用杆状病毒-昆虫细胞构建新型冠状病毒S突变的病毒样颗粒

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron和Delta刺突蛋白(S)突变的病毒样颗粒(VLP)。方法以Omicron为例,在兰州大学基础医学院病原生物研究所前期构建表达质粒pFastBac-EM基础上,将Omicron的S基因克隆到pFastBac-EM,构建重组质粒pFastBac-EMS(ο),测序鉴定;pFastBac-EMS(ο)转化DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,获得重组杆粒Bacmid-EMS(ο),转染ExpiSf9TM昆虫细胞,获得重组杆状病毒;重组杆状病毒感染昆虫细胞表达组装VLP-EMS(ο);蔗糖密度梯度超速离心纯化、收集VLP-EMS(ο);免疫电镜鉴定纯化VLP-EMS(ο)形态及S蛋白的展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白表达。以相同方法构建Delta的VLP,命名为VLP-EMS(δ)。结果测序结果显示成功构建重组质粒pFastBac-EMS(ο)和pFastBac-EMS(δ);聚合酶链式反应验证重组杆粒Bacmid-EMS(ο)和Bacmid-EMS(δ)构建成功;重组杆粒转染ExpiSf9TM昆虫细胞获得VLP-EMS;免疫电镜显示VLP-EMS(ο)和VLP-EMS(δ)成功组装,S蛋白成功展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白成功表达。结论利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统成功构建SARS-CoV-2的VLP-EMS(ο)、VLP-EMS(δ),突变的S蛋白成功在VLP上组装并稳定表达,可以用于SARS-CoV-2抗原、疫苗和中和性抗体等的进一步研究。

肾移植术后新三联免疫抑制治疗中激素撤出的安全性和有效性的系统评价

目的评价肾移植术后从新三联免疫抑制方案中撤出激素的安全性和有效性。方法计算机检索MEDLINE(1966～2005.9)、OVID(1966～2004)、EMBASE(1984～2004)、Cochrane图书馆(2005年第4期)、中国生物医学文献数据库(1990～2005.9)。手工检索《中华器官移植杂志》(1995～2005)等7种中文杂志。纳入肾移植术后环孢A(CsA)/他克莫司(Tac)+霉酚酸酯(MMF)+激素(新三联)方案中激素撤出的随机对照试验(RCT):包括激素撤出组与持续应用激素的对照组。纳入研究的方法学质量按CochraneReviewer’sHandbook4.2.5随机对照试验的质量标准评价。统计分析采用RevMan4.2.7版软件。结果共纳入9个RCT,1681例受者(SW/SC:845/836),随访时间6～12个月。在CsA/Tac+MMF+激素治疗方案中,CsA和Tac对急性、慢性排斥的发生、病人和移植物存活率的影响均无统计学差异,Meta分析显示:①试验组急性排斥发生率比对照组约高2倍,主要为BanffⅠ级。②移植物、病人存活率和慢性排斥发生率两组均无统计学差异。③激素撤出可以降低泌尿系、单纯疱疹病毒和念珠菌机会性感染的发生频次;巨细胞病毒和败血症感染两组发生频次比较均无统计学差异。结论在肾移植术后3个月内从新三联免疫抑制剂方案中撤出激素:①会增加BanffⅠ级急性排斥发生率,但对中、重度急性排斥发生率无影响;②激素撤出不影响移植物、病人存活率和慢性排斥发生率;③可降低机会性感染和泌尿系感染发生频次,但不影响CMV感染和败血症的发生频次。为预防严重感染,在足量免疫抑制剂治疗方案中撤出激素值得考虑,临床医生可权衡利弊,个体化用药。

用ELISA和PCR检测异常妊娠妇女弓形虫感染

为了解兰州市妊娠妇女近年弓形虫感染情况 ,探讨异常妊娠与弓形虫感染的关系 ,分别采用ELISA和PCR检测了异常妊娠妇女血清中TOX IgM和TOX DNA。结果 ,1 3 5例异常妊娠妇女血清TOX IgM和TOX DNA阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 1 2 .5 9% (1 7/1 3 5 ) ,总阳性率为 1 3 .3 3 % (1 8/1 3 5 ) ,组间无显著差异 (P >0 .0 5 )。异常妊娠史妇女与妊娠期无异常孕妇的血清TOX IgM阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 6.0 2 % (3 2 /5 3 2 ) ,组间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,相对危险度为1 .85。调查结果显示 ,兰州市弓形虫血清抗体阳性率较 1 994年略有上升 ,弓形虫感染的孕前检查应联合应用ELISA和PCR为宜。

