广西副猪嗜血杆菌病分子流行病学调查

根据副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)16S rRNA(M75065)序列设计1对引物,对从广西9个市26个地县采集的305份病料进行PCR鉴定。结果表明,305份病料有14份为阳性,阳性率为4.59%,扩增片段大小为822 bp;经Sph I、BamH I双酶切进一步鉴定,可以确定检测到的14份阳性材料均为Hps;将PCR扩增产物连接pMD18-T载体并转化DH5α感受态细胞,然后进行测序及同源性比较分析,发现14份阳性材料之间的核苷酸同源性均在94.5%以上,与国外Hps的核苷酸同源性均在94.3%以上,说明Hps已在广西发生存在。

猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达

根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。

1986--2011年广西猪瘟流行监测及遗传变异分析

采用Nested-PCR方法对采自广西各地1986-2011年间,199个猪场(养殖户)的1 521份样品进行CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、HPS等病原的检测及流行病学调查,结果发现广西猪瘟以混合感染为主,病性复杂。尽管保育猪发病仍占第1位,但近年来母猪繁殖障碍、无症状带毒感染的发病率已明显提高。通过对25年来收集的77株广西CSFV流行株E2基因的比较分析,发现广西猪瘟流行株分为基因I群和II群,目前仍未发现基因III群。起源于欧洲大陆的S2.1亚型毒株已经成为广西的优势流行株,多引起临床的急性和亚急性感染;以SHIMEN株为代表的中国经典毒株S1.1亚型是造成母猪繁殖障碍、隐性带毒感染的主要毒株。流行于20世纪80-90年代间的基因S2.2及S2.3亚型毒株已经基本消失,值得进一步研究。广西CSFV流行株E2蛋白部分关键氨基酸位点已经发生变异,可能会导致疫苗的不完全保护。