内生真菌对油樟悬浮细胞培养的影响

该文研究了内生真菌YG42、YG71、YY11和YY26发酵液,对油樟悬浮细胞的生长量及挥发性代谢产物积累量的影响。结果表明:4种内生真菌对油樟悬浮细胞的生长均有抑制作用,抑制强度随发酵液添加量的增加而加强。4种内生真菌对油樟悬浮细胞挥发性代谢产物积累总量及1,8-桉叶油素、γ-叶松油烯和α-油松油醇3种油樟油组分物质积累量的影响多表现为低浓度促进高浓度抑制的趋势。其中,1%添加量的YG42和YY26及0.25%添加量的YY11对悬浮细胞总挥发性代谢产物积累的促进作用相当且最强,其积累量分别是空白组的2.00、1.95、2.01倍;0.25%添加量的YG71对1,8-桉叶油素积累的促进作用最强,其积累量为空白组的11.03倍;0.25%添加量的YG71和YY26对α-松油醇积累的促进作用相当且最强,其积累量分别为空白组的1.72和1.81倍;对于γ-松油烯的积累,在空白组中未检测到其峰值,4种真菌诱导子对γ-松油烯的产生有诱导作用,诱导的最大峰面积为0.19,诱导菌是0.25%添加量的YG71。该研究结果为充实内生菌影响香料植物挥发性代谢产物合成理论奠定了基础,也为生产上内生真菌提高油樟油中有用物质组分含量措施的采用提供了依据。

油樟油对油樟内生真菌中活性化合物影响

YY26、YG42和YG71是从油樟中分离得到的三株内生真菌。本研究采用GC-FID、GC-MS技术,以油樟油作为诱导物,研究YY26、YG42、YG71菌株在不同培养基条件下对菌株中活性化合物1,8-桉叶油素、松油烯-4-醇、a-松油醇、r-松油烯产量的影响。结果表明:在PDB培养基中,一方面,油樟油可促进YY26、YG42菌株积累1,8-桉叶油素等物质,其中对1,8-桉叶油素的促进最强,分别提高1.41倍和1.30倍;另一方面,油樟油抑制YG71菌株中以上4种物质的积累。在察氏培养基中,油樟油对YY26、YG42及YG71菌株中4种物质的积累没有明显的促进作用。该研究为植物有用代谢产物的规模化生产提供了理论依据,有较强的实践意义。

不同外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量生长和绿原酸含量的影响

为探索外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生长及其代谢产物绿原酸含量的影响,该研究通过在培养基中添加不同种类和浓度的外源激素,以诱导其愈伤组织的产生及增殖生长,并采用称量法和高效液相色谱法分别检测愈伤组织生物量和绿原酸含量。结果表明:不同外源激素及其组合对愈伤组织生物量和绿原酸含量的积累产生不同的影响;培养基中添加单一外源激素时,对愈伤组织生物量影响最大的为TDZ激素;和对照相比,不同浓度的TDZ均使生物量显著提高,其中0.5 mg·L-1的TDZ使生物量达最大,为0.62 g;对绿原酸积累影响的结果不太一致,除TDZ激素影响最小以外,0.5 mg·L-1的NAA使愈伤组织中的绿原酸含量积累最多,为11.18 mg·g-1;外源激素组合中,含有TDZ激素的组合生物量偏高,但绿原酸含量偏低,这与单一外源激素的结果一致。MS+0.5 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-12,4-D培养基使愈伤组织中绿原酸含量积累较多,为15.53 mg·g-1,且生物量达最高,为0.65 g,因此该激素组合为该研究最适培养基组合。通过筛选适宜的外源激素及其组合能促进灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量的提高和次生代谢产物绿原酸的积累。研究结果对从灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织中获得大量的绿原酸提供了重要依据。

