宫腔粘连患者的助孕治疗进展

宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是一种由感染或创伤造成子宫内膜基底层损伤而引起的妇科常见性疾病,可导致月经减少、不孕或复发性流产等症状,已成为女性继发性不孕的主要病因之一。虽然IUA不会危及生命,但其严重影响育龄妇女的身心健康,是生殖医学领域亟待解决的临床问题。子宫内膜形态结构的破坏、生理功能的缺失以及宫腔微环境的改变是IUA影响生育力的主要原因。本文基于IUA的疾病特征,提出个体化的助孕策略以及围孕期相关问题的应对方案,指导IUA患者的生育全程一体化管理,以期改善生育结局。

经血来源干细胞及其外泌体的应用现状和前景

背景:经血来源干细胞是从女性月经血中提取的,有多向分化潜能的间充质干细胞,具有易获取、弱免疫原性、增殖能力强、传代稳定及无伦理争议等特点。经血来源干细胞中提取的外泌体在组织再生和损伤恢复方面具有与经血来源干细胞相同的功效。经血来源干细胞及其外泌体已经在多种疾病治疗的临床前研究和临床研究中取得了令人兴奋的成果。目的:文章将就经血来源干细胞及其外泌体相关的基础研究与临床应用研究进展及未来潜在的应用前景和需要考虑的问题加以综述。方法:应用计算机检索PubMed、中国知网期刊全文数据库2000-2022年与经血来源干细胞和经血来源干细胞外泌体相关的文献,最终筛选出75篇进行综述分析。结果与结论:①经血来源干细胞是具有多向分化功能的间充质干细胞,具有来源丰富、免疫原性弱和增殖能力强的特点。②经血来源干细胞外泌体是发挥经血来源干细胞旁分泌功能的主要介质,在促进组织再生和损伤修复方面具有与来源细胞相同的功效。二者都具有抗炎、抗凋亡和促进组织器官功能恢复的能力,并在各系统疾病的动物实验模型中展现了较为优秀的治疗水平,其中经血来源干细胞已经在宫腔粘连、充血性心力衰竭、多发性硬化及病毒性肺炎等疾病中应用于临床患者,在没有产生肿瘤或过敏反应等不良作用的情况下显著延缓了疾病的进展。③但从经血来源干细胞从2007年被发现至今只过了短短15年,因此经血来源干细胞及其外泌体具有试验样本不足和应用年限过短的短板,仍需长期的临床前研究验证其安全性和有效性,此外,要真正应用于临床,也需要找到更加规范的给药方式,因此未来出台相关应用指南也是必要的。④经血来源干细胞及其外泌体结合三维支架技术已在盆腔器官脱垂、糖尿病导致的皮肤损伤、骨软骨缺损及膀胱壁重建的动物实验研究中验证了治疗的有效性,未来希望借助经血来源干细胞及其外泌体的各种优点与组织工程学和材料学相结合,逐步开展临床研究。

月经血干细胞对薄型子宫内膜大鼠的治疗修复作用

目的:探究月经血干细胞(MenSC)移植对薄型子宫内膜的治疗修复作用及机制。方法:选取8~10周龄无特定病原体级雌性SD大鼠30只,随机分为模型对照组和MenSC组,每组各15只。两组通过化学损伤法在大鼠一侧子宫内膜建立薄型子宫内膜损伤模型,建模7 d后分别将等渗氯化钠溶液及MenSC多点注入大鼠损伤侧子宫内,另一侧子宫作为手术对照组不做任何处理。第三代传代MenSC治疗薄型子宫内膜模型大鼠。苏木精-伊红染色观察子宫内膜组织结构;免疫组织化学染色观察子宫内膜组织细胞角蛋白(CK)18、波形蛋白表达;5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测子宫内膜组织中细胞增殖情况;免疫荧光染色检测子宫内膜组织血管内皮标志物CD34和血管内皮生长因子(VEGF)的表达;实时逆转录PCR检测子宫内膜组织白血病抑制因子(LIF)、整合素β3(ITGβ3)及同源异型框A10(HOXA10)的基因表达。两组分别按雌鼠和雄鼠2∶1比例进行合笼实验,观察MenSC对模型大鼠生殖功能的影响。结果:与手术对照组比较,模型对照组子宫内膜薄,腺体及血管数少(均P<0.01),MenSC移植后大鼠子宫内膜厚度、血管数、腺体数明显增加(均P<0.01)。MenSC组子宫内膜基底层增殖细胞较模型对照组多(P<0.05),且MenSC组子宫波形蛋白、CK18、CD34及VEGF的表达均明显高于模型对照组(均P<0.05),LIF、ITGβ3及HOXA10基因表达水平也较模型对照组明显升高(均P<0.05)。妊娠实验结果显示,MenSC组较模型对照组胚胎种植数增加(P<0.05)。结论:MenSC移植通过促进子宫内膜细胞增殖和子宫内膜波形蛋白、CK18、CD34及VEGF表达以利于模型大鼠子宫宫腔形态和功能恢复,从而提高模型大鼠子宫内膜容受性,改善模型大鼠的生育能力。