人细小病毒B19与自然流产关系的研究

无菌留取 5 4例自然流产妇女和 43例妊娠无异常孕妇血清 ,用聚合酶链反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)检测的人细小病毒B19(HumanParvovirusB19,B19)DNA ,在自然流产组中人细小病毒B19DNA有 15例阳性 ,阳性率为 2 7.78%。正常对照组中 ,人细小病毒B19DNA有 2例为阳性 ,阳性率为 4.65 % ,用x2 检验 ,x2 =8.86,P <0 .0 1,两组有非常显著性差异。由此总结 。

乳腺癌患者外周血RNA提取方法的探讨

目的 建立外周血RNA的提取方法 ,为用逆转录 -聚合酶链反应检测乳腺癌外周血中微转移打好基础。方法 从 30例乳腺癌患者的冰冻保存和新鲜全血标本 ,用两种不同方法分离外周血有核细胞 ,提取RNA ,测定RNA产量及RNA的完整性。结果 从冰冻保存和新鲜全血标本 ,提取的总RNA的OD值有显著性差异。从新鲜全血中提取RNA的产量高于从冰冻保存的全血中提取的RNA的产量。但是 ,电泳时均有 2 8S与 1 8S的条带。结论 用逆转录 -聚合酶链反应时 ,以从新鲜全血中提取RNA为宜 ,但为留取标本的方便 ,也可用冰冻保存的全血标本 。

人微小病毒B19与异常妊娠

人微小病毒B19(human parvovirus B19,HPV B19)感染多发生在冬春季,孕妇和儿童感染多见,23%～45%的孕妇为易感者,围生期感染HPV B19病毒引起的宫内感染可导致胎儿非免疫性水肿,而且,还可能与胎儿畸形有关,孕妇感染HPV B19后,围生儿可能出现非免疫性胎儿全身水肿、死胎或流产,其发生率可达5%～38%,并可导致5%～20%的死亡率.其相对危险比较严重,因此,在妊娠期对HPV B19的感染越来越多地引起关注.

探讨人细小病毒B19与异位妊娠的关系

无菌留取85例异位妊娠妇女和43例妊娠无异常孕妇血清,用聚合酶连反应(PCR)检测的人细小病毒B19DNA,在异位妊娠组中人细小病毒B19DNA有20例阳性,阳性率为23.53%.正常对照组中,人细小病毒B19DNA有2例为阳性,阳性率为4.51%,用x2检验,x2=6.47,P<0.05,2组有显著性差异.由此总结,人细小病毒B19感染可能是异位妊娠的原因之一.

乳腺癌患者外周血CEA mRNA的表达

目的 检测乳腺癌患者外周血CEAmRNA的表达 ,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌转移的方法。方法 用巢式RT -PCR检测乳腺癌患者和乳腺良性肿瘤患者的外周血中CEAmRNA的表达。结果 5 6例乳腺癌患者CEAmRNA有 2 1例表达 ,阳性率为 3 7.5 0 % ;42例乳腺良性疾病者CEAmRNA没有一例表达。两组有高度显著性差异 (χ2 =2 0 .0 4 ,P <0 .0 1 ) 结论 巢式RT -PCR检测CEAmRNA阳性结果提示其具有形成转移的倾向 。

新西兰医疗风险防范及监管机制现状的循证评价——完善诉讼体系,规范医疗行为,防范医疗风险

目的循证评价新西兰医疗风险监测预警机制的现状与防范措施,为我国医疗风险监测预警机制的建立提供参考。方法计算机检索EI(1969～2006)、SCI和SSCI(1975～2006)、EMBASE (1966～2006)、SCOPUS(100％包含MEDLINE)(1960～2006),VIP (1989～2006)、CNKI(1979-2006)数据库和官方及医疗相关网站,如WHO、新西兰卫生部、新西兰医疗协会和新西兰健康与残疾委员会等。收集有关新西兰医疗风险防范和监管方面的相关文献,筛选和评价文献质量,进行描述性研究。结果共纳入文献10篇,主要涉及医疗不安全事件、病人安全和医疗诉讼保险等内容。新西兰在防范医疗风险过程中采取了多层次的防范和处理措施,通过加强医疗操作规范、医患交流、安全意识及促进医院信息化建设等措施防范医疗差错、提高医疗质量。同时,通过修订卫生从业人员资格认证法案和进一步改革完善医疗诉讼体系等,构建了与其相适宜的法律环境,从各个层面上防范和监管医疗风险。结论新西兰建立了较为完善的医疗风险监管体系,特别是其医疗诉讼体系和相关法律,值得我们借鉴和学习。

