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基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的溶藻弧菌鉴定研究 被引量:5
1
作者 谭建锡 周慧平 +5 位作者 莫瑾 黄迎波 彭梓 袁小雅 陈盼 朱金国 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第1期202-208,共7页
目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生... 目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定,并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果不同的培养时间,24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小,鉴定值分别为94.10%,93.90%,92.70%;同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定,培养24 h后,鉴定值为97.7%,T值为0.47,但培养72 h后,鉴定值为52.4%,T值为0.15。同一样品点样2次,得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后,鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论与传统的生化鉴定方法相比,MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性,可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌,可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 SARAMIS分析软件 溶藻弧菌 鉴定
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指数富集的配体系统进化技术研究进展及在食品检测中的应用 被引量:4
2
作者 谭建锡 陈盼 +2 位作者 莫瑾 彭梓 朱金国 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第1期80-84,共5页
核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SE... 核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适配体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适配体的筛选方法进行了总结,并介绍了其在食品检测领域的应用现状和发展方向,为核酸适配体的筛选与应用提供了参考。 展开更多
关键词 核酸适配体 筛选方法 指数富集的配体系统进化技术 食品检测
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高效液相色谱-串联质谱法检测茶叶中的赭曲霉毒素A 被引量:21
3
作者 莫瑾 龚强 +4 位作者 周慧平 白雪 谭建锡 彭梓 黄迎波 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第1期182-187,共6页
目的建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测茶叶中赭曲霉毒素A(OTA)的方法。方法用甲醇-2%Na HCO3溶液(60:40,V:V)提取样品中的赭曲霉毒素A,采用免疫亲和柱对茶叶中的赭曲霉毒素A净化,使用甲醇-5 mmol/L乙酸铵(含0.1%乙酸)为... 目的建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测茶叶中赭曲霉毒素A(OTA)的方法。方法用甲醇-2%Na HCO3溶液(60:40,V:V)提取样品中的赭曲霉毒素A,采用免疫亲和柱对茶叶中的赭曲霉毒素A净化,使用甲醇-5 mmol/L乙酸铵(含0.1%乙酸)为流动相,检测赭曲霉毒素A,采用正离子模式。结果本方法中赭曲霉毒素A在0.5~10 ng/m L质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.996),回收率在83.6%~92.5%之间,相对标准偏差在6.5%~9.1%之间,检出限为0.1μg/kg。结论该方法准确性好、灵敏度高,适用于茶叶样品的检测。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱法 赭曲霉毒素A 免疫亲和柱 茶叶
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EPS对Acidithiobacillus.ferrooxidans在黄铜矿与黄铁矿表面吸附的影响(英文) 被引量:8
4
作者 余润兰 欧阳 +4 位作者 谭建锡 吴发登 孙静 苗雷 钟代立 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第2期407-412,共6页