大叶桉叶水浸提液成分分析

为进一步明确大叶桉的化学成分,对大叶桉叶水浸提液分别用不同极性的有机溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,对各萃取相进行GC-MS分析。结果表明:大叶桉叶水浸提液共含有37种化合物,其中,石油醚萃取相中含有20种,主成分为草酸丁基异己酯(37.24%);乙酸乙酯萃取相中含有16种,主成分为2,2-二亚甲基双[6-(1,1-二甲基乙基-4-甲基)]-苯酚(50.05%);正丁醇萃取相中含有5种,主成分为丙基-2-甲基丁酸酯(54.57%)。在所有成分中,酯类物质居多,也有少量的烯、酮、醇、苯和烷烃。1-甲基,4-(1-甲基乙基)-1,4环己二烯、2,2-二亚甲基[6-(1,1-二甲基乙基)-4-甲基]苯酚、1-十八烯和二十烷为石油醚和乙酸乙酯的共有成分;1、2-苯二甲酸单(2-乙基己基)酯为乙酸乙酯和正丁醇的共有成分。该研究进一步明确了大叶桉的化学成分,为其在医药、化工和化感方面的应用研究奠定了基础。

樟属植物叶水浸提液对油樟悬浮细胞培养的影响

以油樟、大叶樟、香樟、天竺桂4种樟属植物叶水浸提液为诱导子,添加到油樟悬浮培养系中,研究诱导子对油樟悬浮培养细胞生长及挥发性物质积累的影响。结果表明,4种樟属植物叶水浸提液对油樟悬浮细胞生长无明显影响。不同樟属植物叶水浸提液对挥发性物质影响不同。对于总的挥发性物质的积累,有促进作用的是天竺桂与香樟叶浸提液,添加量分别是4%和1%时促进作用最强,其峰面积分别为空白对照组的1.78和1.45倍;对1,8-桉叶油素的积累,有促进作用的是天竺桂叶浸提液,添加量为1%时,促进作用最强,其峰面积为空白对照组的1.46倍;对于γ-松油烯的积累,4种叶浸提液均有促进作用,大叶樟、天竺桂和香樟水提液添加量1%时促进作用最强,其峰面积分别0.39、0.27和0.32 p A,油樟水提液添加量4%时促进作用最强,其峰面积为0.27 p A(对照中无);对于α-松油醇的积累,有促进作用的是天竺桂与香樟水提液,添加量为0.25%时促进作用最强,其峰面积分别为空白对照组的1.62和1.24倍。本研究在一定程度上揭示了油樟油成分积累相关促进因子情况,为进一步研究奠定基础。

灰毡毛忍冬新品种‘渝蕾一号’的组织培养研究

目的：建立灰毡毛忍冬新品种‘渝蕾一号’Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.‘Yulei1’组培快繁体系,为实现其工厂化育苗提供理论依据。方法：以‘渝蕾一号’幼嫩茎段和叶片为外植体,以MS为基本培养基,在组织培养的不同阶段添加不同浓度的NAA、6-BA、TDZ、IBA等植物生长调节物质,对愈伤组织的诱导、增殖及分化,茎段腋芽诱导、增殖及生根炼苗进行系统研究。结果：外植体的最佳灭菌时间：茎段为2~3 min,叶片为1~2 min;愈伤组织诱导最佳培养基为MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋6-BA 0.1 mg/L;腋芽诱导最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L;愈伤组织增殖最佳培养基为MS＋TDZ（0.2~1.0）mg/L＋NAA（0.02~0.05）mg/L;愈伤组织分化最佳培养基为MS＋6-BA（0.5~1.0）mg/L＋NAA（0.02~0.05）mg/L;芽增殖最佳培养基为MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA0.5 mg/L;最佳生根培养为1/2MS＋IBA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L。试管苗在珍珠岩和腐殖质（1∶1）基质中炼苗,成活率达75%以上。结论：筛选出了外植体适宜的消毒方法及愈伤组织诱导、增殖、分化及芽增殖、生根的适宜培养基,建立了‘渝蕾一号’组培快繁体系。