围生期感染人微小病毒B19的研究进展

人微小病毒B19(human parvovirus B19)是1975年Cossart等[1]在筛选献血员血清乙型肝炎病毒表面抗原时,在标号为B排第19号的献血员的血清中发现小型的病毒颗粒,故称为人微小病毒B19.B19感染多在冬春季流行,孕妇和儿童感染多见,23%～45%的孕妇为易感者,有明显的职业倾向,即经常与学龄期儿童接触者,如幼儿园或小学教师、医务工作者易感染[2].B19感染后,可因个体的年龄和免疫状态不同而结局不同,从无症状到严重者可危及生命.B19感染儿童可以引起传染性红斑,又称第五病(the fifth disease)、关节病、再障危象.围生期感染B19病毒引起的宫内感染可导致胎儿非免疫性水肿,而且,还可能与胎儿畸形有关,相对危险比较严重,因此,妊娠期对B19的感染越来越多地引起关注.

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的:检测乳腺癌患者外周血中CEAmRNA和CK-19mRNA的表达,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法:65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CEAmRNA和CK-19mRNA的检测。结果:以巢式RT-PCR终产物出现131bp为CEAmRNA阳性,460bp为CK-19mRNA阳性。65例乳腺癌患者CEAmRNA和CK-19mRNA分别有26例和24例表达,总阳性率分别为40.0%和36.92%。37例乳腺良性疾病者无1例CEAmRNA和CK-19mRNA表达,两组有统计学意义(P<0.001)。结论:RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移。

医学免疫学“课程思政”的教学改革与探索

"课程思政"是加强高等学校大学生思想政治教育的重要途径,为更好地发挥"课程思政"的协同育人效应,基于医学免疫学的课程特点,把"思政元素"有机融入医学免疫学课程教学中,实施"知识传授"与"价值引领"同行并重,培养德才兼备的高素质医学人才。

依那西普治疗强直性脊柱炎的系统评价

目的系统评价依那西普治疗强直性脊柱炎的有效性和安全性。方法计算机检索Cochrane Library(2008年第4期)、MEDLINE(1966～2008.9)、EMbas(e1974～2008.9)、中国生物医学文献数据库(1978～2008.9)、中国期刊全文数据库(1994～2008.9)、中文科技期刊全文数据库(1989～2008.9)。万方数据库,纳入依那西普治疗强直性脊柱炎的随机对照试验,由两名评价员独立提取资料,并对其方法学质量进行评价。对符合纳入标准的研究用RevMan5.0软件进行Meta分析。结果共纳入7个随机对照试验,949例患者。Meta分析结果显示:依那西普组较安慰剂组能有效提高达到ASAS20的病例数[OR=4.15,95%CI(2.90,5.93)],达到ASAS50例数[OR=6.88,95%CI(3.90,12.14)],改善Bath强直性脊柱炎活动指数[OR=6.52,95%CI(3.18,13.37)],降低红细胞沉降率[WMD=16.27,95%CI(11.80,20.74)]。依那西普组与安慰剂比较,在注射部位不良反应发生率方面,差异有统计学意义[OR=3.91,95%CI(2.47,6.20)],但其他不良反应的差异无统计学意义;25mg依那西普组和50mg依那西普组在疗效和不良反应方面,差异无统计学意义。结论依那西普较安慰剂能更有效地改善患者症状,缓解疾病的活动状态,但同时会增加注射部位反应的发生率,但现有有限证据尚不能证明不同剂量依那西普的有效性和安全性有差异,尚需高质量、大样本、长期的随机对照试验来验证依那西普治疗的最佳剂量。

微波治疗宫颈糜烂随机对照试验的质量评价

目的评价微波治疗宫颈糜烂随机对照试验的方法学质量和报告质量。方法通过计算机检索、手工检索,全面收集与微波治疗宫颈糜烂有关的随机对照试验,按照Cochrane协作网推荐的评价方法对纳入研究进行方法学质量评价,按照CONSORT清单项目进行研究报告质量评价。结果最终纳入文献11篇,其中随机对照试验3篇,半随机对照试验8篇。评价结果显示,纳入文献方法学质量和报告质量普遍较低,其中C级为10篇, CONSORT评分最高仅17分。结论以往的微波治疗宫颈糜烂随机对照试验研究存在不同程度的方法学质量缺陷,故其结论存在发生选择性偏倚、实施性偏倚、测量性偏倚以及减员性偏倚的高度可能性。而低的研究报告质量又会严重影响读者对研究结果真实性、重要性及实用性的正确理解和评价。因此期待设计严密、实施科学、报告完整的随机对照研究出现。