运用超声波结合离心方法提取Acidithiobacillus.ferrooxidans的胞外多聚物(EPS),用2-酮基-3-脱氧辛酸(KDO)作为表征EPS含量的指标,采用分光光度法对该提取方法进行评估。通过一系列对比性实验研究EPS对Acidithiobacillus ferrooxidans... 运用超声波结合离心方法提取Acidithiobacillus.ferrooxidans的胞外多聚物(EPS),用2-酮基-3-脱氧辛酸(KDO)作为表征EPS含量的指标,采用分光光度法对该提取方法进行评估。通过一系列对比性实验研究EPS对Acidithiobacillus ferrooxidans在黄铜矿与黄铁矿表面吸附的影响。将未处理的Acidithiobacillus ferrooxidans与经处理脱去EPS层的Acidithiobacillus ferrooxidans分别与EPS悬液、Fe2+和Fe3+重新混合,在2h的反应过程中,实时检测混合液中游离的细菌含量。结果表明:细菌表面EPS的存在是其吸附于黄铁矿和黄铜矿表面的一个重要因素。当缺失EPS层时,Acidithiobacillus ferrooxidans吸附于矿物表面的能力有所下降,但当重新加入EPS混合液时这种能力能大部分恢复,这种恢复程度在黄铁矿中较黄铜矿中更加明显。当加入EPS和Fe3+时其细菌吸附于黄铜矿表面的程度有所升高,而加入Fe2+时吸附程度明显降低,这个结果表明静电的相互作用也许是细菌最初吸附于矿物表面的一个主要原因,并且这也许是细菌生产EPS的一种驱动力以使细菌吸附于硫化铜矿物后重新获得其吸附能力。 展开更多
关键词 吸附 A.ferrooxidan 胞外多聚物(EPS) 黄铜矿 黄铁矿
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浸矿微生物/矿物界面的微观作用机制研究进展 被引量:7
5
作者 余润兰 邱冠周 +2 位作者 胡岳华 谭建锡 杨鹏 《湿法冶金》 CAS 2008年第2期72-75,91,共5页
综述了浸矿微生物胞外多聚物(EPS)的特性、选择性黏附及EPS接触浸矿机制的研究进展,讨论了需进一步研究的EPS问题及其重要性。
关键词 浸矿微生物 胞外多聚物 接触浸矿 机理
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变性高效液相色谱技术在大豆品种鉴定中的应用 被引量:1
6
作者 彭梓 谭建锡 +3 位作者 周慧平 袁小雅 朱金国 王利兵 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期881-888,共8页
单核苷酸多态性(SNPs)和插入-删除标记(In Del)在基因组中广泛分布,日益成为主要作物的重要遗传标记。利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测大豆品种的SNP和In Del的多态性,可为大豆种质的品种鉴定提供一种新型的快速检测方法。基于公... 单核苷酸多态性(SNPs)和插入-删除标记(In Del)在基因组中广泛分布,日益成为主要作物的重要遗传标记。利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测大豆品种的SNP和In Del的多态性,可为大豆种质的品种鉴定提供一种新型的快速检测方法。基于公共数据库中的大豆基因信息,筛选了3条DNA序列作为目标分析片段,以大豆种质粤夏119作为参比基因型,利用DHPLC技术平台对10份大豆品种进行了鉴定。结果表明:混合参比DNA后的大豆样本产生DHPLC谱图均具有多态性,谱型与测序基因型一一对应。综合3条目标片段的DHPLC特征谱图可以区分所有大豆品种。试验结果验证了DHPLC应用于大豆品种鉴定的可行性和可靠性。由于DHPLC分辨率高、快速、操作简单、安全等优点,在大豆的品种鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 SNP INDEL 大豆 鉴定 变性高效液相色谱技术
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出口茶叶生产加工中有害微生物危害分析 被引量:7
7
作者 朱金国 莫瑾 +4 位作者 谭建锡 彭梓 龚强 李拥军 李巍 《现代农业科技》 2014年第2期304-307,共4页
阐述我国茶叶的对外贸易、茶叶的消费方式等,对各相关的茶叶有害微生物的危害和危害的程度进行了分析,从茶叶的各工艺过程分析茶叶中有害微生物的污染和危害,提出防治茶叶中有害微生物的措施。
关键词 茶叶 生产 有害微生物 危害分析
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奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法建立 被引量:3
8
作者 周慧平 唐连飞 +3 位作者 蔡文杰 谭建锡 朱中武 禹思宇 《检验检疫学刊》 2016年第3期10-13,共4页
为建立快速有效的阴沟肠杆菌检测方法,根据Genbank中的阴沟肠杆菌Amp C酶基因序列设计引物和探针,建立了奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法。结果显示,该方法只对阴沟肠杆菌Amp C酶基因呈阳性反应,而对其他常见非阳性菌株基因组... 为建立快速有效的阴沟肠杆菌检测方法,根据Genbank中的阴沟肠杆菌Amp C酶基因序列设计引物和探针,建立了奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法。结果显示,该方法只对阴沟肠杆菌Amp C酶基因呈阳性反应,而对其他常见非阳性菌株基因组DNA均呈阴性反应,检测限为20 CFU/m L,对人工污染的奶粉样品检测验证了方法的实用性。建立的实时荧光PCR方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测奶粉中污染的阴沟肠杆菌。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 AMPC酶 实时荧光PCR 检测
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ROC曲线法分析糖化血红蛋白在妊娠糖尿病诊断中的作用 被引量:6
9
作者 姚碧容 谭建锡 +1 位作者 成婧 龚强 《临床与病理杂志》 CAS 2014年第5期542-545,共4页
