广西凡纳滨对虾源创伤弧菌耐药基因检测

该试验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源创伤弧菌中耐药基因ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM的携带情况。结果表明,27株创伤弧菌中,ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM基因的检出率分别为0%(0/27)、0%(0/27)、55.6%(15/27)、70.4%(19/27)、81.5%(22/27)和51.9%(14/27);共包含7种耐药基因型,其中优势耐药基因型为ant(3”)-I^(-)aac(3)-II^(-)sul1^(+)tet(A)^(+)tet(C)^(+)TEM^(+)。

黄芪多糖对黄喉拟水龟生长性能、血清生化指标及肠道菌群结构的影响

【目的】探究饲料中添加不同水平的黄芪多糖对黄喉拟水龟(Mauremys mutica)生长性能、血清生化指标和肠道菌群结构的影响,以期为黄芪多糖在黄喉拟水龟饲料中的应用及黄喉拟水龟的健康养殖提供理论依据。【方法】将初始平均体重为128.36±1.80g的黄喉拟水龟随机分为5组,分别投喂黄芪多糖含量为0(M0,对照组)、0.25%(M25)、0.50%(M50)、0.75%(M75)和1.00%(M100)的等氮等脂饲料,每组设3个重复,每重复10只龟,投喂60 d后测定其生长性能指标和血清生化指标,以高通量测序分析肠道菌群结构。【结果】生长性能分析结果显示,M25、M50和M75组的黄喉拟水龟的增重率和特定生长率显著高于M0组(P<0.05,下同),饲料系数显著低于M0组,其中M50组的增重率和特定生长率最高、饲料系数最低。M25、M50、M75和M100组黄喉拟水龟背甲长、背甲宽和背甲高的日增长与M0组比较均无显著差异(P>0.05,下同)。血清生化指标检测结果显示,M25、M50和M75组的碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性显著高于M0组,M50、M75和M100组的过氧化氢酶活性显著高于M0组;M25、M50和M75组的丙二醛含量显著降低。肠道菌群分析结果显示,M25组群落丰富度指数(Sobs指数和ACE指数)显著高于M0组,群落多样性指数(Shannon指数和Simpson指数)与M0组无显著差异。M50、M75和M100组的Sobs指数、Chao1指数、ACE指数、Shannon指数和Simpson指数与M0组差异均不显著。在门分类水平上,各组丰度占比排名前3的菌群均为厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门,0.25%~1.00%的黄芪多糖对门分类水平的肠道菌群组成无显著影响。在属分类水平上,M50组的瘤胃球菌属1和M75组的汉氏盐单胞菌属相对丰度显著提高;添加0.25%和1.00%的黄芪多糖对属分类水平的肠道菌群组成均无显著影响。【结论】饲料中添加适量的黄芪多糖能有效地促进黄喉拟水龟生长、提高抗氧化能力并改善肠道菌群结构。综合分析,建议饲料中黄芪多糖添加量为0.50%。

金龟子绿僵菌CQMa421对禾花鲤的急性毒性试验

禾花鲤,别称乌鲤、禾花鱼、禾花乌鲤,属鲤科温水性鱼类,鱼体为紫褐色半透明状,因其长期放养在稻田中、食用水稻落花而得名,是广西地方特色的土著品种。禾花鲤肉质细腻鲜美、无腥味、肌间刺少,生长速度快、食性较杂、繁殖力和抗病力强。近年来,广西渔业部门大力推广稻渔生态综合种养模式.

黄喉拟水龟Cathelicidin基因克隆及表达分析

【目的】克隆黄喉拟水龟(Mauremys mutica)Cathelicidin基因(MmCath)并分析其组织表达特征,为深入研究MmCath基因在黄喉拟水龟先天免疫中的潜在作用提供理论依据。【方法】运用RACE克隆黄喉拟水龟MmCath基因cDNA序列,利用生物信息学软件进行序列特征分析,并通过实时荧光定量PCR检测MmCath基因在黄喉拟水龟不同组织中的表达特征及细菌攻毒后的表达情况。【结果】MmCath基因cDNA序列全长777 bp,包括63 bp的5’非编码区、483 bp的开放阅读框(ORF)和231 bp的3’非编码区。MmCath基因编码160个氨基酸残基,包括N端的信号肽区,含有4个保守半胱氨酸(Cys)残基的Cathelin肽区和C端的成熟肽区,符合Cathelicidins蛋白家族典型特征。MmCath前体蛋白相对分子质量为17.74 k D,理论等电点(p I)为5.27,其二级结构中α-螺旋占31.25%,无规则卷曲占20.63%,β-折叠占48.12%。黄喉拟水龟MmCath前体蛋白氨基酸序列与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)Cathelicidin氨基酸序列的相似性最高,达80.63%,亲缘关系最近。MmCath基因在黄喉拟水龟的表达具有组织差异性,以脾脏和肝脏中的相对表达量较高,在表皮、心脏、肾脏、肺脏、脑、肠道和肌肉等组织中的相对表达量较低;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后MmCath基因表达上调,在攻毒后第3和第6 h其相对表达量极显著高于攻毒前(0 h)的相对表达量(P<0.01,下同),之后有所下降,在攻毒后第36 h再极显著上升,随后下降。【结论】从黄喉拟水龟中克隆的MmCath基因属于Cathelicidins基因家族,参与了黄喉拟水龟抗病原感染过程,可为有效控制黄喉拟水龟细菌性疾病提供新思路。