宫腔粘连发病的分子机制研究进展

宫腔粘连(IUA)是一种影响女性生殖健康的难治性疾病。随着医学的发展,对其病因学的研究不断深入,目前较明确可导致IUA的高危因素有:妊娠后清宫术、剖宫产术后、滋养细胞疾病清宫术、产后出血刮宫术、诊断性刮宫、宫腔镜手术、宫内节育器放置、生殖道结核感染、米勒管畸形等。子宫内膜纤维化是IUA的主要病理特征。多种信号刺激不同的信号通路后,引起体内多种生长因子及细胞因子相互作用共同促进纤维化的发展,最终导致IUA的发生。目前临床上IUA的治疗和预防并不理想,尤其是中重度IUA。因此,研究IUA的发病机制将有助于临床实行靶向治疗。本文就近年来IUA的病因学研究和分子机制研究新进展进行综述。

利用月经血建立的经血源性基质干细胞系

背景:经血源性基质干细胞被证实是一种新型的成体干细胞,目前国内关于其系统的建系方法报道极少。目的:建立经血源性基质干细胞系,并鉴定其表型和多能性。方法:收集健康成年女性的月经血,通过密度梯度离心法分离出经血源性基质干细胞进行培养,观察细胞的形态及增殖特性;采用CCK-8法检测各株细胞的增殖能力,定期收集细胞进行核型分析,采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD34,CD38,CD44,CD45,CD73,CD90,CD105,Oct-4的表达,对细胞进行体外成脂和成骨诱导分化并鉴定。结果与结论:成功从6名健康志愿者的经血中分离获得4株经血源性基质干细胞系。细胞呈现典型的梭状结构,具有46,XX核型,能在体外稳定迅速增殖,传代后大约48 h进入对数生长期,表达CD44,CD73,CD90,CD105及Oct-4,不表达CD38,CD34,CD45;成脂诱导22 d后油红O染色阳性,成骨诱导2周后茜素红染色阳性。实验表明经血源性基质干细胞具备扩增迅速、核型稳定、多潜能性等优点,通过建立经血源性基质干细胞系,为进一步的临床治疗应用以及科学研究奠定了基础。

中西医结合治疗输卵管阻塞疗效观察

目的 :比较中西医结合疗法与单纯西医输卵管通液治疗输卵管阻塞的治疗效果。方法 :80例已证实输卵管阻塞患者随机分为实验组与对照组 ,实验组先服 1个月中药汤剂 ,月经干净后 3～ 7天行输卵管通液治疗 ,疗程 3～ 6个月。结果 :实验组通畅 3 2例 ,其中妊娠 2 2例 ,有效 6例 ,总有效率 95 % ;对照组通畅 4例 ,其中 3例妊娠 ,有效 14例 ,总有效率45 %。χ2检验 ,P <0 .0 5 ,有显著差异。实验组中 ,输卵管间质部、峡部、壶腹部阻塞治疗效果好 ,输卵管积水治疗效果不佳。结论 :本中药方剂加西医输卵管通液是治疗输卵管阻塞的一种行之有效、安全、可靠的方法。

彩超观察子宫动脉及螺旋动脉能量图与体外受精的关系

目的 :为了探讨子宫动脉及螺旋动脉的能量与体外受精 -胚胎移植 (IVF- ET)结局的关系。方法 :2 0 0 1年 10月～ 2 0 0 2年 6月对 12 4例行常规 IVF助孕的妇女于其注射 HCG之日利用三维彩色多普勒观察子宫动脉及螺旋动脉的 PI、 RI及子宫内膜厚度。结果 :5 2例妊娠 ,72例未妊娠。妊娠组与未妊娠组不孕原因及超促排卵的一般资料无差异 ,而妊娠组螺旋动脉及子宫动脉的 RI、 PI低于未妊娠组 ,P<0 .0 5 ,有显著差异 ,两组子宫内膜厚度无显著差异。结论

