唾液酸对正常造血细胞及白血病细胞增殖分化的影响

本实验以测定细胞电泳率(EPM)反映细胞表面唾液酸相对含量。发现胎肝细胞电泳率明显高于成年骨髓细胞,经神经氨酸酶(NA)处理胎肝细胞、骨髓细胞、L_(801)急性白血病细胞和KCL-22慢性白血病细胞后,细胞EPM均明显下降。细胞集落数及细胞形态学检测表明,NA处理后,多向造血干细胞(CFU-S)增殖能力减弱,向粒系的分化增强;KCL-22细胞生成的集落数明显减少,成熟细胞的比例明显增加。

L_(801)急性粒系白血病小鼠发病的某些动力学特征

L_(801)急性粒系白血病小鼠传代,稳定后,取小鼠在发病过程中第1、3、5、7天的骨髓细胞,观察某些动力学特征。结果显示,第3天开始,骨髓细胞的粒一单核祖细胞产率显著减少,第5天开始,电泳率显著增高,并有染色体核型改变。文中讨论了这些变化的意义。

补益中药复方对环磷酰胺处理小鼠粒系造血的影响

为了从传统中药中寻找防治化疗和放疗所致骨髓粒系造血抑制的药物，通过建立实验性环磷酰胺（Cy：0．08g／kg）低白细胞血症小鼠模型，观察了参芪补苦复方（GAFS：13．9g／kg·dip6d）对粒系造血的影响。结果表明：GAFS对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用（P＜0．01），能防治骨髓有核细胞数、粒-巨噬系祖细胞（CFU－GM）数的减少（P＜0．01），促进CFU－GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化，且其促粒系造血作用优于鲨肝醇。

2型重组腺相关病毒介导的β-地中海贫血基因治疗实验

目的探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)能否有效转染重型β-地中海贫血患者造血细胞,通过体外途径基因治疗地中海贫血。方法 6只BALB/c裸小鼠分为转染组(n=4)和未转染组(n=2),经X射线照射后,分别移植入经rAAV2β-珠蛋白病毒转染(MOI=50)或未转染的β41-42/β654杂合子型重型β-地中海贫血流产胎儿造血细胞,转染后第28天和第70天分别处死rAAV2转染小鼠(n=2)和未转染受体小鼠(n=1)。采用RT-PCR、等位基因特异性PCR(ASPCR)法检测rAAV2介导的人β-珠蛋白基因在小鼠骨髓中的表达,并以高压液相色谱法量化分析受体小鼠外周血中人β-珠蛋白肽链的水平。结果①RT-PCR于所有受体小鼠样本中均可检测到人β-actin和人β-珠蛋白基因的表达。②ASPCR检测中,β41-42突变基因稳定表达于所有受体小鼠,β654突变基因仅在移植后第70天受体小鼠样本中被检测到;移植后第28天,rAAV2转染及未转染小鼠体内均可检测到主要来自于β654突变基因的正常β-珠蛋白基因表达;但至移植后第70天,仅rAAV2转染小鼠骨髓样本中仍可检测到rAAV2-β-globin载体介导的正常β-珠蛋白基因表达。③移植后第70天处死的转染小鼠外周血中人β链/α链分别为0.328和0.325,相对未转染组0.135的比值,两者的增加百分比高达144.78%和142.54%。结论经rAAV2介导基因修饰后的重型β-地中海贫血患者造血细胞在体内可长期稳定表达正常人β-珠蛋白基因,而其分化产生的外周血人红系细胞内β-珠蛋白肽链的合成增加。

骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用

目的 :探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法 :制备骨髓成纤维细胞条件培养液 (bonemarrowfibroblastsconditionedmedium ,BMF CM) ,分别观察BMF CM或BMF CM联合IL 11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的影响及BMF CM对巨核系祖细胞生成的影响 ,并用RT PCR的方法检测Meg 0 1人巨核细胞系细胞NF E2mRNA的表达。结果 :BMF CM促进成熟巨核细胞生成。BMF CM联合IL 11促进成熟巨核细胞生成的效果更佳。BMF CM能促进巨核系祖细胞的生成。将 30 %BMF CM加入Meg 0 1人巨核细胞系培养体系培养 4h ,与对照组相比 ,NF E2表达增强。结论

