消黄去疸汤对胆汁淤积性肝损伤大鼠肠物理屏障及Th17/Treg平衡的影响

目的 探讨消黄去疸汤对胆汁淤积性肝损伤大鼠肠黏膜屏障及免疫的作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白组、模型组(0.075 g/kg α-萘异硫氰酸酯)、熊去氧胆酸组(0.06 g/kg)和消黄去疸汤低、中、高剂量组(5.62、11.23、22.47 g/kg),每组8只。HE染色观察肝组织病理变化,比色法检测血清ALT、AST、TBIL、TBA水平,RT-qPCR与Western blot法检测肝组织RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达,以及肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测脾脏Th17、Treg细胞百分率。结果 模型组大鼠肝细胞形态脂质样沉积,脂肪样变性,汇管区周围有结缔组织增生,伴随炎性细胞浸润;各给药组均能改善肝组织病理损伤,且高剂量组更为明显。与空白组比较,模型组血清ALT、AST、TBIL、TBA水平升高(P<0.01),肝组织RORγt mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),脾脏Th17细胞百分率升高(P<0.01),Treg细胞百分率降低(P<0.01);与模型组比较,熊去氧胆酸组和消黄去疸汤各剂量组血清ALT、AST、TBIL、TBA水平降低(P<0.01),肝组织RORγt mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),脾脏Th17细胞百分率降低(P<0.01),Treg细胞百分率升高(P<0.01)。结论 消黄去疸汤可有效缓解胆汁淤积性肝损伤,其机制可能与改善肠道黏膜屏障及调节Th17/Treg免疫平衡有关。

复方芪芎颗粒通过TLR4/MCP-1通路抑制类风湿关节炎大鼠软骨炎症的机制

目的 基于Toll样受体4(TLR4)/单核细胞趋化因子-1(MCP-1)通路观察复方芪芎颗粒对类风湿关节炎大鼠软骨炎症的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 取50只雄性SD大鼠,随机选择8只大鼠作为空白组,其余大鼠建立胶原诱导关节炎(CIA)模型。造模第14天,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组8只、TAK-242组7只、复方芪芎组7只、复方芪芎+TAK-242组8只。从第15天开始,复方芪芎组按0.03 g/mL剂量给予复方芪芎颗粒液灌胃,1次/d;TAK-242组给予TAK-242 3 mg/(kg·d)腹腔注射,2次/周;复方芪芎+TAK-242组给予复方芪芎颗粒液(0.03 g/mL)灌胃(1次/d),TAK-242 3 mg/(kg·d)腹腔注射(2次/周);空白组与模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d。各组连续干预至第35天。分别记录造模后第14,17,20,23,26,29,32,35天大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分;干预至第35天取血检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察软骨组织形态和破骨细胞数量,免疫荧光染色观察软骨组织中TLR4、MCP-1、IL-6、TNF-α和滑膜组织中CD68阳性表达情况。结果实验第14~35天,模型组大鼠足趾肿胀度和关节炎指数均明显高于同期空白组(P均<0.05);第23~35天TAK-242组、复方芪芎+TAK-242组大鼠足趾肿胀度和第26~35天大鼠关节炎指数均明显低于同期模型组(P均<0.05);第32~35天TAK-242组、复方芪芎+TAK-242组大鼠足趾肿胀度和关节炎指数均明显低于同期复方芪芎组(P均<0.05);TAK-242组与复方芪芎+TAK-242组各时间点的足趾肿胀度和关节炎指数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平和软骨组织中TLR4、MCP-1、IL-6、TNF-α阳性细胞比例及滑膜组织中CD68+阳性细胞比例均明显高于空白组(P均<0.05),大鼠软骨损伤明显,破骨细胞数量增多;各药物组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平和软骨组织中TLR4、MCP-1、IL-6、TNF-α阳性细胞比例及滑膜组织中CD68+阳性细胞比例均明显低于模型组(P均<0.05),软骨损伤明显减轻,破骨细胞数量减少,且TAK-242组和复方芪芎+TAK-242组上述各指标均明显低于中药组(P均<0.05),TAK-242组与复方芪芎+TAK-242组上述各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 复方芪芎颗粒可以缓解类风湿关节炎大鼠关节炎症,保护软骨细胞,这可能与调控TLR4/MCP-1通路活性减少炎症因子浸润有关。

