国内血小板基因库建设及应用的现状研究

目的调研国内血小板基因库的建设规模和临床应用情况,了解我国各地区血小板基因库的现状。方法收集来自中国血小板基因数据库协作组的数据和采取自愿上报原则,对2022年度国内27家血站血小板基因库的数据和2021—2023年度14家血站的建库规模、血小板配型数据进行统计分析。结果截止2022年底,全国有27家血站建立血小板HLA基因型资料库,库容量为50~23940人不等,均值为3339±5915人,其中有9家>2000人;血小板HPA基因型资料库容量为50~7162人不等,均值为1636±1549人,其中有14家>1000人;全国有27家血站中,13家无CD36阴性献血者,14家有CD36阴性献血者数据,库容量为2~280个,均值为41±73人。2021—2023年全国血小板捐献者HLA和HPA基因型资料库的库容量呈逐年上升的趋势。14家血站2021—2023年的血小板血清学交叉配型数量在20~8000不等,但血小板基因配合性输注占比差异较大,0%~40%不等,均值<10%。结论国内血小板基因库的规模及应用占比差异大,迫切需要通过扩大血小板捐献者基因型资料库规模、提高血小板基因库的临床使用率,实现血小板的精准输注,进一步保障临床输血的科学性、有效性和安全性。

IgM型抗-Le^a抗-Le^b致ABO正反定型不符1例

正确鉴定无偿献血者的ABO血型在无偿献血工作以及临床输血工作中占有及其重要的地位。无偿献血者ABO血型鉴定错误将会给临床输血造成严重的后果，甚至危及患者生命。所以，只有正确鉴定ABO血型，才能更好地保障临床输血的安全有效。现将笔者在近期检测的1例无偿献血者中由免疫球蛋白M（IgM）型抗-Lea、抗-Leb致ABO正反定型不符的检测结果报道如下。

血型血清学和PCR-SSP方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用

目的探讨血型血清学技术和聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用。方法采用血型血清学方法对14例ABO疑难血型标本做正反定型(必要时进一步做吸收放散试验),同时采用PCR-SSP方法对其做ABO基因分型。结果 14例ABO疑难血型标本的血清学检测:Bx型3例,B(A)、AB3型各2例,Bend、B3、AxB、ABx和Bel型各1例;另有2例为AB型伴抗原减弱(不排除疾病等因素影响)。PCR-SSP方法分型:得到7例ABO亚型基因,分别为Bx02O01、B(A)02O02、AB305、AB303、ABw12、Bw12O02和Bw12O01;7例正常的ABO基因,AB1、B1O01各3例,B1O02型1例。结论 PCR-SSP方法在疑难血型鉴定中的应用有助于输血前检查中ABO血型血清学结果的补充。

经椎动脉常温生理盐水灌冲作为一种神经保护新疗法的可行性和安全性

目的 评估数字减影血管造影术(DSA)后经椎动脉灌冲常温生理盐水(IVNI)的可行性和安全性,为IVNI用于后循环脑梗死患者提供研究基础。方法 对接受脑动脉DSA的14例非脑卒中受试者进行IVNI(流速30~50 mL/min,持续6~10 min),期间监测受试者各项生理指标并记录患者主观症状。使用DSA或经颅多普勒超声(TCD)检测脑动脉血流速度,评估血管痉挛情况。结果 14例受试者均成功完成IVNI,其中7例(50%)受试者在IVNI期间出现短暂的头晕、头面肢体麻木无力或高血压,1例患者在IVNI后即刻的DSA中发现脑血管痉挛。IVNI后平均动脉压、心率和呼吸节律与基线相比均出现显著变化,但均在正常范围。IVNI后TCD检查发现基底动脉血流速度减慢,但未发现神经功能缺损和意识程度改变。结论 经椎动脉灌冲常温生理盐水安全可行,有望成为后循环缺血性脑卒中患者超早期神经保护的新方法。

