结直肠癌组织中MMR蛋白表达、MSI、RAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系

目的 探讨结直肠癌患者癌组织中错配修复(MMR)蛋白表达、微卫星不稳定性(MSI)、大鼠肉瘤(RAS)基因和致癌同源体B1(BRAF)基因突变与临床病理特征的关系。方法 选取该院2022年1-12月接受根治手术治疗的352例结直肠癌患者的肿瘤组织和血液标本、42例非肠癌患者的实体瘤组织和血液标本,采用免疫组化法检测MMR蛋白表达,一代测序片段分析法检测MSI,实时荧光定量聚合酶链反应检测KRAS、NRAS和BRAF基因突变状态,分析MMR蛋白表达、MSI和3种基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 352例CRC患者肿瘤组织中检出MMR缺陷(dMMR)29例(8.2%),高度微卫星不稳定(MSI-H)26例(7.4%),KRAS基因突变161例(45.7%),NRAS基因突变13例(3.7%),BRAF基因突变11例(3.1%)。与dMMR有关因素为低龄、黏液腺癌、原发于右半结肠癌(P<0.05);与MSI-H相关因素包括低龄、肿瘤家族史、原发于右半结肠癌(P<0.05);KRAS和NRAS基因高突变率分别与黏液腺癌和淋巴结转移有关(P<0.05);BRAF基因高突变率与低分化和原发于右半结肠癌有关(P<0.05)。BRAF基因突变与dMMR和MSI-H有关(P<0.05)。结论 MMR蛋白表达,MSI,以及KRAS、NRAS和BRAF基因突变与不同的临床病理特征有关。通过这5种分子标志物的联合检测可以对肿瘤进行分子分型,进一步为结直肠癌患者的个体化精准诊疗提供理论依据。

先天性巨结肠中β-catenin、TCF/LEF家族蛋白的表达及意义

目的探讨β-catenin及TCF/LEF家族蛋白在先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease,HD)中的表达,分析β-catenin、TCF/LEF家族与肠神经系统发育(enteric nervous system,ENS)及HD发病可能存在的关系。方法应用免疫组化SP法检测44例HD患儿手术切除肠段近端切缘和狭窄段中β-catenin及TCF/LEF家族蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测19例HD患儿手术切除肠段近端切缘和狭窄段中β-catenin、TCF1及TCF4 m RNA的表达水平。结果β-catenin、TCF1、TCF4蛋白在44例HD患儿手术切除肠段近端切缘肠肌间神经丛表达水平均明显高于其在狭窄段肠肌间神经丛的表达(P <0. 001、P <0. 001、P <0. 001);相关性分析显示,β-catenin、TCF1及TCF4在各段肠肌间神经丛表达呈显著正相关; LEF1、TCF3蛋白在44例HD患儿手术切除肠段近端切缘及狭窄段肌间神经丛均阴性。RT-qPCR实验结果表明19例HD患儿手术切除肠段近端切缘β-catenin m RNA表达量是狭窄段的1. 39倍(P <0. 05),近段切缘TCF1 m RNA表达量是狭窄段的1. 96倍(P <0. 05),近端切缘TCF4 m RNA表达量是狭窄段的1. 62倍(P <0. 05)。结论β-catenin、TCF1及TCF4在HD患儿手术切除肠段中的异常表达,可能与HD发病相关。

SOX2、SOX11在先天性巨结肠症中的表达及意义

目的 研究SOX2和SOX11在先天性巨结肠症（Hirschsprung＇s disease,HSCR）手术切除肠段神经丛内的表达及其与肠神经丛、神经节细胞发育可能存在的关系.方法 应用SP免疫组织化学方法检测50例HSCR手术切除肠段近端切缘、移行段和狭窄段肠壁肌间神经丛中SOX2和SOX11蛋白的表达水平,显微测量分析各肠段肌间神经丛和神经节细胞直径并观察神经节细胞的发育情况.采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测其中20例HSCR手术切除肠段近端切缘和狭窄段肠壁组织SOX2mRNA和SOX11 mRNA的表达水平.结果 在HSCR手术切除肠段近端切缘、移行段和狭窄段,肠壁肌间神经丛内SOX2蛋白阳性染色的平均光密度值依次为0.1325±0.0469、0.0538±0.0143和0.0244±0.0122,SOX11蛋白阳性染色的平均光密度值依次为0.0696±0.0187、0.0304±0.0106和0.0054±0.0044,不同部位间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.显微测量结果显示,近端切缘、移行段和狭窄段肠壁肌间神经丛直径依次为（57.42±11.42）μm、（33.16±4.76）μm和（30.53±6.50）μm,不同部位间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.近端切缘和移行肠段每高倍视野（×400）肠壁肌间神经丛内神经节细胞数量分别为（5.53±1.45）个和（1.97±0.80）个,神经节细胞平均直径为（16.09±1.75）μm和（11.91±1.30）μm,神经节细胞质/核比值分别为2.18±0.20和1.63±0.14,上述指标比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.RT-qPCR结果显示近端切缘SOX2mRNA表达量是狭窄段的3.05倍,SOX11 mRNA表达量是狭窄段的2.79倍,不同部位间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 SOX2和SOX11在肠壁神经丛胶质细胞或神经节细胞的表达水平可能影响肠壁神经丛和神经节细胞的发育,从而参与HSCR的发病过程.

Yes相关蛋白1在儿童肝母细胞瘤中的表达及作用研究

目的探讨Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在儿童肝母细胞瘤的表达及其与患儿预后的关系,以及YAP1对肝母细胞瘤增殖和凋亡的影响。方法采用免疫组化染色检测YAP1和β-连环蛋白(β-catenin)在38例儿童肝母细胞瘤和瘤旁组织中的表达。将YAP1 siRNA转染人肝母细胞瘤细胞株HepG2后,分别采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)和蛋白印迹法(western blot)检测YAP1在mRNA和蛋白水平的变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果YAP1在肝母细胞瘤的细胞核表达率为50.00%(19/38),瘤旁肝组织无表达0.00%(0/21)(χ^2=15.49,P<0.01),且其表达水平与患儿的预后呈负相关。β-catenin在肝母细胞瘤的细胞核阳性表达率为52.63%(20/38),瘤旁肝组织不表达(0/21)(χ^2=16.72,P<0.01)。YAP1与β-catenin的表达呈正相关。转染siRNA后,HepG2细胞YAP1的mRNA及蛋白表达显著低于对照组,细胞增殖能力下降,凋亡率增高。结论YAP1在儿童肝母细胞瘤中高表达,并且与患儿的预后呈负相关。YAP1可能与β-catenin共同促进肝母细胞瘤的生长。YAP1可能成为儿童肝母细胞瘤治疗的新靶点。