PM2.5致大鼠肺损伤模型中肺巨噬细胞NLRP3炎性小体活化研究

目的探讨肺巨噬细胞NLRP3炎性小体活化在大气细颗粒物(PM2.5)所致肺炎症损伤中的作用。方法采用中流量采样器收集PM2.5颗粒物制成混悬液,经气管滴注给予高、中、低剂量(分别为15、10、5 mg/kg)制成大鼠肺损伤模型,3 d后麻醉动物进行肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)中的巨噬细胞,中性红法测定其吞噬功能,并采用免疫荧光双染色观察肺巨噬细胞内NLRP3的表达;处死大鼠解剖取肺组织,HE染色观察肺损伤严重程度并评分,免疫组化法检测肺组织NLRP3表达,ELISA法测定肺组织内IL-18、IL-1β及Caspase-1的表达情况。结果大鼠经气管滴注PM2.5染毒后,BALF内巨噬细胞吞噬功能下降。实验组大鼠肺损伤明显,表现为间质性肺炎;肺泡间隔明显增宽,部分肺泡壁断裂,尤以高剂量组表现明显;各实验组大鼠的肺组织病理学评分均明显高于对照组(均P<0.05)。低、中、高剂量组大鼠肺组织内NLRP3表达均高于对照组。肺组织内IL-18、IL-1β及Caspase-1的表达不同程度上调。结论大鼠气管滴注PM2.5引起的肺损伤和炎症反应与肺巨噬细胞内NLRP3炎症小体的活化有关。

PM_(2.5)对大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体表达及细胞凋亡的影响

目的:初步探讨大气细颗粒物(fine particulate matter,PM_(2.5))诱导大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化及细胞凋亡的潜在分子机制。方法:采用中流量采样器收集PM_(2.5)颗粒物,经超声提取制成混悬液,作用于大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后,MTT法检测细胞存活率,Western blot检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)及凋亡相关蛋白[Bax、Bcl-2及半胱天冬酶-3(Caspase-3)]的表达水平,ELISA检测PM_(2.5)诱导的细胞上清液中半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白介素(interleukin,IL)-18和IL-1β的含量。结果:随着PM_(2.5)浓度的增加和刺激时间的延长,NR8383细胞存活率降低(24 h:F=17.253,P=0.000;48 h:F=18.678,P=0.000;72 h:F=256.104,P=0.000);PM_(2.5)诱导NR8383细胞内NLRP3(F=437.166,P=0.000)和Cathepsin-B(F=42.062,P=0.000)蛋白的表达上调;PM_(2.5)上调细胞内促凋亡蛋白Bax(F=72.827,P=0.000)表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2(F=390.322,P=0.000)表达,下调Caspase-3(F=169.833,P=0.000)蛋白的表达;PM_(2.5)上调细胞培养液中Caspase-1(F=629.866,P=0.000)、IL-18(F=587.165,P=0.000)和IL-1β(F=68.472,P=0.000)的水平。结论:PM_(2.5)可通过溶酶体模式诱导肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化,促进IL-18和IL-1β分泌,并引起肺泡巨噬细胞发生凋亡。

马蔺子素以IAPs为靶点诱导人非小细胞肺腺癌NCI-H1975细胞凋亡的机制研究

目的:研究马蔺子素对人非小细胞肺腺癌NCI-H1975细胞的体外抗肿瘤作用及其以IAPs为靶点诱导凋亡的机制。方法:培养NCI-H975细胞,在显微镜下观察马蔺子素对NCI-H1975细胞形态学的影响;采用MTT法检测不同浓度马蔺子素对NCI-H1975细胞增殖的影响;流式细胞术检测马蔺子素对NCI-H1975细胞凋亡的影响;Western Blot法检测Smac蛋白和凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP、Bcl-2、Bax及IAPs家族相关蛋白CIAP1、CIAP2、XIAP、Survivin、Livin的表达。结果:细胞形态学显示不同浓度马蔺子素作用不同时间下细胞增殖受到不同程度抑制,细胞数量减少;MTT实验表明马蔺子素能呈浓度和时间依赖性地抑制NCI-H1975细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术结果表明马蔺子素能促进NCI-H1975细胞凋亡(P<0.05);Western Blot结果显示随着马蔺子素浓度的升高,凋亡相关蛋白PARP被切割、Caspase-3/9原蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调同时促凋亡蛋白Bax表达上调,Smac蛋白表达上调,IAPs家族相关蛋白CIAP1、CIAP2、XIAP、Survivin、Livin的表达下调(P<0.05)。结论:马蔺子素能抑制NCI-H1975细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制IAPs家族蛋白有关。