430例新生儿溶血病实验室检测结果分析与报告

目的通过分析重庆地区430例新生儿溶血病实验室检测结果,了解不同母婴血型组合HDN检出率差异;不同日龄患儿ABO-HDN检出率差异;ABO-HDN直抗试验、游离试验和释放试验阳性率差异;母亲抗-A(B)效价与ABO-HDN检出率的相关性;O型产妇抗AB检测率。方法采用盐水法检测ABO血型,直抗试验采用改良直抗法,游离和释放试验及母亲抗-A(B)效价均采用微柱凝胶法检测。结果不同母婴血型组合HDN检出率存在差异,按母婴O-A组、O-B组、其他母婴ABO不容组、母婴ABO相容组依次递减;在ABO-HDN中,日龄≤7 d组检出率高于日龄>7 d组;ABO-HDN直抗、游离、释放试验阳性率分别为43.01%,75.27%,86.79%,差异有统计学意义;母亲抗-A(B)效价≥64组HDN检出率高于效价<64组,但效价<64仍有发生HDN风险;O型产妇抗-AB检出率为52.10%。结论 ABO-HDN占HDN绝大多数;在ABO-HDN中,母婴为O-A组合发病率最高,日龄≤7 d组检出率高于日龄>7d组,母亲抗-A(B)效价与ABO-HDN发病风险相关,释放试验最敏感,O型产妇抗-AB检出率为52.10%。

重庆汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多态性研究

目的分析重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨基因分型水平上多态性及分布特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)基因分型以及基因序列分型(SBT)技术,对重庆地区2 067例无关供者的HLA-A、B、DRB1位点上的等位基因进行高分辨分型,直接计数法计算等位基因频率,应用Arlerquin3.1软件进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果共检出了168种HLA高分辨等位基因。其中HLA-A位点42种,频率大于0.05有A*11:01,A*24:02,A*02:07,A*02:01,A*33:03;HLA-B位点81种,频率大于0.05有B*46:01,B*40:01,B*58:01,B*13:01,B*15:02;HLA-DR位点45种,频率大于0.05有DRB1*09:01,DRB1*15:01,DRB1*12:02,DRB1*08:03,DRB1*11:01。结论获得了重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率数据,为人类学、法医学、移植配型及疾病相关性等研究提供可靠的参考数据。

1例抗-E所致溶血性输血反应的启示

E抗原是Rh血型系统的重要抗原，相对免疫原性强。抗-E已逐渐取代抗-D成为临床最主要不规则抗体[1]，笔者拟报道1例抗E所致的溶血性输血反应。1．1一般资料患者，杨某某，女，84岁，有生育史和输血史，因呼吸道感染于2012年4月初到重庆某区医院就诊，为纠正贫血，4月7日输注悬浮红2单位，4月11日出现发热、黄疸、血红蛋白降低，疑是迟发性溶血性输血反应。

临床用血季节性特征分析及未来用血趋势预测

目的分析本地区2011—2016年临床用血情况,了解红细胞、血浆、冷沉淀和血小板的季节性用血特征,通过建立模型对未来用血趋势进行预测。方法采用回顾性研究方法,收集2011—2016年本地区12家具有代表性的医院临床用血资料,分析季节性特征,并利用指数平滑法模型预测2017年1—6月份的临床血液需求量。结果各个血液成分在4个季度的临床用血量均较平稳,差异没有统计学意义。采用的指数平滑法模型很好地预测了临床血液需求量,2017年1—6月份的预测值与实际值基本一致,实际值在预测值95%的置信区间内,相对误差在10%以内。结论临床各成分用血趋势可予以科学预测,应在不断收集数据的基础上及时采用科学方法进行预测,根据预测结果安排好采供血计划,从而满足临床用血需求。

