4（KLF4）、LMYC和LIN28的质粒导入健康人的皮肤成纤维细胞中,将其重编程为iPSC后并通过细胞碱性磷酸酶染色、细胞免疫荧光染色及反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术对建立的iPSC进行鉴定.在体外,按照肝脏正常发育的生长进程,将iPSC向肝系细胞方向分化,于倒置显微镜下连续观察iPSC的形态学变化,并采用细胞免疫荧光染色方法检测各分化阶段的诱导细胞中特异性细胞分子标志表达.结果 成功获得与人胚干细胞相似形态特征的iPSC,并且碱性磷酸酶染色呈阳性,细胞免疫荧光染色及RT-PCR结果均显示建立的iPSC表达干细胞多能性标记分子Oct3/4、Sox2、Nanog、阶段特异性抗原4（SSEA4）和肿瘤排斥抗原-1-60（TRA-1-60）.在体外研究中,iPSC可成功被定向诱导分化为肝细胞样细胞,且70％ - 80％的诱导细胞表达肝细胞特异性标记蛋白白蛋白（ALB）及唾液酸糖蛋白受体1（ASGPR1）.结论 iPSC能够在体外高效分化为有功能的肝细胞样细胞.

循环肿瘤细胞与甲胎蛋白联合检测诊断原发性肝癌

目的探讨循环肿瘤细胞（CTC）、甲胎蛋白（AFP）单独及联合检测诊断原发性肝癌的临床价值。方法纳入2013年11月至2015年9月在华中科技大学同济医学院附属同济医院行同种异体肝移植术的患者69例。所有患者术前抽血检测AFP，采用Cell Search System设备检测外周血CTC，并进行统计学分析。结果肝癌组患者（n=42）血液CTC和AFP水平明显高于良性肝病组（n=27），差异均有统计学意义（P〈0．05）。就单个肿瘤标志物而言，CTC的敏感度、特异度和准确度分别为69．0％、92．6％和78．3％，均高于AFP。AFP和CTC的受试者工作特征（ROC）曲线下面积分别为0．780和0．814。CTC和AFP联合检测其敏感度为83．3％，准确度为82．6％，均显著高于单项检测（P〈0．05）。此外，在AFP〈400μg／L的肝癌患者中，CTC阳性率为61．3％。结论CTC对肝癌的诊断效能优于AFP，联合检测CTC和AFP可提高肝癌的诊断敏感性。CTC对AFP〈400μg/L的肝癌患者有一定的诊断价值，CTC检测可提高AFP阴性肝癌患者的诊断率。

肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞数量与肝移植后肿瘤早期复发的相关性研究

目的探讨肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTC）数量与肝移植后肿瘤早期复发的相关性。方法以2013年10月至2014年11月因原发性肝癌行肝移植的42例受者为对象，肝移植前影像学检查均未见肿瘤肝外转移灶，移植后均经病理检查明确原发病的诊断。采用CellSearchSys-tern设备检测患者肝移植前外周血CTC，肝移植后对所有受者随访1年，随访期间记录肿瘤复发和转移情况，用x2检验和Cox风险比例模型分析受者肿瘤的复发时间、临床病理资料与CTC的关系。结果42例受者中肝移植前外周血CTC阴性者13例（31．0%，13／42），呈阳性者29例（69．0％，29／42）。单因素分析显示，CTC的数量与肿瘤分化程度（X2=10．403，P=0．006）和TNM分期（X2=7．119，P=0．005）有关。随访期间，42例受者中有20例复发（其中18例CTC阳性），单因素分析显示，TNM分期（X2=5．599，P=0．010）、CTC数量（X2=6．083，P=0．007）与肝癌早期复发有关。Cox风险比例模型显示，CTC数量可以作为肝癌患者肝移植后预测肿瘤复发时间的独立预后因素，CTC≥1个者的复发时间明显早于CTC阴性者（P〈0．05）。结论肝癌患者肝移植前外周血中检出CTC者，其肝移植后早期易肿瘤复发；CTC可以作为判断肝癌患者肝移植后肿瘤复发时间的独立指标。