HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系。方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度。H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度。结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例。在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著。结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标。HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度。

水疱性口炎病毒对肝癌细胞的选择性感染和溶解作用

目的 :研究水疱性口炎病毒 (VSV)对肝癌细胞感染和溶解的选择性。 方法 :将 VSV分别感染 5种经过或未经过干扰素预处理的肝癌细胞系 (Hep3B、Hep G2、SMMC- 772 1、BBEL- 74 0 2和 BEL- 74 0 4细胞 )、正常传代肝细胞 (L- 0 2细胞 )和正常原代培养肝细胞 ,应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量 ,锥虫蓝染色排除试验检测细胞活力 ,亚甲蓝和伊红染色观察细胞溶解动力学。 结果 :0 .1pfu/细胞的 VSV与上述 5种肝癌细胞、正常传代和正常原代人肝细胞共同培养 18h后 ,各细胞 VSV的产量分别为 1.8× 10 9、1.5× 10 8、8.0× 10 7、5 .6× 10 8、7.7× 10 8、6 .5× 10 7、2 .3× 10 5pfu/ m l;而经 10 0 0 U/ m l干扰素预先处理后 ,上述细胞 VSV的产量分别降至 2 .4× 10 4 、3.8× 10 4 、6 .9× 10 5、4 .2× 10 3、8.3× 10 5、5 .3× 10 4 、<10pfu/ ml。无论是否经干扰素 α- 2 b(10 0 0 U/ m l)预处理 ,除正常原代培养肝细胞外 ,VSV感染后 2 4 h其他细胞被大量溶解。结论 :VSV可迅速感染并溶解肝癌细胞及正常传代肝细胞 ,干扰素虽能完全保护正常原代肝细胞 ,但仅能部分降低 VSV在肝癌细胞和正常传代肝细胞中的增殖和溶细胞速率。说明有干扰素存在时 ,VSV能够选择性地感染和溶解肝癌细胞 。

表达HBV的SMMC-7721人肝癌细胞系模型的建立

目的：建立表达ＨＢＶ的体外培养的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状提供良好的细胞模型。方法：将３．２ｋｂＨＢＶＤＮＡ插入携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，应用磷酸钙沉淀技术将其导入体外培养的ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞系。结果：成功地获得表达ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的细胞克隆。结论：应用磷酸钙沉淀技术将ＨＢＶＤＮＡ导入体外培养的细胞克隆，获得能表达ＨＢＶ的细胞克隆。

TGFβ超家族信息传导机制研究进展

TGFβ超家族由一大类具有共同生物学特性的细胞因子所组成，在机体生长发育、物质代谢等方面均有极为重要的作用。它们与相应受体，特别是与TβRⅠ和TβRⅡ异二聚体复合物的结合而产生系列生物学效应。但其详尽机制尚知之不多。

Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备

目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1206bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功。

HBV基因组转染对小鼠NIH3T3细胞内基质金属蛋白酶组织抑制因子的转录调控作用

目的:阐明乙型肝炎病毒(HBV)基因组转染对基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的转录调控作用。方法:应用磷酸钙转染技术构建表达HBsAg和HBeAg的小鼠NIH3T3细胞克隆,以该细胞为模型,应用原位杂交技术测定细胞内特异性TIMPRNA含量变化。结果:表达HBsAg和HBeAg细胞内TIMP1和TIMP2RNA含量显著升高。结论:HBV基因组转染能显著增强细胞内TIMP的转录,促进TIMP的合成,使金属蛋白酶活性受抑制,导致肝脏细胞基质的降解减少,沉积增多,可能是肝炎后肝硬化发生的机理之一。

血管生成抑制因子与肿瘤转移的抑制

新生血管形成是肿瘤生长和转移的重要环节，是肿瘤细胞进入血液的主要通道，受到血管生成刺激因子和抑制因子（ 如ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ 和ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ） 等物质的调节。血管生成抑制因子通过抑制内皮细胞的生成和迁移而显示出强烈的抗肿瘤作用，其毒性低、不易产生耐药性。

储脂细胞的激活与肝纤维化的发生

储脂细胞的激活与肝纤维化的发生第二军医大学长征医院临床免疫中心谭龙益综述孔宪涛审校肝纤维化是各种慢性肝病后产生的一种共同反应。其主要特征是：细胞外基质异常增生，形成瘢痕。Ⅰ、Ⅲ型胶原［１］、蛋白多糖、纤维结蛋白、透明质酸［２］增多尤为明显，可达正常含...

军团菌不同抗原成分及不同酶标记物对ELISA检测结果的影响

应用嗜肺军团菌可溶性抗原、超声裂解抗原与辣根过氧化物酶标记SPA和IgG,分别建立ELISA法检测血清嗜肺军团菌抗体,其不同方法检测结果在统计学上差异不显著。

血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测在急性肾功能损伤早期诊断中的临床意义

目的探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测在急性肾功能损伤(AKI)早期诊断中的意义。方法收集无慢性肾病的重症监护病房(ICU)、冠心病监护病房(CCU)患者60例,分别在其术前及术后6、12、48 h采集血样,其中27例发生AKI(AKI组),以其余33例未发生AKI(无AKI组)。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清NGAL浓度,碱性苦味酸法检测血清肌酐(SCr)浓度,胶乳增强免疫浊度法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)浓度。以48 h内SCr高于基础水平50%作为AKI的诊断标准,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估NGAL在AKI早期诊断中的效力。结果与术前比较,AKI组术后6、12、48 h的血清NGAL明显升高,Cys C在术后12、48 h明显升高,而SCr在术后48 h才显著升高。无AKI组术前与术后6、12、48 h的NGAL、SCr、Cys C浓度差异无统计学意义(P>0.05)。术后6、12、48 h血清NGAL的ROC曲线下面积为0.51[95%可信区间(CI):0.25～0.78]、0.80(95%CI:0.58～0.95)、0.85(95%CI:0.61～0.99)。结论血清NGAL在术后6 h上升,术后12 h即能较好地预测AKI,其预测AKI时间早于Cys C和SCr。血清NGAL可能在AKI早期诊断中有良好的应用价值。