消黄去疸汤对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤大鼠的保护作用

目的:探讨消黄去疸汤改善胆汁淤积性肝损伤的疗效。方法:将28只SD大鼠按随机数字表法分为空白组(NOM)、模型组(MOD)、熊去氧胆酸组(UDCA)和消黄去疸汤组(XHQD),每组7只,各组大鼠每天给予相应药物灌胃1次,连续7 d。至第5天时,除NOM组外,其余各组大鼠予以α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃诱导胆汁淤积性肝损伤模型。监测大鼠90 min胆汁流量,计算各组大鼠肝脏指数,HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化,透射电镜观察肝细胞超微结构,全自动生化仪检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)与总胆汁酸(TBA)含量,Elisa法检测大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)的含量。采用qRT-PCR法测定大鼠肝组织中TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA的表达。结果:与NOM组比较,MOD组大鼠在各个时间段胆汁流量降低,AST、ALT、ALP、γ-GT含量增加,肝脏指数升高,DBil、TBil、TBA水平升高,SOD活性及GSH、MDA水平降低,TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与MOD组大鼠比较,UDCA组大鼠15、30、75、90 min时间段胆汁流量升高,XHQD组大鼠各个时间段胆汁流量均升高,UDCA与XHQD组大鼠AST、ALT、ALP、γ-GT含量减少,肝脏指数降低,DBil、TBil、TBA水平降低,SOD活性及GSH水平降低、MDA水平升高,SOD活性及GSH水平降低、MDA水平升高,TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:消黄去疸汤对胆汁淤积型肝损伤大鼠具有明显的保护作用,其作用机制可能是调节氧化应激及炎症反应。

从自噬角度探讨肾虚痰浊型绝经后骨质疏松症的发病

绝经后骨质疏松症(PMOP)以低骨量、骨微结构退行性变,骨脆性和骨折易感性增加为特点的全身代谢性疾病。中医认为PMOP以肾虚为本。此外,“痰浊”也是PMOP的致病因素之一。向楠教授基于对PMOP的中医认识,提出肾虚痰浊的病机理论,认为“肾虚痰浊”与现代科学中骨髓间充质干细胞分化紊乱、脂代谢紊乱、体成分结构失衡等密切相关,且进一步提出以补肾化痰法论治PMOP。自噬是细胞的自我调节功能,参与机体的骨-脂代谢调节;现代学者认为其生理病理过程与中医学的阴阳气化理论颇为相合,是肾虚痰浊型PMOP发病的微观机制之一。以自噬为切入点探讨肾虚痰浊型PMOP的发病,为中医药干预本病提供新的思路与方法。

