低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响

目的:明确低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A375细胞,CoCl 2构建细胞内低氧模型。细胞分为空白对照组,CoCl 2组,SB-431542(Nodal抑制剂)组和CoCl 2+SB-431542组。通过Western Blot技术检测Nodal、类激活素激酶4/7(ALK4/7)、与恶性肿瘤进展相关的上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP 2)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平。结果:CoCl 2组细胞内Nodal及ALK7蛋白浓度,高于其他组(P<0.05)。各处理组均没有检测到ALK4蛋白;CoCl 2组细胞中Vimentin和MMP2蛋白的浓度高于其他组(P<0.05);各处理组E-cadherin蛋白水平差异不具统计学意义。结论:低氧环境可诱导A375细胞中Nodal和细胞迁移相关蛋白MMP2和Vimentin的高表达。

ROS调控细胞自噬在UVA致人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨长波紫外线(ultraviolet A, UVA)致人皮肤成纤维细胞凋亡过程中胞内活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)及细胞自噬的调控作用。方法 取生长良好的人皮肤成纤维细胞,按照不同处理方式分组并给予处理后,以UVA照射后观察成纤维细胞生长状态,MTT检测成纤维细胞增殖活性,流式细胞术检测成纤维细胞凋亡以及胞内ROS水平,Western blot检测自噬相关蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3, LC3)的表达水平。结果 UVA照射后,成纤维细胞皱缩变圆、细胞排列间隙增大、折光性降低,细胞活性下降,成纤维细胞凋亡比例明显增加。与对照组相比,在自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin, RAPA)处理的RAPA组中,细胞轮廓清晰,细胞排列紧密,呈火焰状,细胞形态变化不明显,并且可显著抑制UVA照射引起的成纤维细胞凋亡;相反,在自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)处理的3-MA组中,细胞皱缩变圆,细胞间隙增宽,细胞折光性降低,漂浮细胞较对照组多,并且升高了UVA照射引起的成纤维细胞凋亡比例。与对照组相比,UVA照射后成纤维细胞内ROS水平显著增高(P<0.01)、 LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大(P<0.01),p62的表达显著减少(P<0.01)。UVA照射经抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理后细胞的胞内LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降(P<0.05)、p62的表达显著增加(P<0.05)。结论 UVA照射促进细胞内ROS水平升高,从而诱导细胞自噬,抑制UVA致人皮肤成纤维细胞凋亡。

Nrf2信号通路调控自噬对UVA诱导人真皮成纤维细胞凋亡的作用

目的探讨Nrf2信号通路介导的细胞自噬在UVA诱导人皮肤成纤维细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,分为对照组、UVA组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组、自噬抑制3-甲基嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组、核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385)组及干涉(siRNA)组;各实验组经8 J/cm^(2)的UVA照射;采用流式细胞术检测成纤维细胞凋亡;CCK-8检测细胞活性变化;Western blot检测细胞自噬及凋亡关键分子、p62及Nrf2蛋白表达水平。结果经8 J/cm^(2)的UVA照射后成纤维细胞凋亡比例增加、胞内自噬水平显著升高;自噬抑制剂3-MA处理后可显著促进UVA照射引起的成纤维细胞凋亡;而自噬促进剂RAPA处理细胞后,细胞凋亡率较UVA组相比显著降低(P<0.01);与对照组相比,UVA照射后胞核Nrf2表达显著增高;ML385阻断Nrf2入核及使用siRNA干涉Nrf2表达后,自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ降低(P<0.01),p62表达显著减少(P<0.01),凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达增加(P<0.01)。结论UVA照射可通过Nrf2及下游p62信号通路上调细胞自噬水平,抑制UVA诱导成纤维细胞凋亡。