目的:采用接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic,ROC)曲线统计学方法分析糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc,Hb Alc)在妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的筛查与诊断中的作用。方法:整... 目的:采用接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic,ROC)曲线统计学方法分析糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc,Hb Alc)在妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的筛查与诊断中的作用。方法:整理统计湖南省妇幼保健院2014年上半年2 283例24~28周产检孕妇的OGTT、Hb Alc结果,根据OGTT结果将受试者分为正常组和GDM组,采用2组独立样本的T检验统计学方法分析2组Hb Alc数据的差异性。以Hb Alc值绘制诊断ROC曲线,分析Hb Alc对于筛查诊断GDM的作用;以≥5.7%为阳性标准,将Hb Alc分成阴性、阳性结果,绘制诊断ROC曲线,分析Hb Alc对于诊断筛查GDM的作用。结果:正常组与GDM组Hb Alc值的差异有统计学意义(P〈0.05);以Hb Alc值绘制诊断ROC曲线,曲线下面积(area under cur ve,AUC)为0.661,95%置信区间范围为0.620~0.702;将Hb Alc值分成阴性、阳性结果绘制诊断ROC曲线,AUC为0.545,95%置信区间范围为0.502~0.588。结论:Hb Alc只能考察检测前2月内的血糖平均水平,不能用作GDM早期筛查与诊断的标准。 展开更多
关键词 ROC曲线 妊娠糖尿病 糖化血红蛋白
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星斗山自然保护区珙桐种群结构特征研究 被引量:25
10
作者 艾训儒 谭建锡 《湖北民族学院学报(自然科学版)》 CAS 1999年第1期12-15,共4页
对星斗山自然保护区珙桐种群生境空间分布格局、结构及数量特征分析,结果表明珙桐种群生境较为特殊,呈集群分布,簇生为主,在群落中地位和作用最大,种群结构稳定,多样性指数高,无天然纯林。繁殖对策以根萌蘖繁殖为主。
关键词 星斗山自然保护区 珙桐种群 种群结构 数量特征
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H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立 被引量:6
11
作者 谭建锡 禹思宇 +3 位作者 唐连飞 胡忆文 白雪 侯义宏 《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期77-82,共6页
本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、... 本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测均为阴性;敏感性高,最低可检测4.7拷贝/μL;重复性好,对5个不同稀释度的H1亚型SIVRNA进行3次重复试验,每个稀释度的变异系数均小于5%。利用该方法对湖南省规模化养殖场收集的30份猪鼻拭子样品进行检测,发现与荧光RT-PCR检测结果一致。试验表明,该方法快速、准确、灵敏,可为H1亚型SIV的快速筛查及流行病学研究提供可靠的技术保障。 展开更多
关键词 H1亚型猪流感病毒 微滴数字RT-PCR 绝对定量 检测方法
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小鼠诺如病毒数字RT-PCR定量检测方法的建立
12
作者 谭建锡 禹思宇 +2 位作者 胡忆文 周智君 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2020年第3期39-42,共4页
为了建立快速、准确定量检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法,试验针对MNV高度保守区的靶向扩增引物和探针构建MNV的数字RT-PCR定量检测方法,优化其退火温度,并对其敏感性、特异性及临床应用效果进行检测。结果表明:建立的数... 为了建立快速、准确定量检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法,试验针对MNV高度保守区的靶向扩增引物和探针构建MNV的数字RT-PCR定量检测方法,优化其退火温度,并对其敏感性、特异性及临床应用效果进行检测。结果表明:建立的数字RT-PCR方法能对MNV进行定量检测;最佳退火温度为57.5℃;分别对MNV、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒3型等核酸检测,除MNV外均为阴性;最低可检测到7拷贝/μL;对不同稀释度核酸进行3次重复试验,变异系数均小于7%;对20个小鼠盲肠样本进行MNV检测,结果与荧光RT-PCR结果一致。说明试验建立的数字RT-PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可应用于MNV的临床快速定量检测。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 数字RT-PCR 定量 检测方法 灵敏度 临床应用