Hu联合GM-CSF对K562细胞生长-凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨羟基脲（hydroxyurea，Hu）及Hu联合粒系-巨噬系集落刺激因子（granulocyticmacrophagecolony－stimulatingfactor，GM－CSF）对慢性粒细胞白血病（chronicmyelogenousleukemia，CML）细胞株K562细胞生长及凋亡相关基因表达的调节效应。方法：以Hu及Hu联合GM-CSF培养K562细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）来分析培养48小时后bcr-abl、bax、c－myc基因表达水平。结果：Hu显著抑制bcr－abl基因表达，促进bax基因表达，但对c－myc基因表达无影响。GM－CSF可部分桔抗Hu对bcr－abl、bax基因表达的调节效应，显著上调c－myc基因表达水平。结论：除直接细胞毒作用外，Hu可通过下调bcr－abl和上调bax基因表达水平而诱导细胞死亡或凋亡。由于GM-CSF有部分持抗化疗药物的效应，故临床上在采用Hu治疗CML患者的同时，宜慎重使用GM－CSF。

中草药及其有效成分促粒系造血的研究进展

白细胞减少症发病率呈上升趋势，目前尚乏满意疗法，而部分中草药对此症有较好疗效。现将对迄今为止证实有确切疗效的升白细胞中草药及其有效成分在促进骨髓粒系造血方面的药理及临床研究进展作一介绍。

血清及细胞因子对人骨髓间质干细胞增殖的影响

目的 :探讨影响体外骨髓间质干细胞增殖的因素。方法 :取胸部外科手术无血液系统疾病病人肋骨 ,采用密度梯度离心法分离单个核细胞 ,以每皿 5× 10 5个的细胞浓度接种 ,9d后 ,瑞士 吉姆萨染色 ,计数集落并进行统计分析。结果 :在 5 %～ 30 %的血清浓度范围内 ,骨髓间质干细胞集落数随血清浓度的升高而增多。bFGF ,IL 1α ,IL 3,IL 6等细胞因子可促进骨髓间质干细胞的增殖。结论 :血清浓度与细胞因子bFGF ,IL 1α ,IL 3,IL

骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖的促进作用

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和<10 kDa组分,分别观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞集落生成的影响。用Wright’S Giemsa染色计数内皮细胞集落及检测骨髓内皮细胞的vWF,通过[3H]- TdR掺入量,观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的影响,并用分子杂交方法检测内皮细胞表达的细胞因子,从几个方面来研究mBMEC-CM对骨髓内皮细胞增殖的作用。结果显示,骨髓内皮细胞vWF 检测阳性。mBMEC-CM原液及其分子量>10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR 掺入量;分子量<10 kDa组分对骨髓内皮细胞集落增殖无明显刺激作用,也不能增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。外源加入IL-6、IL-11、SCF、GM-CSF、VEGF、bFGF 6种细胞因子能明显刺激骨髓内皮细胞集落增殖,SCF、VEGF、bFGF能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。Atlas array膜杂交实验显示骨髓内皮细胞内源性表达GM-CSF、SCF、MSP-1、endothelin-2、thymosin β10、connective tissue GF、PDGF-A chain、MIP-2α、PlGF、neutrophil activating protein ENA-78、INF-γ、IL-1、IL-6、IL-13、IL-11、inhibin-α等细胞因子的mRNA。上述结果提示,骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖具有促进作用。

高脂饮食引起大鼠动脉血管内皮细胞衰老

目的:研究高脂饮食对大鼠血管内皮细胞衰老的影响。方法:大鼠高脂饲料喂养12周后测定血脂的变化,HE染色分析胸主动脉和肾动脉血管结构的改变;胶原酶灌注方法分离胸主动脉和肾动脉血管内皮细胞,应用免疫细胞化学的方法鉴定内皮细胞;应用细胞化学染色的方法检测衰老相关的半乳糖甘酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)活性。结果:SD雄性大鼠高脂饲料喂养12周后,大鼠血浆三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显升高,胸主动脉和肾动脉出现明显的粥样硬化改变;胸主动脉和肾动脉血管内皮细胞SA-β-gal活性明显增加,表现为较强的β-gal染色。结论:高脂饮食引起大鼠胸主动脉和肾动脉粥样硬化改变,动脉血管内皮细胞衰老增加。