手术诱导膝骨关节炎兔模型的制备方法

背景:目前常用的膝骨关节炎动物模型制备方法主要有手术创伤和关节腔内注射蛋白酶诱导两大类。关节腔内注射药物诱导模型并不稳定,传统的手术造模方法对膝关节损伤较大,且成模过程与临床膝骨关节炎的发展过程差异较大。目的:通过不同手术方式损伤膝关节制备兔膝骨关节炎模型,探讨膝骨关节炎动物模型的最佳制备方法。方法:将16只雄性五六月龄新西兰大白兔随机分为假手术组、模型A组、模型B组、模型C组,每组4只。假手术组切开右侧膝关节内侧后立即缝合;模型A组磨损右侧膝关节半月板、磨损前交叉韧带;模型B组摘除右侧膝关节半月板、磨损前交叉韧带;模型C组摘除右侧膝关节半月板、切断前交叉韧带。术后连续3 d注射抗生素,记录一般情况。4周后通过X射线片观察关节情况,苏木精-伊红染色观察软骨组织变化,酶联免疫吸附法检测右侧膝滑膜液和血清中炎症因子水平。结果与结论:(1)模型组右侧膝关节明显出现红肿热痛情况,皮温明显高于假手术组;(2)术后模型组右侧膝关节皮温较假手术组明显升高,差异有显著性意义(P<0.05);(3)X射线片显示假手术组膝关节未见异常,模型组出现不同程度的关节面破坏及关节间隙狭窄,其中模型C组最为严重;(4)苏木精-伊红染色显示假手术组为软骨组织正常形态;模型组出现软骨细胞数量减少,层次紊乱,其中模型C组软骨结构损坏严重,可见血管生成;(5)酶联免疫吸附实验显示,模型组兔血清炎症因子水平较假手术组明显升高,差异有显著性意义(P<0.001);模型组兔右侧膝关节滑膜液炎症因子水平较假手术组明显升高,差异有显著性意义(P<0.001);(6)提示通过对各组兔膝关节一般情况、影像学及相关因子改变分析发现,以上3种手术损伤膝关节方法均能成功构建兔膝骨关节炎模型,模型C组已达到膝骨关节炎中晚期改变,模型A、B组符合早中期膝骨关节炎改变;此外实验证实膝骨关节炎病情进展速度与膝关节损伤程度呈正相关,血清中炎性因子水平相比于滑膜液对膝骨关节炎病情变化更敏感。

补肾化痰方对绝经后骨质疏松模型大鼠骨重建平衡的影响

目的观察补肾化痰方对绝经后骨质疏松(PMOP)模型大鼠骨重建平衡的影响。方法选取6月龄SD雌性大鼠30只,按照随机数字表法将其分为假手术组、模型组及中药组,每组10只。假手术组及中药组均以卵巢切除术造模,假手术组仅切除卵巢旁等量脂肪。术后5周开始灌胃,中药组给予补肾化痰方,假手术组和模型组灌服等量生理盐水。12周末大鼠处死后取材,分别采用酶联免疫吸附测定法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测血清及骨组织骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的含量及定位,采用micro CT检测大鼠的骨密度,比较分析各组间各个指标的差异。结果模型组和中药组大鼠骨密度及血清BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL含量均低于假手术组,RANKL含量高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组大鼠骨密度及血清BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL含量均高于模型组,RANKL含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和中药组大鼠骨组织BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL灰度值均低于假手术组,RANKL灰度值高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组大鼠骨组织BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL灰度值均高于模型组,RANKL灰度值低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,BMP2、RUNX2、OPG的阳性表达主要位于骨髓基质细胞胞浆及骨小梁周边成骨细胞中;RANKL的阳性表达位于骨质边缘破骨细胞中,呈棕黄色颗粒。结论补肾化痰方能够通过BMP2/Smad/RUNX2信号通路及OPG/RANKL/RANK信号通路调控骨重建平衡,从而起到治疗PMOP的作用。

从阳明经证探讨白虎加人参汤治疗甲状腺毒症

引起甲状腺毒症的原因很多,临床以甲亢为主,常伴随甲状腺危象而受到重视。本文将从中医对甲状腺毒症的认识出发,明确燥热伤津为疾病主要病机。临证以清泄阳明之热,补气以生阴津为法,选用白虎加人参汤治疗,旨在为临床治疗提供思路。