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Mechanism of bioleaching chalcopyrite by Acidithiobacillus ferrooxidans in agar-simulated extracellular polymeric substances media 被引量:4
13
作者 余润兰 谭建锡 +2 位作者 顾帼华 胡岳华 邱冠周 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS 2010年第1期56-61,共6页
The mechanism of leaching chalcopyrite by Acidithiobacillus ferrooxidans (A. ferrooxidans) in agar-simulated extracellular polymeric substances (EPS) media was investigated. The results indicate that bacterial EPS can... The mechanism of leaching chalcopyrite by Acidithiobacillus ferrooxidans (A. ferrooxidans) in agar-simulated extracellular polymeric substances (EPS) media was investigated. The results indicate that bacterial EPS can release H+ and concentrate Fe3+; Fe2+ is movable between agar-simulated EPS phase and bulk solution phase, but it is difficult for Fe3+ to move due to its hydroxylation and EPS complex action; A. ferrooxidans first prefer Fe2+ as energy to metabolize compared with chalcopyrite, and a suitable simulated EPS environment for bacterial living is at about pH 1.8; the iron precipitates and jarosites formed by a lot of biologically oxidized Fe3+ cover the simulated EPS easily and form an impermeable deposit acting as a limited barrier of ion transport that attenuates the aggressiveness of the bioleaching attack. The EPS layer blocked by iron precipitates or jarosites is responsible for the chalcopyrite passivation. 展开更多
关键词 胞外聚合物 浸出机理 生物氧化 黄铜矿 模拟 氧化亚铁硫杆菌 琼脂 媒体
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应对风险和机遇措施在食品微生物检验活动中的应用 被引量:10
14
作者 陈盼 覃业欣 +1 位作者 李迎 谭建锡 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第22期7806-7811,共6页
全面识别、掌握实验室活动中可能面临的风险,是应对风险和机遇的基础,准确识别在食品微生物检验活动中的风险,既可以通过分析实验过程中所涉及的要素进行风险识别,也可以按照检测过程的时间顺序识别整个过程中的风险。本文从实验室提高... 全面识别、掌握实验室活动中可能面临的风险,是应对风险和机遇的基础,准确识别在食品微生物检验活动中的风险,既可以通过分析实验过程中所涉及的要素进行风险识别,也可以按照检测过程的时间顺序识别整个过程中的风险。本文从实验室提高应对风险能力、确保实验室质量目标实现的角度出发,根据ISO/IEC 17025-2017《检测和校准实验室能力认可准则》中对实验室应对风险和机遇的新要求,建立风险和机遇管理及控制机制,对实验室活动进行风险识别、风险评估,实现风险控制,降低或消除食品微生物检验面临的风险,并通过风险监控实现持续改进,建立符合实验室运行情况的程序和措施,提升管理体系的有效性,确保实验室质量目标的实现,为实现实验室管理的持续性和有效性提供保障。 展开更多
关键词 风险 机遇 控制措施
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Inhibition behavior of some new mixed additives upon copper electrowinning 被引量:5
15
作者 余润兰 刘清明 +3 位作者 邱冠周 方正 谭建锡 杨鹏 《中国有色金属学会会刊:英文版》 EI CSCD 2008年第5期1280-1284,共5页