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液支持卵黄囊造血干/祖细胞的体外生长

目的观察小鼠骨髓内皮细胞条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）对卵黄囊造血干／祖细胞体外生长的支持作用。方法取妊娠第８．５天的卵黄囊，经消化后获得卵黄囊细胞，取卵黄囊非贴壁细胞加入含１０％ｍＢＭＥＣ－ＣＭ和１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ中培养２４ｈ后，收集细胞做半固体培养。结果ｍＢＭＥＣ－ＣＭ在液体培养体系中能扩增卵黄囊造血干／祖细胞使粒－巨噬系集落形成单位（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ，ＣＦＵ－ＧＭ）和高增殖潜能集落形成细胞（ｈｉｇｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ－ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ，ＨＰＰ－ＣＦＣ）的产率增加，经２４ｈ液体培养后的ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的数目分别为培养０ｈ对照组的１１９．５％和１３０．８％（Ｐ＜０．０５＝；ｍＢＭＥＣ－ＣＭ联合ｆｌｔ３配基（ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）和血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）后，其扩增ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的能力明显增强，ｍＢＭＥＣ－ＣＭ联合ＦＬ和ＴＰＯ经２４ｈ液体培养后的ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ的数目分别为培养０ｈ对照组的１３２．０％和１７６．９％?

脐血内皮细胞对脐血早期造血细胞的体外扩增作用

目的:观察脐血内皮细胞联合细胞因子组合通过非接触方式对脐血早期造血细胞的扩增作用。方法:采用优化的内皮细胞培养基培养脐血内皮细胞;实验组分为细胞因子组合组(SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF,CKs组)和脐血内皮细胞联合CKs非接触脐血CD34+细胞培养组(noncontact组)。Min-iMACS磁珠分选脐血CD34+细胞;检测CKs组与nocontact组培养7d后脐血早期造血细胞的扩增倍数。结果:noncontact组和CKs组都能扩增早期造血细胞,noncontact组对早期造血细胞的扩增倍数显著优于CKs组的扩增倍数。结论:脐血内皮细胞联合CKs非接触培养对脐血早期造血细胞的扩增作用显著优于CKs组。

细胞因子短期扩增对造血干／祖细胞黏附和迁移能力的影响

目的:探讨干细胞因子(SCF)+白细胞介素-6(IL-6)短期扩增对CD34+造血干/祖细胞黏附和迁移能力的影响。方法:用密度剃度离心的方法分离脐血CD34+细胞,经SCF和IL-6孵育48 h,用CCK-8方法检测CD34+细胞增殖能力;用流式细胞仪检测处理前后的CD49d(VLA-4)、CD11 a(LFA-1)、CD62L(L-selectin)及CD184(CXCR4)的表达。用纤连蛋白(FN)包被96孔板,检测经或未经因子扩增的CD34+细胞的黏附能力。扩增的CD34+细胞悬浮于transwell培养板的上层,下层添加基质细胞衍生因子(SDF-1),流式细胞仪检测迁移细胞数,计算迁移率。结果:经SCF+IL-6处理48h后CD34+细胞扩增近3倍;表达CD49d、CD11 a、CD62L及CD184的CD34+细胞的百分数分别由原来的26.34%±5.37%、17.63%±4.57%、46.38%±6.61%和9.58%±1.56%增加到65.67%±8.72%、56.67%±6.34%、84.76%±9.57%和19.32%±3.64%(P<0.01)。扩增后的CD34+细胞对FN的黏附能力及在SDF-1诱导下的迁移作用都显著增强(P<0.01)。结论:SCF+IL-6短期扩增CD34+造血干/祖细胞显著增加细胞的黏附能力,增加SDF-1诱导的迁移作用,可能是SCF+IL-6促进归巢的主要机制之一。