重庆地区无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的特征

目的了解重庆地区无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)情况,分析其血清学和病毒学特征。方法应用酶联免疫法(筛查HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV)及核酸检测(nucleic acid testing,NAT)法(筛查HBV、HCV、HIV)筛查重庆地区93 625份初筛合格的无偿献血者血液标本。对其中HBs Ag(-)但HBV DNA(﹢)的标本进行抗-HBs、抗-HBc、HBe Ag、抗-HBe 4项血清学标志物测定,进一步对抗-HBc(﹢)标本做病毒载量测定以及基因分型。结果 93 625份标本中HBs Ag(-)但HBV DNA(﹢)的检出率为0.097%(91/93 625)。91份阳性标本中79份为抗-HBc(﹢),检出率为0.084%(79/93 625)。该部分标本阳性者被视为OBI献血者。OBI献血者的血清学特征可以分为4种模式:单抗-HBc(﹢)、抗-HBc(﹢)/抗-HBs(﹢)、抗-HBc(﹢)/抗-HBe(﹢)以及抗-HBc(﹢)/抗-HBs(﹢)/抗-HBe(﹢)。病毒载量为0~1056.8IU/ml(中位数为108.6 IU/ml),基因型以B型为主。结论重庆地区无偿献血者中OBI检出率较高,其血清学和病毒学特征具有地区性。NAT能提高OBI检出的灵敏度,但也存在一定的假阳性,对血液安全具有重要影响。

430例新生儿溶血病实验室检测结果分析与报告

目的通过分析重庆地区430例新生儿溶血病实验室检测结果,了解不同母婴血型组合HDN检出率差异;不同日龄患儿ABO HDN检出率差异;直抗试验、游离试验和释放试验在ABO HDN阳性率差异;母亲抗-A(B)效价与ABO HDN检出率的相关性;O型妇女抗-AB检测率。方法采用试管盐水法检测ABO血型,直抗试验采用改良直抗法,游离试验、释放试验及母亲抗-A(B)效价均采用抗球蛋白卡进行检测。结果不同母婴血型组合HDN检出率存在差异,母婴为O-A组合最高,其次为O-B组合,再次为其他母婴ABO不合,检出率最低的是非ABO-HDN;7d以内的患儿ABO-HDN检出率高于7d以后的患儿;

不规则抗体鉴定的概率水平分析

目的分析不同情况下不规则抗体鉴定的概率水平。方法采用四格表资料的Fisher确切概率法，结合表格，显示不同情况不规则抗体鉴定概率水平。结果以10个／套谱细胞为例：1）当谱细胞中仅有1个抗原阳性／阴性细胞，即使血清与谱细胞反应和格局表完全一致，也达不到95％的概率水平，报告抗体特异性需慎重；而其他抗原阳性细胞数情况下，血清与谱细胞反应和格局表一致时，均可达到95％的概率水平；2）如血清量不足，只能挑选“半套”谱细胞鉴定抗体，反应细胞总数至少应达到6个（3阳／3阴）或7个（2阳／5阴或2阴／5阳或3阳／4阴或3阴／4阳），方可达到95％的概率水平；3）如抗原抗体反应存在剂量效应，当抗原阳性细胞总数为4～7个时，可允许1个细胞呈假阴性反应。结论掌握不规则抗体鉴定概率水平计算方法，了解不同情况下不规则抗体鉴定的概率，才能在报告抗体特异性时减少因巧合因素所致的错误，保障安全输血。

HLA-A新等位基因A^＊01：01：51的DNA序列分析

目的分析HLA-A*01∶01∶51新等位基因的序列。方法应用SBT基因分型技术,通过位点特异性PCR扩增和组特异性PCR扩增,对扩增产物进行HLA-A基因的第2、3、4外显子双向测序,将测序结果与数据库进行比对,确认突变的位置。结果组特异性引物扩增结果显示A位点有2个等位基因,其中1个为A*02∶07∶01,另1个为新等位基因。经BLAST分析,新等位基因与HLA-A*01∶01∶01∶01序列仅在第4外显子上有1个碱基不同,即第762位C→T,254位氨基酸CTC→CTT,氨基酸没有改变,仍为亮氨酸。新等位基因序列已递交Genebank(JX629459)。结论该HLA-A新等位基因于2012年9月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为A*01∶01∶51。