补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠脂骨代谢的影响及中枢调控机制研究

目的观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松模型大鼠脂骨代谢的干预作用。方法将6月龄未孕雌性SD大鼠75只随机分为假手术组、模型组、阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组,模型组、阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组大鼠摘除双侧卵巢,假手术组仅切除卵巢周围同等质量的脂肪组织。术后第5周开始给予不同药物灌胃干预8周:补肾化痰组9.4 g/kg、阿托伐他汀组0.92 mg/kg、利维爱组0.23 mg/kg,模型组和假手术组2 mL生理盐水,1次/d。采用Micro-CT检测各组大鼠右侧股骨BMD,采用ELISA法检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)、免疫组化检测下丘脑组织瘦素(leptin,LPN)、瘦素受体(leptin receptor,OBR)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)及其Y2受体的相对表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠BMD明显下降(P<0.05),TG、TC、HDL-C明显升高(P<0.05),LDL-C明显下降(P<0.05),LPN、OBR表达明显下降(P<0.05),NPY、Y2受体表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组BMD明显升高(P<0.05),TG、TC、HDL-C明显下降(P<0.05),LDL-C明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化痰组LPN、OBR表达明显升高(P<0.05),阿托伐他汀组和利维爱组LPN、OBR表达显著上升(P<0.01),补肾化痰组LPN、OBR蛋白水平较阿托伐他汀组和利维爱组低(P<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组NPY、Y2蛋白水平显著降低(P<0.01),补肾化痰组和利维爱组NPY、Y2蛋白水平较阿托伐他汀组低(P<0.05),补肾化痰组NPY、Y2蛋白水平较利维爱组低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾化痰方可通过LPN-下丘脑NPY轴调控去势骨质疏松大鼠的脂骨代谢异常,从而改善骨质疏松。

补肾化痰方影响去势骨质疏松大鼠Leptin及β2-AR表达的实验研究

[目的]探讨补肾化痰方影响瘦素(Leptin)及β2肾上腺素能受体(β2-AR)的表达水平来防治绝经后骨质疏松症的机制。[方法]将75只大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾化痰组、利维爱组、阿托伐他汀组,采用双侧卵巢摘除建立去势骨质疏松模型,假手术组只切除卵巢周围同等质量的脂肪组织。使用微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测大鼠右侧股骨的骨密度(BMD),酶联免疫吸附(ELISA)检测大鼠血清Leptin、雌二醇(E2),全自动生化仪检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),聚合酶链反应(PCR)检测骨组织中Leptin mRNA、β2-AR mRNA相对表达量。[结果]模型组相对于假手术组BMD、血清Leptin、E2水平明显降低;治疗后,补肾化痰组相对于模型组的BMD、血清Leptin、E2、HDL-C含量及骨组织Leptin mRNA表达水平明显提高,血清TC、TG、LDL-L含量及骨组织β2-AR mRNA表达水平明显降低,与利维爱组及阿托伐他汀组比较无明显差异。[结论]补肾化痰方可以有效提高绝经后骨质疏松大鼠的BMD,补充雌激素水平,通过调节Leptin水平来介导交感神经的活性,起到防治绝经后骨质疏松和改善脂代谢的作用。

基于系统生物学组学技术的甲状腺疾病中医药研究与应用

中医药治疗甲状腺疾病具有独特的优势,尤其是在缩短起效时间、迅速缓解症状、增强西药疗效、减少西药毒副作用等方面,但目前研究缺乏创新及中医药特色。系统生物学是以整体性研究为特点的大科学,与中医学整体观念的特点不谋而合。本文通过阐述甲状腺疾病的基因组学、转录组学、蛋白质组学及代谢组学的中医药研究现状,从组学技术角度提出甲状腺疾病研究的设想和展望。系统生物学平台的组学技术可以互相整合并应用于中医药研究中,能够进一步拓宽甲状腺疾病的中医药研究思路。

经方之黄连汤方药浅析

《伤寒论》为"经方之祖",黄连汤出自张仲景《伤寒论》太阳病篇173条,此条是全文仅有的一条关于黄连汤方的信息。本方虽然原文信息论述较少,但其临床意义非常高,与半夏泻心汤等方剂有异曲同工之妙,但也有自身独特之处。对黄连汤就此条原文加以总结,包括病机、治法、组方、药物功效及药对,类方对比。

骨质疏松症的西医研究进展

骨质疏松症(OP)是以骨含量减少,骨微观结构破坏,骨强度下降,导致骨脆性增加,易发生骨折为特征的代谢性骨病。随着人口老年化进程的加快,老年人口比例逐渐增大,OP引发了更多人的重视,防治OP已成为研究代谢性骨骼疾病的新热点。本文通过综合近年来的相关文献,对OP的发病机制、诊断标准、临床表现及西医最新治疗研究现状进行综述。