孕妇感染巨细胞病毒对胎儿、新生儿的影响

巨细胞病毒引起胎儿、新生儿先天性感染,近年来已引起人们的关注。本文就孕妇感染巨细胞病毒及对胎儿、新生儿的影响、实验室诊断以及防治等问题加以详细阐述。着重叙述先天性巨细胞病毒感染的早期诊断方法,以求做到优生及优育,并能降低围产儿死亡率。

利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系

背景：目前人胚胎干细胞建系的技术路线主要有囊胚法、核移植法和胚胎单卵裂球法，但由于破坏胚胎，涉及诸多伦理问题。目的：探讨利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系的可行性。设计、时间及地点：细胞学体内外实验，于200501／200608在沈阳市妇婴医院生殖中心完成。材料：妊娠13．5d的ICR鼠20只用于制各小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，10周龄SICD鼠2只用于人胚胎干细胞体内分化实验。行IVF／ICSI助孕患者自愿捐献的冷冻胚胎，由沈阳市妇婴医院生殖中心提供。方法：复苏冷冻的胚胎，采用序贯培养法进行囊胚培养，用免疫外科方法去除滋养细胞，将得到的胚胎内细胞团接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞上培养并传代。主要观察指标：取不同代次的培养细胞，分别进行生长特性、碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化全能性鉴定。结果：20个解冻卵裂期胚胎，获得9个囊胚，分离完整的内细胞团共7个，从7个内细胞团培养出2个人胚胎干细咆系，其中一个细胞系连续培养76代（20个月）。所培养的细胞具有人胚胎干细胞的共同生物学特性，即细胞呈扁平或圆形，可见1—3个核仁：碱性磷酸酶以及SSEA．3，SSEA．4，TRA-1．81，TRA-1-60，OCT-4均呈阳性表达，而SSEA-1呈阴性：核型正常，为46，XX核型；将细胞注射入SCID鼠皮下形成肿瘤，病理切片显示为成熟畸胎瘤：短串联重复分型结果显示所形成的畸胎瘤与人胚胎干细胞为相同的遗传背景。结论：实施体外受精-胚胎移植的夫妇怀孕后，多余的冷冻保存胚胎所分离培养的细胞具备人胚胎干细胞的所有特性，是建立人胚胎干细胞系很好的材料来源。

基因探针监测巨细胞病毒潜伏感染的母儿间传播

本文采用基因探针检测孕妇静脉血及新生儿脐静脉血白细胞中ＣＭＶ－ＤＮＡ，同时应用ＥＬＩＳＡ检测其血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ，结果：１０例孕妇ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性，占８．７％（１０／１１５），这１０例孕妇血ＩｇＧ均阳性，ＩｇＭ均阴性；１７例新生儿ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性，占１４．３％（１７／１１９），其中ＩｇＭ阳性２例，占１．７％（２／１１９）。本次研究中配对者７９例，母儿ＣＭＶ－ＤＮＡ均阳性者８例，新生儿ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性而母亲阴性者４例。上述ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者均无临床症状。研究结果提示基因探针可监测ＣＭＶ的潜伏感染，从而进一步研究ＣＭＶ感染的母儿传播机制。

补肾助孕汤对小鼠生殖能力影响的实验研究

目的探讨中药补肾助孕汤对小鼠生殖能力的影响。方法 60只昆明雌性小鼠随机分为实验组与对照组。实验组每天2次经鼠胃管灌注补肾助孕汤,对照组同时给予生理盐水灌胃,分别于给药10、20天处死小鼠,每次每组15只,放射免疫法检测血清雌二醇和孕酮水平;HE染色,行子宫、卵巢组织形态学观察;免疫组化法测定子宫内膜白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和降钙素(calcitionin,CT)表达。结果给药10、20天,实验组小鼠子宫、卵巢重量,血清雌二醇、孕酮水平以及子宫内膜LIF、EGF、CT表达均较对照组同期增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且以给药20天作用为优(P<0.05)。组织学检查显示,实验组小鼠卵巢各级卵泡数目增加,子宫内膜腺体数目增多,子宫内膜增生,复层排列,基质细胞增多,以给药20天最明显。结论补肾助孕汤可以促进小鼠生殖器官的发育,促进雌二醇、孕酮分泌及卵泡生长;增加子宫内膜的容受性,从而增强其生殖能力。