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。

HBsAg阳性孕妇免疫接种阻断HBV宫内感染疗效的Meta分析

目的评价HBsAg阳性孕妇产前应用乙肝免疫球蛋白（HBIG）或联用乙肝疫苗阻断胎儿HBV宫内感染的有效性及安全性。方法计算机检索6个数据库,手检9种期刊,并追查参考文献,纳入国内外符合纳入标准的随机对照试验和半随机对照试验,由两名评价员独立筛查文献,评价质量和提取资料。用Revman 4.2.10软件分析数据。采用χ2检验鉴定研究间异质性,使用固定效应或随机效应模型合并结果。结果HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量600 IU,胎儿HBV宫内感染率〈空白对照组（RR=0.42,95%CI=0.21-0.83,P=0.01）,新生儿HBV DNA阳性率低于空白对照组（RR=0.30,95%CI=0.10-0.85,P=0.02）,新生儿HBeAg阳性率Anti-HBs阳性率与空白组比较差异无统计学意义;总剂量大于600 IU时,宫内感染率〈空白对照组（RR=0.39,95%CI=0.26-0.58,P〈0.000 01）,新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异无统计学意义。HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量〉600 IU,胎儿HBV宫内感染率、新生儿HBeAg阳性率、新生儿HBV DNA阳性率、新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异均无统计学意义;总剂量600 IU组新生儿HBeAg阳性率和新生儿HBV DNA阳性率与对照组比较差异有统计学意义。结论HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG可降低胎儿HBV宫内感染率;HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG阻断宫内感染的疗效尚不清楚。

RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA的表达

目的 探讨乳腺癌患者外周血中 CK- 19m RNA的表达 ,建立检测外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法 采取 6 5例乳腺癌和 37例乳腺良性疾病患者的外周血 ,分离其有核细胞后进行细胞总 RNA的抽提 ,运用巢式 RT- PCR技术进行 CK- 19m RNA的检测。结果 以巢式 RT- PCR终产物出现 4 6 0 bp带定为阳性。 6 5例乳腺癌患者 CK- 19m RNA有 2 4例表达 ,总阳性率为 36 .92 %。37例乳腺良性疾病者 CK- 19m RNA无一例表达。两组有统计学意义 (χ2 =7.4 1,P<0 .0 0 1)。结论 RT- PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移 。

兰州地区孕妇和新生儿血清中风疹病毒特异性IgM抗体测定研究

本文采用ＥＬＩＳＡ抗ｕ抗体捕捉法检测了兰州地区７１２例孕妇和６２４例新生比血清中风疹病毒特异性ＩｇＭ抗体（ＲＶ－ＩｇＭ）。实验结果为：７１２例孕妇中，ＲＶ－ＩｇＭ阳性者有８例，阳性率为１．１２％：６２４例新生儿脐带血清标本中，ＲＶ－ＩｇＭ阳性者６例，阳性率为０．９６％。结果表明，兰州地区孕妇中有一定的风疹病毒原发感染病例，新生儿也存在一定的风疹病毒先天性感染问题。

Jagged-1在子宫颈癌组织中的表达

目的检测Jagged-1在子宫颈癌组织中的表达情况,探讨其在子宫颈癌发生、发展中的作用机制。方法采用免疫组织化学EnVision法检测60例子宫颈癌和21例正常子宫颈组织中Jagged-1的表达情况。结果Jagged-1在子宫颈鳞癌、腺癌组织中及正常组织中的阳性率分别为72.5%、80.0%和23.8%,在子宫颈鳞癌、腺癌组织中的表达水平高于正常子宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Jagged-1在子宫颈癌中的表达升高,提示其可能参与了子宫颈癌的发生、发展过程。

兰州地区孕妇和新生儿弓形虫感染状况的血清学调查

采用间接血凝试验测定了兰州地区５８０例孕妇和６１４例新生儿血清中弓形虫抗体，同时进行了１６６对母血和新生儿脐带血的配对测定。结果５８０例孕妇中，弓形虫抗体阳性者３４例，阳性率为５．８６％．其中效价为１：６４者有２３例，１：２５６者４例，１：１０２４者５例，１：４０９６者２例。６１４例新生儿中抗体阳性者３２例，阳性率为５．２１％。其中抗体效价为１：６４者１５例，１：２５６者９例，１：１０２４者８例。１６６对母婴配对血测定结果，母血抗体阳性率为４．８２％，脐带血阳性率为５．４２％，母婴血均阳性者６对，占３．６１％。实验结果提示，兰州地区孕妇存在一定程度的弓形虫感染；新生儿也存在先天性弓形虫感染。