重组人源TNC诱导胰腺癌细胞系PANC1的EMT及迁移和侵袭

目的构建人肌腱蛋白C(TNC)真核表达质粒,利用稳定过表达TNC的胰腺癌细胞系以及探索TNC在胰腺癌转移中的作用及分子机制。方法采用独特的引物设计方法构建TNC表达质粒,经转染和G418筛选获得稳定过表达TNC的胰腺癌PANC1细胞系。通过RT-qPCR和Western blot对细胞系中TNC的表达进行鉴定。采用Transwell小室法和Western blot检测TNC对细胞迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(EMT)相关分子表达的影响。结果成功构建TNC质粒,稳定过表达TNC的PANC1细胞迁移、侵袭能力显著增强(P<0.05),上皮标志物E-cadherin表达减少而间质标志物N-cadherin表达增加(P<0.05)。结论TNC真核表达质粒以及TNC稳定表达胰腺癌细胞系的建立,可用于TNC对细胞EMT、迁移和侵袭等方面的机制研究,也是研究TNC生物学功能和胰腺癌发生发展机制的基础。

美登木素对人乳头状甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探讨美登木素对人乳头状甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法用不同浓度(0.19、0.76、3.05、12.21、48.83、195.31、781.25、3125 nmol/L)的美登木素溶液处理B-CPAP细胞,SRB法检测B-CPAP细胞增殖情况。将B-CPAP细胞分为对照组及美登木素(0.1、1、10 nmol/L)组,光学显微镜观察B-CPAP细胞形态变化;流式细胞术检测B-CPAP细胞凋亡情况;Western blotting法测定B-CPAP细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3前体(Procaspase-3)的蛋白表达量。结果与对照组比较,美登木素能有效抑制B-CPAP细胞增殖,且呈浓度及时间相关性;随美登木素浓度增加B-CPAP细胞凋亡率逐渐升高,Bcl-2和Procaspase-3蛋白表达水平下降(P<0.05),呈明确的浓度相关性。结论美登木素具有抑制B-CPAP细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与调控Bcl-2和Procaspase-3蛋白有关。

软坚散结抗肿瘤方剂的优化研究

目的优化软坚散结抗肿瘤方（半夏、夏枯草、山慈姑和海藻）的组方及制备工艺。方法选择不同药物配比的处方（半夏：夏枯草：山慈姑：海藻为3～6：3～6：1～2：1～4）和不同制备工艺（水煎制、水回流、50％乙醇回流、95％乙醇回流），制备得到0、1、2、3、0-I、0-Ⅱ、0-Ⅲ、3-I、3-Ⅱ和3-Ⅲ号样品，建立小鼠移植肿瘤艾氏腹水癌（EAC）模型。动物灌胃给药，1／d，连续7次。以肿瘤重量和生长抑制率为评价指标。结果灌胃给予0、3、0-I号样品的荷瘤动物的肿瘤重量分别为（1．078±0．607）g，[与对照组（1．640±0．577）g相比较，P〈0．01]，（1．063±0．264）g，[与对照组（1．640±0．577）g相比较，P〈0．01]和（1．804±0．603）g，[与对照组（2．634±0．734）g相比较，P〈0．01]；肿瘤生长抑制率分别为34．27％、35．18％和31．57％。结论软坚散结抗肿瘤方对小鼠移植瘤EAC生长具有明确的抑制作用。水回流提取，组方比例为半夏：夏枯草：山慈姑：海藻是3：3：2：2得到的样品具有较好的抑瘤活性。

马蔺子素联合化疗药对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究马蔺子素联合化疗药对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法测定马蔺子素及其联合顺铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞SMMC-7721、人结肠癌细胞LOVO、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞BGC-823和人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用。流式细胞仪检测马蔺子素(0.5μg/mL)组、顺铂(5μg/m L)组、多柔比星(0.5μg/mL)组、5-氟尿嘧啶(500μg/mL)组、联合用药组(0.5μg/mL马蔺子素+5μg/mL顺铂组、0.5μg/mL马蔺子素+0.5μg/mL多柔比星组、0.5μg/mL马蔺子素+500μg/mL 5-氟尿嘧啶组)对A549细胞凋亡和周期变化情况的影响。结果马蔺子素对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用,IC_(50)值分别为10.43、1.94、8.73、3.37、4.89μg/mL。马蔺子素与顺铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶联合作用后,均能明显增加后者对A549细胞增殖的抑制作用,二者有明显的协同作用。单用5-氟尿嘧啶、顺铂和多柔比星,A549细胞比例分别在G_0/G_1、S和G_2/M期均显著增加,且与马蔺子素合用后A549细胞比例在相应周期均显著增加(P<0.05)。合用组肿瘤细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。与对照组比较,顺铂、多柔比星和5-氟尿嘧啶单用及与马蔺子素合用均可显著升高细胞的凋亡率(P<0.05),且马蔺子素与顺铂或多柔比星联合用药时,细胞凋亡率显著高于单独使用相应的化疗药(P<0.05)。结论马蔺子素联合化疗药能明显抑制肿瘤细胞的增殖,其机制与影响细胞周期调控和诱导细胞凋亡有关。