肥胖母鼠对雄性子代生殖力的影响及其机制研究

目的:探讨母体肥胖小鼠对雄性子代生殖能力的影响及其可能机制。方法:以高脂饮食诱导8周建立雌性小鼠肥胖模型,分别与正常饮食雄性小鼠合笼,子鼠出生后分为母体肥胖组和正常对照组,断奶后正常饮食喂至8周,每组随机选取8只雄性子鼠麻醉后处死,分离睾丸和附睾组织,检测精子质量,ELISA法检测睾丸性激素水平,免疫荧光法检测睾丸活性氧(ROS)水平,qPCR和Western blot法分别检测FOXO1、Nrf2基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组相比,母体肥胖组小鼠精子浓度、精子活力和前向运动精子比率均显著降低(P<0.01),精子畸形率显著升高(P<0.01)。其他检测结果显示,母体肥胖能引起子代睾丸组织损伤,睾丸内性激素分泌紊乱,睾丸组织ROS水平升高,精原细胞标志物FOXO1表达水平显著上升,氧化应激水平和Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.01)。结论:在母体肥胖的情况下,子代雄性小鼠睾丸组织存在氧化应激,可能导致精原细胞分化障碍,引起子代生殖损伤。

猪SLA-DRA基因SNP位点筛选及其生物信息学分析

以八眉猪、蕨麻猪和甘肃黑猪为研究对象,利用PCR-SSCP和测序方法对SLA-DRA基因4个外显子进行SNP位点筛选,并利用生物信息学软件预测各SNP位点对DRA基因mRNA二级结构、蛋白质二级结构和三级结构的影响。结果在3个猪种中共检测到6个DRA基因SNP位点,分别为外显子1的A^(177)G,外显子2的A^(3093)C,以及外显子4的A^(4167)G、A^(4246)G、C^(4282)T和G^(4293)A,其中A^(3093)C、A^(4167)G和G^(4293)A为错义突变,分别导致甲硫氨酸(Met)变为亮氨酸(Leu)、谷氨酰胺(Gln)变为精氨酸(Arg)和精氨酸(Arg)变为组氨酸(His)。以3个错义SNP位点为基础,构建了6种DRA单倍型,其中H1、H3和H6为主要单倍型,频率分别为0.25、0.21和0.21。生物信息学分析表明,三个猪种DRA基因单倍型的mRNA二级结构、蛋白质二级结构和三级结构与野生型均存在一定的差异。研究结果可为八眉猪、蕨麻猪和甘肃黑猪的保种和抗病育种提供理论依据。

八眉猪SLA-DRA基因第2外显子多态性分析

为了解八眉猪SLA-DRA基因第2外显子的多态性,采用PCR-SSCP和克隆测序的方法对八眉猪SLADRA基因第2外显子进行分型,并对不同等位基因进行核苷酸与氨基酸序列分析。结果显示,222头八眉猪中共检出2种等位基因(A和B)和3种基因型(AA,BB和AB),其中A等位基因和AA基因型的频率最高,为优势基因和优势基因型。对不同SSCP带型的对应片段进行测序分析,发现该基因仅有一个核苷酸突变位点(c.3093 A→C),为错义突变,使甲硫氨酸(Met)变为亮氨酸(Leu),并且该氨基酸位于抗原结合位点上。群体遗传学分析发现,八眉猪遗传杂合度(He)为0.351 4,多态信息含量(PIC)为0.308 8,且经χ2适合性检验,八眉猪在此位点上没有偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。八眉猪SLA-DRA基因第2外显子的多态性较低。

八眉猪SLA-DRA基因第4外显子多态性分析

[目的]研究八眉猪SLA-DRA基因第4外显子的多态性,确定其等位基因数以及核苷酸和氨基酸变异位点,探讨其遗传特性。[方法]采用PCR-SSCP和克隆测序的方法对八眉猪SLA-DRA基因第4外显子进行多态性检测。[结果]八眉猪SLA-DRA基因第4外显子共有3种等位基因(A、B、C),形成3种基因型(AA、BB、BC),其中B为优势等位基因,BC为优势基因型。序列对比结果表明,八眉猪SLA-DRA基因第4外显子共有3个核苷酸突变位点(c.4167A>G、c.4246A>G和c.4282C>T),其中4 167 bp的突变导致谷氨酰胺(Q)突变为精氨酸(R)。群体遗传学分析表明,八眉猪SLA-DRA基因第4外显子的多态信息含量为0.3953,杂合度为0.7241,且八眉猪在SLA-DRA基因第4外显子上偏离了Hardy-Weinberg平衡(p<0.01)。[结论]八眉猪SLA-DRA基因的第4外显子属于中度多态,并呈现出杂合子优势。