经阴道彩色多普勒超声在辅助生殖技术中的应用

目的：为了监测卵巢血流与IVF结局的关系。方法：2002年11月-2003年11月对来妇婴医院行常规IVF助孕的174例妇女应用经阴道彩色多普勒测定子宫动脉和卵巢动脉的搏动指数、阻力指数。结果：174例接受常规IVF-ET助孕的妇女，妊娠55例，未妊娠119例。妊娠组子宫动脉及卵巢动脉的PI、RI与未妊娠组比较，P〈0．05，有显著性差异；两组子宫内膜厚度比较，无显著差异，P〉0．05，A型子宫内膜妊娠率高。结论：在IVF-ET周期中子宫动脉和卵巢动脉血流及子宫内膜类型可作为预测IVF结局的指标。

不同类型无精子症患者新鲜与冷冻精子妊娠结局比较

ICSI的成功应用是男性不育治疗史上的一项重大突破,在治疗男性不育具有重要意义[1]。ICSI技术现在已广泛应用于严重少、弱、畸精子症和无精子症患者,常规体外受精失败史以及行植入前遗传学检查等患者,这些患者可通过ICSI技术成功孕育自己的生物学后代。

育龄妇女的年龄与血清抗苗勒管激素水平的关系

目的:探讨育龄妇女的年龄与血清抗苗勒管激素(AMH)水平的关系。方法:将2015年5月至2016年8月期间于盛京医院辅助生殖中心门诊就诊的育龄女性进行大样本的回顾性研究,共2413例满足条件纳入研究。AMH检测方法是酶联免疫法。结果:不同年龄段的血清AMH水平与年龄呈负相关(r=-0.436,P<0.01)。育龄妇女不同年龄阶段的AMH的中位数:20至25岁为5.19 ng/ml,26至30岁为3.83 ng/ml,31至35岁为2.79 ng/ml,36至40岁为1.65 ng/ml,41至45岁的为0.64 ng/ml,大于45岁为0.23 ng/ml。结论:血清AMH的水平随年龄的增加而下降。

输卵管积水介入栓塞治疗160例临床体会

目的通过对160例输卵管积水患者进行介入性输卵管栓塞治疗,探讨该方法对于输卵管积水患者进行体外受精一胚胎移植(IVF-ET)前对积水进行预处理的可行性。方法选择160名因输卵管积水造成不孕的患者,应用微导管将铂金微弹簧圈送至输卵管间质部及峡部,对积水的输卵管进行栓塞。结果栓塞成功157例,无法栓塞1例,栓塞后弹簧圈发生移位2例,栓塞成功率98.2%。结论介入性输卵管栓塞术作为输卵管积水预处理的一种新方法,与目前常用的几种输卵管积水治疗方法如输卵管切除、结扎、造口和抽吸等相比,具有无手术及麻醉的并发症,安全有效,对卵巢功能无影响等特点,可使输卵管积水患者IVF-ET时避免受到输卵管积水的影响,是一种很有前途的治疗新技术。

子宫内膜基质细胞作为饲养层培养人胚原始生殖细胞

目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能。方法从5～9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素C处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养。结果PGCs可以在体外培养3个多月,传14代。这样培养的PGCs表达胚胎干细胞的多种标志,如碱性磷酸酶染色、SSEA和TRA抗原等。另外细胞保持正常的染色体核型。结论人子宫内膜基质细胞可以作为饲养细胞在体外培养人胚原始生殖细胞,保持未分化状态。