不同诱导子对油樟内生菌次生代谢产物的影响

[目的]提高油樟内生菌次生代谢产物的积累。[方法]将不同诱导子(油樟油水浊液、油樟叶水提液和油樟愈伤组织)添加到油樟内生菌(YY26、YG42)的培养体系中,研究其对内生菌生长及其次生代谢产物(1,8-桉叶油素、松油烯-4-醇、α-松油醇)的影响。[结果]从内生菌生长情况来看,油樟愈伤组织对内生菌YY26的生长有明显抑制作用,而对YG42的生长有促进作用;油樟油水浊液对2种内生菌的生长都有一定的抑制作用;油樟叶水提液对2种内生菌的生长均无显著影响。从次生代谢产物积累来看,油樟叶水提液对2种内生菌产1,8-桉叶油素、松油烯-4-醇及α-松油醇具有较强的促进作用,且对1,8-桉叶油素的促进作用最强。当油樟叶水提液浓度为1.00%时,内生菌YY26的1,8-桉叶油素产量最高,比对照组提高了11.80倍;当油樟叶水提液浓度为2.50%时,内生菌YG42中的1,8-桉叶油素产量达到最大值,与对照组相比增加了7.73倍。油樟愈伤组织对总挥发性物质的促进作用最强,当其浓度为10.00%时,对内生菌YY26总挥发性物质的促进作用最强,比对照组提高了13.26倍。[结论]该研究在一定程度上提高了油樟内生菌(YY26、YG42)次生代谢产物的积累量,为其今后的工业化生产奠定了基础。

不同种类无机盐对灰毡毛忍冬“渝蕾1号”悬浮培养体系中细胞生长和绿原酸含量的影响

为提高灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养体系中绿原酸的含量,该研究探讨了B_5培养基中不同浓度的无机盐对灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞生物量及绿原酸含量的影响,通过在悬浮培养体系中添加不同浓度的无机盐,采用重量法测定灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞的生物量及采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量。结果表明:当硝态氮和铵态氮配比与B_5培养基中硝态氮和铵态氮配比一致时,即NO_3^-/NH_4^+摩尔比值为13∶1时,培养体系有利于细胞的生长和绿原酸的积累。当KNO_3浓度为3.5 g·L^(-1)时,细胞生物量达到最大,为19.26 g·L^(-1);当KNO_3在较低浓度(0.5 g·L^(-1)和1.5 g·L^(-1))时,积累较多的绿原酸。NO_3^-的两项研究结果均与对照浓度(2.5g·L^(-1))有一定的差异。另外,对(NH_4)_2SO_4来说,在高于对照浓度0.134 g·L^(-1),即浓度为0.268 g·L^(-1)时,生物量和绿原酸含量都达到了最大。P、Ca、Mg三种矿质元素的研究结果表明,当Na H_2PO_4·2H_2O浓度为0.10 g·L^(-1)、Ca Cl_2的浓度为0.20 g·L^(-1)时,细胞的生长和绿原酸的积累均可达到最大值;而对Mg^(2+)来说,低浓度促进细胞的生长,高浓度促进绿原酸的积累。兼顾细胞生物量和绿原酸含量两个指标,需选择适中的浓度。这些结果均与对照浓度有一定的差异。这说明灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮细胞所需无机盐的浓度与B_5培养基无机盐的浓度有一定的差异,选择适宜的浓度可促进其悬浮细胞的生长及次生代谢产物绿原酸的积累。该研究结果为绿原酸的工业化生产打下了基础。

五种樟属植物叶水浸提液的GC-MS分析

采用GC-MS技术对宜宾地区含有药用价值成分的五种樟属植物水浸提液进行成分分析.结果表明：共检测出76种成分,其中2,2＇-亚甲基双[6-（1,1-双甲基乙基）-4-甲基]苯酚为五种樟属植物共有,含量也较高,是樟属植物的特征性化合物.1,2-苯二羧酸单（2-乙基己基）酯、1-甲基-4-（1-甲基乙基）-1,4-环已二烯和十八烯三种化合物在大部分樟属植物中存在,这三种化合物也可以被看成是樟属植物的特征性化合物.除此之外,检测出的成分中有57种成分分别为某一物种所特有,表明物种的特异性很强.在研究中也发现,顺式-四氢化-2,5-二甲基-呋喃、2,2＇-氧二苯-乙醇及反-四氢化-2,4-二甲基-呋喃三种成分存在于三个物种中,且相对含量较高（85.20%~94.74%）.