肝癌恶性腹水患者Th9细胞的分布及募集至腹腔的机制研究

目的检测肝癌所致的恶性腹水(MA)患者Th9细胞的分布情况,阐明Th9细胞从外周血募集浸润至腹腔的机制以及MA中Th9细胞比例与患者生存期的关系。方法采用酶联免疫吸附试验检测30例肝癌患者MA和外周血中,以及15例健康对照者外周血中细胞因子IL-9和趋化因子CCL20、CCL22的质量浓度。流式细胞术检测腹水及外周血中Th9细胞比例以及Th9细胞表面CCR4、CCR5、CCR6和CCR7的表达水平。使用Transwell迁移实验检测MA对Th9细胞的趋化效应。Kaplan-Meier法分析MA中Th9细胞比例与患者生存期的关系。结果肝癌患者MA中Th9细胞比例和IL-9质量浓度明显高于相应外周血以及健康对照者外周血中的水平(P<0.01)。MA中趋化因子CCL20质量浓度明显高于相应外周血清(P<0.01)。体外趋化迁移实验表明,MA上清液具有诱导Th9细胞趋化的能力,当用抗体中和CCL20时,这种趋化效应明显减弱。MA中Th9细胞比例与患者生存期负相关,Th9细胞高比例组的死亡风险比是Th9细胞低比例组的2倍。结论 MA中Th9细胞数量较外周血显著增多;CCL20/CCR6趋化轴可能参与Th9细胞募集至MA的过程;MA中Th9细胞比例升高与患者预后不良有关。

Th22细胞在卵巢癌恶性腹水中募集的机制

目的观察Th22细胞在卵巢癌恶性腹水(MA)中的分布情况,探讨其向腹腔内募集的可能机制。方法选择卵巢癌合并MA患者23例(观察组)、健康女性13例(对照组),用密度梯度离心法获得MA和外周血中单个核细胞,流式细胞仪检测MA和外周血中Th22、Th17细胞构成比及Th22细胞趋化因子表达水平,ELISA法检测腹水上清液和外周血中IL-17、IL-22的水平,用Spearman秩相关分析变量间关系。结果观察组MA中Th22、Th17细胞构成比高于同组外周血和对照组外周血(P均<0.05);观察组MA中CCR4、CCR7、CD45RO型Th22细胞构成比高于外周血,CD45RA、CD62L型低于外周血(P均<0.05);MA中IL-17、IL-22水平高于同组外周血及对照组外周血(P均<0.05);经Spearman秩相关分析,MA中Th22细胞与Th17细胞构成比呈正相关(r=0.66,P<0.01),IL-22水平与Th22细胞、Th17细胞构成比呈正相关(r分别为0.55、0.54,P均<0.05)。结论 Th22细胞可能通过趋化因子与炎症细胞因子由外周血向卵巢癌MA中募集。

辅助性T细胞22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化的机制

目的研究辅助性T细胞（Th）22细胞在恶性腹水（MA）及同源外周血中的分布及其表型特征，探讨Th22细胞分化和募集浸润至腹腔的机制。方法流式细胞术检测Th22细胞在MA和外周血中的分布和表型。重组人细胞因子刺激MA和外周血中初始CD04^＋T细胞，观察其分化成Th22细胞的情况。检测外周血来源的CD04^＋T细胞在体外向MA上清液趋化，并加入人抗CC类趋化因子（CCL）20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体观察阻断效应。结果MA中Th22细胞比例[（3.22±0.40）%，n＝37]明显高于对应外周血[（0.79±0.20）%，n＝37，P＝0.006）和健康对照组[（0.63±0.11）%，n＝10，P＝0.002]，Th17细胞在MA中比例[（3.30±0.18）%]也明显高于对应外周血[（0.79±0.15）%，n＝37，P＝0.008]及健康对照组[（0.67±0.12）%，n＝10，P＝0.001]，且两种细胞比例呈正相关（P＝0.002）。MA和外周血中Th22细胞的CD45RO、CC类趋化因子受体（CCR）4、CCR6和CCR10表达水平高于CD45RA、CD62L、CCR3、CCR5。CD4^＋T细胞向Th22细胞分化过程中，白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β起促进作用，干扰素-γ（IFN-γ）起抑制作用，且Th22细胞受IL-6的促分化作用呈现时间剂量依赖性。MA上清液对外周血Th22细胞有明显的趋化效应，加入抗CCL20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体则表现为阻断此趋化作用。结论MA中的趋化因子与炎性细胞因子在腹膜腔内共同作用使MA中Th22细胞比例明显高于外周血，Th22细胞可能参与MA的发病过程并发挥一定的免疫调节作用。