基于“肾痰”认识骨-脂代谢异常失衡在绝经后骨质疏松症发病中的作用

绝经后骨质疏松症(PMOP)是绝经后妇女常发生的一种全身性代谢疾病,主要表现为骨量低下、骨微结构退行性改变、骨脆性增加且极易发生脆性骨折,严重威胁着绝经后妇女的健康。现代研究表明绝经后骨代谢紊乱与脂代谢失衡常常并见,中医学则认为PMOP的发病多从肾论治。课题组长期从事PMOP的临床与基础研究工作,认为骨-脂代谢失衡是PMOP的重要发病机制,“肾痰”亦是PMOP发病的关键所在,临床论治除了补肾,还应化痰,并通过一系列实验研究证实了从“肾痰”论治PMOP的可能性。因此,本文拟基于“肾痰”探讨骨-脂代谢失衡在绝经后骨质疏松症发病中的作用,丰富中医药论治PMOP的科学内涵。

麻黄连翘赤小豆汤对5-HT所致瘙痒模型大鼠与不同细胞系中5-HT1A及GRPR表达的影响

目的通过建立大鼠瘙痒模型联合体外细胞培养,探讨麻黄连翘赤小豆汤的止痒效果和对5-HT1a受体(5-羟色胺1a受体,Serotonin 1a receptor)、GRPR(胃泌素释放肽受体,Gastrin-releasing peptide receptor)表达的影响。方法将40只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠作为研究对象,随机分成空白组、模型组、麻黄连翘赤小豆汤(MLC)低、中、高3个剂量组,每组8只。除正常组外,其余各组均采取颈背部皮下注射2%5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)溶液建立大鼠瘙痒模型。造模完成1天以后,药物干预组大鼠采用麻黄连翘赤小豆汤溶液灌胃治疗14天,浓度分别为4.3 g·kg^(-1)、8.6 g·kg^(-1)、17.2 g·kg^(-1),正常组和模型组灌胃等量等体积的生理盐水,观察并记录大鼠造模当天、治疗第7天、治疗第14天各组大鼠搔抓次数。治疗14天后取大鼠脊髓,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)和免疫组化法检测5-HT1a受体和GRPR的表达水平及组织内分布情况。同时选用2种不同类型细胞系,分别分为空白组,对照组与干预组,对照组与干预组采用生理盐水与麻黄连翘赤小豆汤处理,48h后采用实时荧光定量PCR技术(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测5-HT1a受体与GRPR mRNA的表达情况。结果麻黄连翘赤小豆汤对瘙痒模型大鼠有止痒作用(P<0.05),其抑制5-HT1a受体及GRPR的表达水平(P<0.05),在细胞层面也下调5-HT1a受体及GRPR的表达。结论麻黄连翘赤小豆汤可通过抑制5-HT1a与GPRP的表达进而达到止痒作用。

基于MAPK信号通路探讨复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的兔骨关节炎软骨细胞的作用及其机制

目的:基于MAPK信号通路探讨复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的兔骨关节炎软骨细胞的作用及其机制。方法:选取5只清洁级新西兰大白兔,提取兔软骨细胞培养至第2代,通过IL-1β诱导软骨细胞,建立骨关节炎软骨细胞体外模型,将其分为空白对照组、IL-1β组、双醋瑞因组、复方芪芎颗粒低浓度组、复方芪芎颗粒中浓度组、复方芪芎颗粒高浓度组。空白对照组不进行任何干预,IL-1β组采用质量浓度为10μg/L的IL-1β处理,双醋瑞因组采用10-5mol/L双醋瑞因处理,复方芪芎颗粒低、中、高浓度组分别采用10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL复方芪芎颗粒处理。干预24、48、72 h后,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组P38激酶、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、P65激酶、基质金属蛋白酶13(MMP-13)基因表达水平;干预72h后,采用Western blotting法检测各组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白表达水平。结果:干预24、48、72 h后,IL-1β组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 m RNA、MMP-13 mRNA相对表达量高于空白对照组(P<0.05);双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 mRNA、MMP-13 mRNA相对表达量均低于IL-1β组(P<0.05);复方芪芎颗粒高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK m RNA、P65 mRNA、MMP-13 mRNA相对表达量低于复方芪芎颗粒低浓度组(P<0.05)。随着药物干预时长的延长,双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 m RNA、MMP-13 mRNA相对表达量均呈降低趋势(P<0.05)。干预72 h后,IL-1β组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量高于空白对照组(P<0.01);双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量均低于IL-1β组(P<0.01);复方芪芎颗粒高浓度组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量低于复方芪芎颗粒低浓度组(P<0.01)。结论:复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制MAPK信号通路实现的,且随着药物浓度的升高和干预时长的延长其对MAPK信号通路的抑制效果更加明显。