2型腺相关病毒转导人骨髓CD34^+细胞与间充质干细胞

目的:探讨2型重组腺相关病毒(AAV2)载体能否有效转导人骨髓CD34+细胞与间充质干细胞。方法:构建、包装、纯化携带绿色荧光蛋白基因的2型重组腺相关病毒(rAAV22/GFP),转染骨髓CD34+造血干/祖细胞和间充质干细胞,转导后48 h在荧光显微镜下观察GFP的表达,并比较羟基脲(HU)处理前后rAAV2/GFP对CD34+细胞的转染效率。结果:rAAV2/GFP对CD34+细胞的转染效率为5.3%±1.7%。经羟基脲预处理后达13.2%±2.8%,rAAV2/GFP对间充质干细胞的转染效率为23%±3.6%。结论:rAAV2对间充质干细胞的转染效率高于骨髓CD34+细胞,羟基脲预处理可以明显提高rAAV2对CD34+细胞的转染效率。

苦参促粒系造血机制及对白血病HL-60细胞的诱导凋亡作用

目的 :进一步探讨苦参促粒系造血机制及新的抗白血病作用机理。方法 :建立实验性环磷酰胺 (Cy :0 .0 8g/kg)低白细胞血症小鼠模型 ,观察苦参对粒系造血的影响和对白血病HL - 6 0细胞的诱导凋亡作用。结果 :苦参对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用 (P <0 .0 1) ,能增加骨髓有核细胞、粒 -巨噬系祖细胞 (CFU -GM)数 (P <0 .0 1)促进CFU -GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化 ,且其促粒系造血作用与鲨肝醇一致。此外 ,苦参可明显诱导白血病HL - 6 0细胞凋亡 ,呈药物浓度 -效应关系。结论

siRNA阻断猪内皮细胞组织因子表达对异种移植中抗凝作用影响的研究

目的探讨在异种移植中,siRNA阻断猪内皮细胞组织因子表达后对细胞抗凝作用的影响。方法 siRNA转染猪内皮细胞后,real-time PCR及流式细胞仪分别检测组织因子的基因及蛋白表达水平;并将转染与未转染siRNA的内皮细胞分别与人血液共孵育60 min,检测凝血块生成及血液中血细胞数量。结果 re-al-time PCR及流式细胞仪检测siRNA转染后,猪内皮细胞组织因子的基因及蛋白表达水平明显降低,与人血液共同孵育60 min后,siRNA转染组和未转染组的凝血块生成和血液中血细胞计数没有明显的差异。结论在异种移植中,猪内皮细胞组织因子表达的降低没有明显的增强内皮细胞抗凝作用。

苦参联合胎肝低分子抑瘤物抗白血病及其机制

目的 :探讨苦参 (SF)、胎肝低分子抑瘤物 (LMW NTS)联合用药对正常人骨髓粒 巨噬系造血祖细胞(CFU GM )和急性髓性白血病细胞的影响及其作用机制。方法 :采用CFU GM集落培养、细胞液体培养、Wrigh giemsa染色、3H TdR掺入实验、DNA片段凝胶电泳和RT PCR等方法 ,观察SF和LMW NTS联用对白血病的作用。结果 :SF和LMW NTS联用 ,明显提高抑制白血病细胞增殖的能力 ,促进白血病细胞的凋亡 ,诱导白血病细胞中原癌基因c Myc的下调 ,抑制正常造血祖细胞CFU GM的作用明显低于抑制白血病细胞的作用。结论 :联合用药抗白血病的效果 。

苦参抗急性髓性白血病

目的 :研究苦参对急性髓性白血病 HL- 6 0细胞系作用 ,探讨苦参抗白血病的作用及机理。方法 :采用细胞培养计数 ,3H- Td R掺入实验 ,NBT/ MTT比值实验研究苦参抗白血病的作用及机理。结果 :苦参浓度在 2 .0～ 8.0 mg/ ml范围内 ,苦参抑制 HL- 6 0细胞的 DNA合成 ,抑制白血病细胞增殖 ,并诱导 HL- 6 0细胞分化。结论