不规则抗体鉴定的概率水平分析

目的通过统计分析,介绍在不同情况不规则抗体鉴定的概率水平,分析如何才能使抗体鉴定达到《全国临床操作规程》(第三版)要求的95%概率水平。方法采用四格表资料的Fisher确切概率法进行概率计算,结合表格,显示不同情况不规则抗体鉴定的概率水平。结果以谱细胞总数10个/套为例:1)当谱细胞中仅有1个抗原阳性的细胞,即使不规则抗体鉴定的反应格局与谱细胞格局完全一致,也不能达到95%的概率水平,此时,为达到要求的概率水平,需要将反应的细胞总数提高至20个,通常可以结合另外1套谱细胞的反应情况来进行抗体鉴定;

WARM试剂在温性自身免疫性溶血性贫血中的应用

目的研究WARM试剂在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者中的应用,提高对需要输血的AIHA患者标本快速的处理能力。方法用WARM试剂放散患者红细胞后进行自身吸收,通过对放散液、未处理血清和吸收后血清进行抗体筛查与鉴定及放散后的红细胞直接抗人球蛋白试验(DAT)实验,了解WARM试剂吸收和去除自身抗体的效果。结果该患者放散后的红细胞DAT为±;放散液中未检出抗体特异性;经过自身吸收后的患者血清中检出有意义的IgG抗S抗体。结论 WARM试剂对于温自身抗体的放散及放散后红细胞对自身抗体的吸收效果好,可用于AIHA患者自身抗体的处理。

中医药在细胞凋亡中的作用以及对输血治疗的影响

中医药经过长期的实践形成了治疗慢性血液肿瘤的中医理论,其作用机制复杂,而诱导肿瘤细胞凋亡是其重要机制之一。随着实验及临床研究的进一步丰富,有关中医药诱导血液肿瘤细胞凋亡的研究已达到分子水平。本文对中医药治疗慢性血液肿瘤干预细胞凋亡的研究以及对输血治疗的影响作一简要综述。

隐匿性HBV感染无偿献血人群KIR基因多态性的特征分析

目的探讨无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)献血者的KIR基因多态性及其特征分析。方法筛选2016年6月-2019年6月重庆市血液中心无偿献血人群中OBI献血者105例,采集外周血样提取DNA并作KIR基因分型;通过与国际等位基因网站公布的KIR基因型数据库对照分析,判断KIR基因型ID及单体型,计算基因表型频率(某种基因出现例数/总例数)、基因型频率(某中基因型出现例数/总例数)和基因频率(F)=√1-基因表型频率)。计数资料组间比较采用χ^2检验。结果105例OBI献血者均含有的KIR基因有2DL4、3DL2、3DL3和假基因3DP1;F>70%的KIR基因有2DL1、2DL3、3DL1、2DS4和假基因2DP1,其中KIR 2DS4第5外显子存在缺失的F为26.32%。F<30%的基因有2DL2、2DL5、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、3DS1。OBI献血人群分别与重庆汉族、河北汉族、江苏汉族和拉萨藏族比较,KIR 2DL3基因频率均降低(χ^2分别为9.598、12.236、13.719、10.974,P值均<0.05);OBI献血人群2DL2、2DL5、2DS2、2DS3与乌市维族比较差异均有统计学意义(χ2值分别为16.215、6.981、19.498、11.819,P值均<0.05);OBI献血人群2DL2、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4与高加索人比较差异均有统计学意义(χ^2分别为22.477、3.877、34.937、6.909、4.271,P值均<0.05);OBI献血人群与重庆汉族相比,KIR 2DS4*del频率升高(χ^2=12.911,P<0.05)。OBI献血人群与长期慢性HBV感染组相比,2DS2、2DS3频率降低(χ^2分别为13.005、8.289,P值均<0.05),但2DS4、3DL1频率升高(χ^2分别10.032、3.865,P值均<0.05);OBI献血人群与强直性脊柱炎组相比,2DL3、2DS3基因频率降低(χ^2分别为7.851、16.504,P值均<0.05);OBI献血人群与男男同性恋HIV-AIDS组相比,2DS4、3DL1基因频率升高(χ^2分别为15.491、4.475,P<0.05);OBI献血人群与散发性急性戊型肝炎组相比,2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DL5、2DS4、3DL2、3DL3、2DP1差异均有统计学意义(χ2分别为4.448、30.934、17.942、15.638、4.227、13.802、32.667、35.653、36.566,P值均<0.05)。共发现21种KIR基因型,其中基因型AA1(49.52%)最为常见,其次为BX2(18.1%)。结论OBI献血人群的KIR基因多态性具有自身特征,KIR 2DL3是OBI的潜在保护基因,KIR 2DS4*del则是OBI的潜在易感基因。