补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响

目的:研究补肾化痰方在防治绝经后骨质疏松症中对免疫T细胞亚群辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法:6月龄SD雌性大鼠60只,按随机数字表分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(0.184 mg·kg^(-1)),补肾化痰方低、中、高剂量组(4.7,9.4,18.8 g·kg^(-1)),除假手术组外,其他组均采用手术切除卵巢,制作绝经后骨质疏松症模型。术后1周灌胃给药,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃,1次/d,灌胃12周后取材。运用微计算机断层扫描技术(Micro CT)检测大鼠骨量及骨微结构;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中叉头框蛋白p3(Foxp3),维甲酸相关核孤受体γt(RORγt)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织中Foxp3,RORγt mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中Foxp3,RORγt蛋白表达量;运用流式细胞抗原检测,分析并比较各组Th17,Treg细胞的数量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨量降低、骨小梁显著减少(P<0.01);骨微结构破坏,血清中Foxp3浓度显著降低,RORγt浓度显著升高(P<0.01),骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达降低,RORγt mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),骨组织中Treg细胞数量减少(P<0.01),Th17细胞数量增加,且Th17/Treg值显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组骨量明显增加(P<0.05,P<0.01),血清中Foxp3浓度升高,RORγt浓度显著降低(P<0.01),骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),但低剂量组mRNA差异无统计学意义,RORγt mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),骨组织中Treg细胞数明显升高,Th17细胞数量明显降低(P<0.05,P<0.01),且Th17/Treg显著降低(P<0.01)。结论:补肾化痰方可以提高去卵巢大鼠骨量,改善骨微结构,并使骨组织中Treg细胞数量增加而Th17细胞数量减少。进而推论补肾化痰方可能通过调节Th17/Treg平衡,而发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨补肾化痰方改善去势大鼠骨丢失的作用机制

目的探究补肾化痰方对去势大鼠骨丢失和IL-6/Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)通路的影响。方法SD雌性大鼠随机分为对照组、模型组、戊酸雌二醇(0.184 mg/kg)组以及补肾化痰方低、中、高剂量(4.7、9.4、18.8 g/kg)组,除对照组外,其他组均采用手术切除卵巢,制作绝经后骨质疏松症模型。术后1周给予戊酸雌二醇和补肾化痰方进行干预,给药12周后取材。采用Micro CT检测各组大鼠肱骨骨密度和骨矿物质含量;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠股骨组织病理变化;采用碱性磷酸酶染色法考察各组大鼠骨髓成骨细胞数量;采用ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-17水平;采用qRT-PCR法检测各组大鼠股骨组织IL-6、IL-6R、JAK2和STAT3mRNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠股骨组织IL-6、IL-6R、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠肱骨骨密度和骨矿物质含量显著降低(P<0.01);骨小梁减少、稀疏,脂肪细胞增多;血清中IL-6、TNF-α和IL-17水平显著升高(P<0.01);股骨组织IL-6、IL-6R、JAK2和STAT3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);IL-6、IL-6R、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组骨密度和骨矿物质含量显著增加(P<0.05、0.01);骨小梁增多,且结构较完整,脂肪细胞减少;补肾化痰方中、高剂量组大鼠骨髓成骨细胞数显著增多(P<0.05、0.01);各给药组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平显著降低(P<0.01),戊酸雌二醇组以及补肾化痰方中、高剂量组大鼠血清中IL-17水平显著降低(P<0.01);股骨组织IL-6、IL-6R、JAK2和STAT3 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),IL-6、IL-6R、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论补肾化痰方能够改善去势大鼠骨丢失,其机制可能与抑制IL-6/JAK2/STAT3通路有关。

