高产角蛋白酶弯曲假单胞菌的筛选鉴定、发酵条件优化及酶学性质

从海洋环境中筛选得到了1株高产角蛋白酶的菌株,经鉴定命名为弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)Gxun-15。经过单因素试验和正交优化,得到该菌最佳培养基组成及产酶条件为:初始pH 7.5,羽毛含量2.5%(m/V),酪蛋白1 g/L,蔗糖40 g/L。优化后酶活力可达674.39 U/mL,较优化前(202.35 U/mL)提高了3.3倍。酶学性质分析表明,该角蛋白酶最适作用温度和pH分别为60℃和6.5~8.0。化学试剂β-巯基乙醇可使酶活提高5倍,十二烷基磺酸钠(SDS)和苯甲基磺酰氟(PMSF)能抑制该酶酶活。羽毛降解产物中共检测到16种氨基酸,其中7种为必需氨基酸,总的游离氨基酸含量为221.24 mg/L,其中苯丙氨酸含量最高为118.36 mg/L。综上,海洋来源的P.geniculata Gxun-15具有高效分泌角蛋白酶的能力,所产角蛋白酶为丝氨酸蛋白酶,具有较强的化学试剂稳定性。该菌的羽毛降解产物中富含多种氨基酸,在饲料方面具有较好的应用潜力。