广西凡纳滨对虾源弧菌整合子相关基因检测

本实验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源弧菌中整合子相关基因携带情况,为凡纳滨对虾弧菌病的综合防控提供指导。共采集溶藻弧菌7株,创伤弧菌10株,副溶血弧菌10株。PCR检测结果,27株弧菌中int1、sul1、qacEΔ1、int2和int3基因的检出率依次为63.0%、40.7%、48.1%、0%和0%。受试菌株共包含5种整合子相关基因型,即int1−sul1−qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1−qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1+qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1+qacEΔ1+int2−int3−和int1+sul1−qacEΔ1+int2−int3−,其中优势基因型为int1−sul1−qacEΔ1−int2−int3−和int1+sul1+qacEΔ1+int2−int3−,各占37.0% (10/27)。在溶藻弧菌、创伤弧菌和副溶血弧菌的检出率:int1基因分别为28.6% (2/7)、90.0% (9/10)和60.0% (6/10);sul1基因分别为0% (0/7)、90.0% (9/10)和20.0% (2/10);qacEΔ1基因分别为14.3% (1/7)、90.0% (9/10)和30.0% (3/10)。int1、sul1和qacEΔ1基因在三种弧菌之间的检出率差异显著(P<0.05),在创伤弧菌中的检出率最高,在溶藻弧菌中的检出率最低。

金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的急性毒性试验

台湾泥鳅是稻鱼综合种养中常见的养鱼品种。为确定真菌杀虫剂金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的安全浓度,本研究进行金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的急性毒性试验。结果表明,金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的24 h半致死浓度(LC_(50))为93.79 mg/L,48、72 h和96 h的半致死浓度均为86.24 mg/L,金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的毒性可评价为低毒;安全浓度为21.87 mg/L,该安全浓度远高于金龟子绿僵菌CQMa421在水稻上施用的有效杀虫用量。本研究结果初步确定金龟子绿僵菌CQMa421在稻鳅综合种养中可以作为水稻生产的杀虫剂安全使用。

黄沙鳖β-防御素Hs-BD1的原核表达及抗菌活性检测

【目的】构建黄沙鳖β-防御素1(Hs-BD1)原核表达并分析其抗菌活性,为深入分析Hs-BD1的生理功能及开发新型黄沙鳖抗菌药物提供理论依据。【方法】构建Hs-BD1成熟肽序列的重组表达载体pCold-TF-Hs-BD1,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白rHs-BD1表达,以十二硫酸酯钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)检测重组蛋白rHs-BD1的表达情况。采用Ni柱亲和层析法对重组蛋白rHs-BD1进行纯化,分析其对几种革兰氏阳性和阴性菌的抑菌活性、溶血性和抗氧化能力。【结果】SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白rHs-BD1在电泳凝胶约58.1 kDa处出现特异性条带,其分子量大小与预测值相符。经Western blotting检测,重组蛋白rHs-BD1可与Anti-6×His Tag抗体发生特异性反应,表明Hs-BD1基因在原核表达系统成功表达,经纯化的重组蛋白rHs-BD1含量为400.0μg/mL。对已纯化的重组蛋白rHs-BD1进行体外抗菌活性检测,结果显示其对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) HPG1和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)HPN1的最小抑菌浓度(MIC)为40.00μg/mL,对大肠杆菌(Escherichia coli)YLG1、类志贺邻单胞菌(Plesiomons shigelloides)DAL1和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)FCH1的MIC为20.00μg/mL,表明重组蛋白rHs-BD1对一些革兰氏阳性和阴性菌具有较强的抗菌活性。20.0、40.0、60.0和80.0μg/mL重组蛋白rHs-BD1对新鲜黄沙鳖血细胞的溶血率分别为1.5%、2.7%、3.3%和4.2%,20.0、40.0、80.0和120.0μg/mL重组蛋白rHs-BD1对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基的清除率分别为2.6%、5.2%、11.6%和17.0%。【结论】经原核表达获得的Hs-BD1重组蛋白rHs-BD1具有一定的广谱抗菌活性和抗氧化能力,且溶血作用较弱,对黄沙鳖机体毒副作用较低,可用于新型黄沙鳖抗菌药物开发。

黄沙鳖β-防御素基因家族的鉴定及生物信息学分析

β-防御素是一种富含半胱氨酸的小分子阳离子抗菌肽,在生物机体天然免疫中发挥重要的作用。本研究基于黄沙鳖转录组数据库和PCR验证鉴定了黄沙鳖β-防御素基因(Hs-BDs)家族,并对其进行蛋白理化性质、蛋白结构和进化关系等生物信息学分析。实验结果表明,共鉴定出18个具有完整蛋白编码区的Hs-BDs家族成员,这些Hs-BDs编码蛋白的氨基酸残基数量在59~94之间,蛋白分子量介于6759.13~10731.32 Da,等电点在8.82~10.45之间。系统进化树分析可将18个Hs-BDs家族成员分为4个亚类(Class I~IV)。随机选择部分Hs-BDs进行蛋白结构分析,这些Hs-BDs前体蛋白二级结构主要由α-螺旋、β-折叠片和无规则卷曲3种结构组成;成熟蛋白三级结构预测结果显示6个保守的半胱氨酸残基分别以Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6的方式连接形成3个分子内二硫键。本文结果可为进一步研究黄沙鳖β-防御素基因家族的详细功能以及抗菌肽的研发提供基础数据。