As thiourea and sulfur-containing mixed additives contaminate cathodic copper,inhibition behavior of some new mixed additives such as gelatin+hexadecylpyridinium bromide (HDPBr),gelatin+polyethylene glycol(PEG),gelati... As thiourea and sulfur-containing mixed additives contaminate cathodic copper,inhibition behavior of some new mixed additives such as gelatin+hexadecylpyridinium bromide (HDPBr),gelatin+polyethylene glycol(PEG),gelatin+polyacryl amide (PAM),gelatin+PEG+cetyl-tri-methyl ammonium bromide (CTABr) and gelatin+PAM+CTABr was investigated by cyclic voltammetry as well as cathodic polarization in order to improve the quality of cathodic copper in bio-metallurgical process.The results indicate that the inhibition performances of these additives are dependent on complex and adsorption behaviors as well as the deposit potential.For a solution of acidic copper sulpate containing 40 g/L Cu2+ and 180 g/L H2SO4,the additive (gelatin+HDPBr) is the most efficient among the investigated additives because HDPBr with a large organic cation and π electron can adsorb on the cathodic surface to block the active sites and Br-ion can precipitate Cu2+ to form Cu2Br2.The additive (gelatin+PAM) also has a better inhibition performance,while the additives (gelatin+PEG),(gelatin+PEG+CTABr) and (gelatin+PAM+CTABr) are comparatively lower inhibition performance compared with the additive (gelatin+thiourea) which has been frequently used so far. 展开更多
关键词 铜电解质 混合添加剂 聚氧乙烯 聚丙烯酰胺
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EPS-contact-leaching mechanism of chalcopyrite concentrates by A.ferrooxidans 被引量:3
16
作者 余润兰 谭建锡 +3 位作者 杨鹏 孙静 欧阳熊晶 戴云杰 《中国有色金属学会会刊:英文版》 EI CSCD 2008年第6期1427-1432,共6页
extracelluar 的效果黄铜矿面对氧化铁、氧化硫的细菌集中的 bioleaching 上的聚合物质(EPS )( 一。ferrooxidans ) 被学习。Fe2+and Cu2+ 离子的细菌的数字, pH,氧化还原作用潜力,和集中被调查。沥滤的残余被 X 光检查衍射和英尺红... extracelluar 的效果黄铜矿面对氧化铁、氧化硫的细菌集中的 bioleaching 上的聚合物质(EPS )( 一。ferrooxidans ) 被学习。Fe2+and Cu2+ 离子的细菌的数字, pH,氧化还原作用潜力,和集中被调查。沥滤的残余被 X 光检查衍射和英尺红外分析。结果显示 EPS 让细菌容易遵守黄铜矿表面,它对在不利环境的细菌有用。同时,有 Fe3+ 的 EPS 电影层在黄铜矿的表面上扔并且成为氧转移的一个障碍到黄铜矿使钝化黄铜矿,并且通过集中 Fe3+ 离子加速 bioleaching 创造高氧化还原作用潜力空间在黄铜矿的黄铁矿专注。结果建议那 EPS 形成支持 bioleaching 黄铁矿并且禁止 bioleaching 黄铜矿,特别在高潜在的状况下面。 展开更多
关键词 黄铜矿 生物浸取 钝化 接触浸取机制
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功能化核酸适体检测氯霉素可行性研究 被引量:3
17
作者 陈盼 禹思宇 +2 位作者 胡忆文 唐连飞 谭建锡 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第1期179-183,共5页
目的探讨荧光适体探针用于氯霉素快速检测的可行性。方法设计了一种荧光适体探针,主要包括一段与氯霉素特异性识别的DNA序列,其3’端标记FAM荧光,且有一小段核酸随机结构。当适体探针单独存在时,被氧化石墨烯(graphene oxide,Go)吸附到... 目的探讨荧光适体探针用于氯霉素快速检测的可行性。方法设计了一种荧光适体探针,主要包括一段与氯霉素特异性识别的DNA序列,其3’端标记FAM荧光,且有一小段核酸随机结构。当适体探针单独存在时,被氧化石墨烯(graphene oxide,Go)吸附到表面,由于能量共振转移作用使得FAM荧光淬灭;当加入靶标时,由于靶标与适配体探针具有高亲和力,配对形成双链复合物,从Go表面脱离,使FAM的荧光信号得到恢复。结果当25 nmol/L荧光标记适配体探针与1.2μL浓度为1 mg·mL-1 Go溶液共同孵育后,超过95%的荧光信号被Go淬灭。当再加入氯霉素溶液经孵育后,荧光信号得到显著恢复。结论该荧光适体探针能被用于氯霉素样品的快速检测,且对其他小分子检测也具有很大的应用潜力。 展开更多
关键词 氯霉素 核酸适体 氧化石墨烯 能量共振转移
