siRNA沉默人乳腺癌细胞株CXCR4基因的实验研究

目的探讨shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435 s细胞CXCR4基因表达及蛋白表达的影响。方法通过shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR、W estern b lotting检测3株人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435 s的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达。结果shRNA-CXCR4作用于人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435 s后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。结论shRNA-CXCR4能特异性抑制乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达。

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭力的影响

目的研究重组质粒shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭潜力的影响。方法通过构建重组质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,运用RT-PCR,Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达;建立体外侵袭模型,测定人乳腺癌细胞株穿透Matrigel的潜力。结果质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05);3株人乳腺癌细胞穿透Matrigel的能力明显降低(P<0.05)。结论shRNA-CXCR4后能明显降低人乳腺癌细胞的侵袭潜力。

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨趋化因子受体CXCR4在人乳腺癌中的表达及其与乳腺癌预后相关因素的关系。方法收集2004年9月-2006年1月手术切除的乳腺癌标本44例,采用RT-PCR检测CXCR4mRNA的表达,Western blotting检测CXCR4蛋白的表达,免疫组化检测CXCR4、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人类表皮生长因子受体2(HER2,又称C-erbB-2)的表达,并观察相应的临床病理指标如年龄、月经状况、淋巴结转移数目、肿瘤大小、组织学分级等。结果免疫组化显示CXCR4主要在胞质表达,很少在细胞核表达。44例乳腺癌标本中均有不同程度的CXCR4mRNA及蛋白表达,且其表达水平随腋窝淋巴结转移增多而增高(P<0.05)。与腋窝淋巴结转移阴性者比较,腋窝淋巴结转移≥4个及1～3个者CXCR4mRNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。C-erbB-2(/)组与C-erbB-2(-/+)组比较,CXCR4mRNA及蛋白表达水平亦显著增高(P<0.05)。CXCR4mRNA及蛋白表达水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、ER、PR无相关性(P>0.05)。结论CXCR4可能对促进乳腺癌转移有重要作用。

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞增殖活性的影响

背景与目的:CXCR4是趋化细胞因子SDF-1(基质细胞衍生因子-1)的受体。CXCR4/SDF-1轴在肿瘤侵袭,转移中具有重要作用。阻断CXCR4/SDF-1轴,有可能成为一个新的肿瘤治疗标靶。本研究拟探讨shR-NA-CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞增殖活性的影响。方法:通过质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR,Westernblot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达;MTT,流式细胞仪检测它们的增殖。结果:质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA(MDA-MB-231:实验组CXCR4/GAPDH为0.152,空白组和阴性对照组分别为0.40及0.45,MDA-MB-435s:实验组为0.198,空白对照组和阴性对照组分别为0.690及0.775,MCF-7:实验组为0.089,空白对照组和阴性对照组分别为0.327及0.313)及蛋白表达水平(MDA-MB-231:实验组CXCR4/β-actin为0.153,空白组和阴性对照组分别为0.829及0.878,MDA-MB-435s:实验组为0.173,空白对照组和阴性对照组分别为0.877及0.906,MCF-7:实验组为0.177,空白对照组和阴性对照组分别为0.911及0.874)(P<0.05);MTT显示能明显抑制3株人乳腺癌细胞的增殖(P<0.05);流式细胞仪显示3株人乳腺癌细胞S期细胞数量明显减少(P<0.05),将更多的细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05)。结论:shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞生长和增殖。可能是治疗乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对乳腺癌血管生成潜力的影响

目的研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞株诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法通过质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR、Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达;应用人乳腺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平;对乳腺癌细胞诱导的人脐静脉血管内皮细胞HUVEC形成管腔样结构的能力有显著的抑制作用(P<0.05)。结论shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞诱导管腔形成能力。