高通量测序技术在胚胎植入前遗传学检查中的应用

目的研究高通量测序技术在胚胎植入前遗传学检查中的应用价值。方法选择来医院辅助生殖中心就诊的患者,符合胚胎植入前遗传学检查标准,通过卵胞质内单精子注射受精,选择培养到第5~6 d质量较好的囊胚,取3~5个胚胎滋养层细胞进行活检,应用高通量测序技术行胚胎细胞全基因组测序,挑选检测未见异常的胚胎植入子宫。结果共对251例患者的1000个囊胚进行了全基因组检测,检测结果显示,155例有可移植胚胎,其中119例行解冻移植,均为单囊胚解冻移植;妊娠率71.4%,分娩率35.3%,流产率3.5%,引产率1.2%,其余继续妊娠中。活检胚胎1000例,胚胎检出率92.5%;染色体平衡易位者122例;染色体罗伯逊易位者43例,染色体倒位者11例,单基因病者12例;Y染色体微缺失7例以及反复流产等共计251例,其中染色体异常占较大比例。结论应用高通量测序技术行胚胎植入前遗传学检查,可降低反复流产率及患病胎儿的出生,提高临床妊娠率。

在人子宫内膜饲养层上生长的人原始生殖细胞生物学特性

背景:目前在胚胎多潜能干细胞建系和培养过程中,存在着建系率低、具有正常核型的干细胞系比率低等问题。目的:观察接种于人子宫内膜成纤维细胞饲养层上原代培养的人原始生殖细胞在体内外的生物学特性。设计、时间及地点:细胞观察,于2004-01/2005-04在沈阳市妇婴医院和中国医科大学完成。材料:人胚胎来源于流产孕妇,用于分离培养原始生殖细胞。人子宫内膜来源于因子宫肌瘤行子宫切除术的患者,用于制备成纤维细胞饲养层。清洁级10周龄雄性裸鼠2只,用于体内分化实验。方法:从人胚胎生殖嵴、肠系膜中消化分离的原始生殖细胞,将其接种在人子宫内膜成纤维细胞饲养层上传代培养。体内实验取连续传5代的2个细胞株,分别制备浓度为1×109L-1的细胞悬液,于每只小鼠两侧腹股沟处皮下各接种0.5mL,培养8周。体外分化采用无黏附特性的培养瓶和除去白血病抑制因子的原始生殖细胞培养液,以脱饲养层法悬浮培养扩增的细胞,直到拟胚体形成及贴壁分化。主要观察指标:通过免疫荧光检测胚胎干细胞特异性表面标志物的表达、碱性磷酸酶染色及染色体核型分析,对所培养细胞进行鉴定。检测裸鼠体内畸胎瘤的形成及组织分化。免疫组化染色观察体外肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白的表达。结果:①传至第2、7代的人胚胎原始生殖细胞SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81等表面标志物均呈阳性表达,碱性磷酸酶染色呈阳性,染色体分析为正常二倍体核型46XX。②接种8周末,2只小鼠均形成皮下畸胎瘤,其内存在囊括3个胚层的组织结构,包括皮脂腺、脂肪、腺体及腺上皮、鳞状上皮等。③培养第4天形成拟胚体,肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白均呈阳性表达。结论:人子宫内膜成纤维细胞可以作为人原始生殖细胞的饲养层细胞,传代后的原始生殖细胞仍保持胚胎干细胞的未分化状态和发育全能性。

绒促性素日孕酮水平对体外受精-胚胎移植结局预测价值研究

目的:探讨促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂与拮抗剂方案中注射人绒促性素(HCG)日孕酮(P)对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的预测价值。方法:回顾性分析635例IVF-ET助孕患者的临床资料,采用多因素Logistic回归分析和受试者工作特征曲线(ROC)探讨HCG日P对妊娠结局的预测价值,依据截断值将患者分为两组,比较不同HCG日P水平的临床资料及妊娠情况;并比较采用GnRH激动剂方案和拮抗剂方案的妊娠结局及HCG日P水平。结果:Logistic回归显示HCG日P是影响活产的危险性因素(OR0.612,95%CI 0.480~0.780,P<0.05),其截断值为5.29 nmol/L。HCG日P≥5.29 nmol/L组临床妊娠率(32.70%)与活产率(25.16%)显著低于P<5.29 nmol/L组(56.93%,45.59%),差异有统计学意义(P<0.05)。Gn-RH拮抗剂方案中HCG日P≥5.29 nmol/L的患者比例明显高于激动剂组(35.21%vs 21.50%,P<0.05),而临床妊娠率、活产率及流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:升高的HCG日P水平降低了IVF-ET的临床妊娠率和活产率,是影响新鲜周期妊娠结局的危险因素,对IVF-ET妊娠结局具有一定的预测价值。GnRH激动剂与拮抗剂两种方案对HCG日P水平的影响程度尚需进一步研究。