补肾化痰方基于白细胞介素-2/信号转导及转录激活子5通路改善去势大鼠骨代谢的作用机制

目的:探讨补肾化痰方干预去势骨质疏松模型大鼠对白细胞介素-2(IL-2)/信号转导及转录激活子5(STAT5)信号通路的影响,进一步明确补肾化痰方防治绝经后骨质疏松症的机制。方法:6月龄SPF级SD雌性大鼠60只,按随机数字表分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组(0.184mg/kg),补肾化痰方低、中、高剂量组(4.7、9.4、18.8g/kg)。除假手术组外,其他组均采用手术切除卵巢建模。术后1周灌胃给药,模型组和假手术组以等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,灌胃12周后取材。采用Micro CT扫描大鼠骨组织,检测骨密度(BMD)。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对大鼠骨组织病理染色,获取破骨细胞数量。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中骨代谢标志物Ⅰ型原胶原氨基端前肽(P1NP)、Ⅰ型胶原交联C-端肽(CTX-1)含量以及IL-2含量。Real-time PCR检测骨组织中IL-2、STAT5 mRNA表达。Western blot检测大鼠骨组织中IL-2、STAT5、P-STAT5蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组BMD、血清P1NP、血清IL-2含量、骨组织IL-2 mRNA及蛋白均显著降低(P<0.01),破骨细胞阳性表达数、血清CTX-1、骨组织STAT5 mRNA、P-STAT5蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各干预组BMD、血清P1NP、血清IL-2浓度、骨组织IL-2蛋白均显著升高(P<0.01,P<0.05);血清CTX-1、STAT5 mRNA均显著降低(P<0.01);IL-2 mRNA、P-STAT5蛋白表达在戊酸雌二醇组,补肾化痰方中、高剂量组均显著改善(P<0.01)。结论:补肾化痰方能够改善去势骨质疏松模型大鼠骨代谢,其机制可能与IL-2/STAT5通路激活相关。

初探土家医雷火神针的机理与功效

土家族医药,属于民族医药,是中华医药中尚未广泛应用的,但具有重要临床价值的一部分。虽然很多治疗方法和药物都没有记载,但是通过在当地世代相传,包括祖传、师徒相授等等,得以继续发展,建立起以＂三元学说＂为基础的理论体系[1]。笔者作为恩施土家族自治州土生土长的土家族人,

补肾化痰方对OVX诱导的骨质疏松大鼠血清LPS及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究补肾化痰方对双侧卵巢切除术(OVX)诱导的骨质疏松大鼠脂多糖(LPS)及Toll样受体4(TLR4)/髓样细胞分化蛋白88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将60只SPF级6月龄的雌性大鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组,补肾化痰方低、中、高剂量组,使用双侧OVX造模,造模后1周,每组中挑选8只,戊酸雌二醇组按0.184 mg·kg^(-1),补肾化痰方低、中、高剂量组分别按4.7,9.4,18.8 g·kg^(-1)灌胃,假手术与模型组给予0.9%生理盐水4 mL灌胃,干预12周后处死取材。运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清LPS含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中TLR4,MyD88,磷酸化(p)-NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平及通路相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β,IL-6 mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组的血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65蛋白表达水平,TLR4,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,IL-6 mRNA水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,戊酸雌二醇组和补肾化痰方高剂量组血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65的蛋白表达,TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平,以及下游炎症因子IL-1β,IL-6 mRNA水平有不同程度降低(P<0.05)。结论:补肾化痰方可以降低血清LPS含量,调控TLR4/MyD88/NF-κB通路中TLR4,MyD88,NF-κB p65,p-NF-κB p65的mRNA水平及蛋白表达,降低骨组织中IL-1β,IL-6 mRNA水平,改善骨微结构,抑制绝经后骨质疏松症的病情发展。