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鼠肺炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
18
作者 胡忆文 禹思宇 +1 位作者 谭建锡 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2019年第5期36-39,共4页
根据鼠肺炎病毒NS2基因保守区设计一对特异性引物,建立了一种快速、灵敏、特异的PVM检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评价。结果显示,标准品浓度在1.0×101~1.0×107 copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定... 根据鼠肺炎病毒NS2基因保守区设计一对特异性引物,建立了一种快速、灵敏、特异的PVM检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评价。结果显示,标准品浓度在1.0×101~1.0×107 copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量RT-PCR实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R2=0.9988),且该标准品检出限为1.0×102 copy/μL。该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、古典猪瘟病毒、牛病毒性腹泻粘膜病病毒、禽流感病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.51%~1.56%,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。结果表明:该研究新建的PVM实时荧光定量RT-PCR检测方法有着特异性好、灵敏度高、重复性强的优点,可用于PVM的监测以及流行病学研究。 展开更多
关键词 小鼠 鼠肺炎病毒 荧光定量RT-PCR
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鼠呼肠孤病毒3型荧光定量RT-PCR检测方法的建立
19
作者 禹思宇 周智君 +2 位作者 谭建锡 胡忆文 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2020年第2期37-40,共4页
根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10... 根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10^10copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量R T-PCR实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R^2=0.9990),且该标准品检出限为1.0×10^2个copy/μL。特异性方面,该方法除对Reo3有扩增反应外,对其它相关病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.54%~1.04%之间,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。以上研究结果表明,此研究检测方法建立的Reo3荧光R T-PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于实验动物中Reo3的监测以及流行病学研究。 展开更多
关键词 呼肠孤病毒3型 实时荧光定量RT-PCR方法 M1基因
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湖南省4株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列测定与分析
20
作者 胡忆文 唐连飞 +1 位作者 谭建锡 禹思宇 《中国动物检疫》 CAS 2020年第2期66-70,共5页
为了解湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,对湖南省2016-2019年分离的4株PRRSV(Hunan/2016/075、Hunan/2017/085、Hunan/2018/123、Hunan/2019/055)进行全基因组测序,对其ORF5、NSP2基因以及全基因组核苷酸序列进行分... 为了解湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,对湖南省2016-2019年分离的4株PRRSV(Hunan/2016/075、Hunan/2017/085、Hunan/2018/123、Hunan/2019/055)进行全基因组测序,对其ORF5、NSP2基因以及全基因组核苷酸序列进行分析。结果显示,分离的4株病毒株均为美洲型,全基因组同源性为83.1%~98.7%,其中3株属于高致病型,1株为属于类NADC30型。Hunan/2016/075、Hunan/2017/085毒株全长序列与谱系5中亚系5.1的代表性毒株BJ-4亲缘关系相近,聚为一簇;Hunan/2018/123毒株与谱系8.7中的tjnh1501毒株聚为一簇;Hunan/2019/055毒株独立成一簇,与谱系1亲缘关系相近。本研究掌握了湖南省PRRSV的遗传变异情况,从而为制定有效的防控策略提供了依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 NSP2基因 序列分析
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