移植GDNF基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用

目的：探讨移植胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的神经干细胞（NSCs）是否比单纯NSCs移植对脑卒中有更好的神经保护。方法：用GDNF重组质粒转染NSCs，构建过表达GDNF的NSCs（GDNF／NSCs）。插线法制备大鼠脑缺血卒中模型，再灌注3d，脑立体定位分别移植NSCs、GDNF／NSCs以及生理盐水到同侧侧脑室，实验分为GDNF／NSCs组、NSCs组和对照组。再灌注第1、2、3、5和7周处死大鼠，用改良的神经功能缺失评分和H-E染色分别评估大鼠神经功能和脑梗死体积；免疫组织化学显色观察移植的NSCs数量与分布和突触蛋白Syn、PSD-95在脑组织的表达。结果：再灌注2、3周，GDNF／NSCs组较NSCs组神经功能恢复更好。在各时间点GDNF／NSCs和NSCs组大鼠脑缺血体积较对照组显著减小；GDNF／NSCs组的NSCs细胞数量较NSCs组显著增多。再灌注2和3周，GDNF／NSCs组Syn免疫阳性产物比NSCs组显著增加；各时间点GDNF／NSCs组的PSD-95免疫阳性产物比NSCs组显著增加。结论：GDNF基因修饰的NSCs比NSCs对大鼠脑卒中有更好的神经保护作用。

GDNF基因修饰的神经干细胞抑制脑卒中后大鼠的Caspase-3表达

目的研究胶质源性神经营养因子(glial cell line-derived neural factor,GDNF)基因修饰的神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)移植对脑卒中后大鼠缺血侧脑组织内半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific protein-ase-3,caspase-3)表达的影响,探讨GDNF基因修饰的神经干细胞(GDNF/NSCs)移植对大鼠脑卒中的神经保护作用机制。方法取新生大鼠脑组织分离培养NSCs,收集第6代前的NSCs备用。用重组腺病毒GDNF转染神经干细胞,制备GDNF/NSCs。暂时性阻塞大鼠大脑中动脉制备脑卒中模型,3d后,用脑立体定位仪向卒中侧侧脑室分别给予NSCs、GDNF/NSCs和生理盐水。再灌注时间1周、2周、3周、5周、7周后处死大鼠(n=3)。裂解卒中侧脑组织,离心后得到脑组织蛋白样品,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测Caspase-3表达。结果 GDNF/NSCs、NSCs、NS各组caspase-3的表达在1周、2周、3周、5周、7周各时间点均逐渐降低。NSCs组、GDNF/NSCs组显著低于NS组(P<0.01;P<0.001);GDNF/NSCs组明显低于NSCs组(P<0.01)。结论 GDNF/NSCs移植治疗脑卒中的机制可能与抑制caspase-3表达有关。

GDNF基因修饰的神经干细胞促进脑中风后大鼠的GAP-43表达

目的研究胶质源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的神经干细胞(NSCs)移植对脑中风后大鼠缺血侧脑组织内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响,探讨GDNF基因修饰的神经干细胞(GDNF/NSCs)移植对大鼠脑中风的神经保护作用机制。方法取新生大鼠脑组织分离培养NSCs,收集第6代前的NSCs备用。用重组腺病毒GDNF转染神经干细胞,制备GDNF/NSCs。暂时性阻塞大鼠大脑中动脉制备脑中风模型,3天后,用脑立体定位仪向中风侧侧脑室分别给予NSCs、GDNF/NSCs和生理盐水。再灌注时间1w、2w、3w、5w、7w后处死大鼠(n=3)。裂解中风侧脑组织,离心后得到脑组织蛋白样品,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测GAP-43表达。结果 GDNF/NSCs、NSCs、NS各组GAP-43的表达在1w、2w、3w、5w、7w各时间点均逐渐降低。NSCs组、GDNF/NSCs组显著高于NS组(P<0.05);GDNF/NSCs组高于NSCs组(P<0.05)。结论 GDNF/NSCs移植治疗脑中风的机制可能与促进GAP-43表达有关。