疑难交叉配血原因的分析与检测策略

目的探索解决疑难交叉配血的检测策略以保证临床输血的安全、有效。方法对交叉配血不合的115例血液标本进行血型检测、直接及间接抗人球蛋白实验。对血型正、反定型不符的标本结合患者的年龄、病史进行血型的进一步检测;对血型正、反定型相符的标本根据直接和间接抗人球蛋白实验的结果进行下一步的分析检测。结果 115例交叉配血不合的标本中血型正、反定型不符30例(26.09%);检出不规则抗体50例(43.48%);检出直接和(或)间接抗人球蛋白实验呈阳性35例。结论根据交叉配血不合的原因,制订适宜的检测策略,可确保临床输血的安全、有效。

HLJ1在肝癌细胞系中的表达及其对肝癌SK-Hep1细胞生物学行为的影响

目的:研究人肝脏DnaJ-like蛋白(human liver Dna J-like protein,HLJ1)在肝癌细胞中的表达,探讨HLJ1对肝癌细胞SK-Hep1生物学行为的影响。方法:首先,qRT-PCR和Western blot检测HLJ1在肝癌细胞中的表达情况。其次,过表达或干扰HLJ1后转染SK-Hep1细胞株,MTS和克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞早期凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示HLJ1的mRNA水平和蛋白水平在3种肝癌细胞系中均呈低表达。MTS和克隆形成结果显示HLJ1能抑制肝癌细胞的增殖。流式细胞术结果显示HLJ1能促进细胞早期凋亡。划痕和Transwell实验显示,HLJ1能抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。结论:HLJ1在肝癌细胞系中低表达,且能抑制SK-Hep1细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

重庆市无偿献血者人细小病毒B19的感染状况研究

目的了解重庆市无偿献血者中人细小病毒B19感染状况,评估B19病毒的流行病学情况,为本市乃至中国未来制订实施更为科学合理的输血安全策略提供基础数据。方法用ELISA对无偿献血者血液进行B19IgM和IgG抗体筛查。结果1 104份无偿献血者血液样本中,B19IgM和IgG阳性率分别为5.07%和36.68%(P<0.05)。女性B19IgM抗体阳性率高于男性(P<0.05),而在男性和女性中B19IgG抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各年龄组中B19IgM阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),B19IgG阳性率随着年龄升高而升高(P<0.05)。不同血型人群比较、不同季节献血者B19IgM和IgG阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HIV阳性样本与阴性样本中B19IgM、B19IgG阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论重庆市献血者中,仍有少部分人群感染B19病毒,在尚未开展B19病毒筛查的情况下,存有输血传播该病毒的风险。

血小板抗体筛查及交叉配型的临床应用

目的对成都市2019年血小板抗体筛查及交叉配型情况进行分析,进一步完善血小板配型相关检测策略以提升临床输注疗效。方法选择中心2019年进行血小板配型的患者为研究对象,采用固相凝集法进行血小板抗体筛查及交叉配型检测,分析检测量、抗筛阳性率、年龄分布、血型占比、季节性变化、医疗机构送检情况、反复配型比例及输注效果。结果 85例患者配型259例次,提供配型血小板321个治疗量,抗筛阳性率87.06%,40岁以上患者占64.71%,配型例次血型占比O型>A型>B型>AB型,各季度配型量逐步增加,送检医院均为三级以上医疗机构,52.94%的患者进行至少两次以上配型,配型血小板输注有效率为63.64%。结论对患者进行血小板抗体筛查及交叉配型,有利于提高血小板输注疗效,避免血小板资源的浪费,应积极推广该项检测的临床应用。