实时定量PCR监测多发性骨髓瘤患者自体造血干细胞移植后微小残留病

为了探讨应用实时定量PCR方法在监测多发性骨髓瘤患者造血干细胞移植后微小残留病 (minimalresid ualdisease ,MRD)中的作用 ,利用SYBRGreenⅠ荧光染料 ,采用实时定量PCR方法 ,以IgH为标志 ,对 8例多发性骨髓瘤和 1例Waldenstr m巨球蛋白血症患者自体外周血干细胞移植 (autologousperipheralbloodstemcelltrans plantation ,APBSCT)前后的IgH(immunoglobulinheavychain ,IgH)基因重排进行定量分析。结果发现 ,IgH基因重排拷贝数在APBSCT前后分别为 3 10 8± 10 43 ,594± 660 ,两者差异有显著性 (P <0 .0 5) ,与患者骨髓浆细胞比值和外周血M蛋白量成正相关 (r =0 .86,P <0 .0 5) ,并对 1例复发患者进行连续检测 ,结果与临床相符。结论 :实时定量PCR方法对IgH基因重排定量分析 ,可以作为判断多发性骨髓瘤治疗疗效的一种检测方法 。

酶联免疫吸附试验检测人类巨细胞病毒抗体在肝移植患者术后诊断及监测中的应用

目的客观评价传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人巨细胞病毒（HCMV）抗体对肝移植患者术后诊断和监测HCMV感染的意义。方法对108例肝移植术后患者分别用ELISA检测HCMV特异性抗体IgM、用免疫组化法检测HCMV低基质磷酸化蛋白（pp65）抗原血症、用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HCMV DNA，将这3种方法的检测结果进行比较。结果108例患者中，IgM阳性者8例，pp65抗原阳性者10例，DNA阳性者12例。ELISA的敏感性较其他2种方法略低，但3种方法的特异性和阴性预测值之间差异无显著性。此外，ELISA检测HCMV IgM阳性者，其结果均在临床症状出现后6～14d检出，而pp65阳性者和HCMV DNA阳性者均在临床症状出现前被检出。结论应用ELISA检测HCMV抗体可以用于诊断监测HCMV感染情况，但有一定的局限性。

子痫前期孕妇孕早期血清miR-520g表达分析

目的探讨血清微小RNA(miR)-520g在子痫前期(PE)患者孕期的变化及意义。方法分别提取30例PE患者和30名正常妊娠者早、中、晚孕期血清中的循环miR,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测血清中的miR-520g的表达量,比较两组间不同孕期miR-520g的差异。结果正常妊娠组随孕程进展血清miR-520g的表达量增加;与正常妊娠组相比,PE组孕早期miR-520g显著增加,PE组孕中、晚期的血清miR-520g表达量与正常妊娠组差异无统计学意义。结论孕早期血清miR-520g可能是PE预测的良好标志物。

乙型肝炎患者血清HBsAg水平与HBV DNA及肝功能指标的关系

目的探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平与乙型肝炎病毒(HBV)DNA及肝功能指标的关系。方法选取536例血清HBeAg阳性的乙型肝炎患者,采用化学发光微粒子免疫检测法测定HBV血清标志物,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定HBV DNA水平,根据HBV DNA水平将患者分为3组,A组(<1×103 copy/mL)、B组(1×103~1×105)copy/mL、C组(>1×105 copy/mL),贝克曼AU5421全自动生化分析仪连续检测法检测肝功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、AST/ALT、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)],对结果进行统计学分析。结果每组比较分析后发现,大部分肝功能指标有显著性差异,尤其是AST、ALT。B组和C组的ALT、AST相对于A组明显升高(P<0.01),B组ALT、AST水平高于C组(P<0.01)。536例乙型肝炎患者中HBV DNA阳性检出率为72.9%,"大三阳"和HBsAg、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎e抗体、乙型肝炎核心抗体4项阳性的血清学模式的HBV DNA阳性率分别为80.9%和84.4%,阳性率较高,说明患者体内的HBV处于高复制状态。结论 HBV DNA水平与肝功能损伤无明显相关性,患者应定期检测HBV DNA的水平,清除病毒的复制情况,及早采取治疗措施。

组织和血清TGFβ_1水平升高与胃癌侵袭性增强的相互关系

目的：本文通过检测20例胃癌病人的组织TGFβ1mRNA水平和血清TGFβ1浓度．旨在探讨TGFβ1与胃癌浸润和转移是否相关。方法：应用酶联免疫吸附法测定胃癌病人血清转化生长因子（TGF）β1浓度；应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的TGFβ1mRNA水平。结果：胃癌原发灶组的TGFβ1mRNA灰度均值明显高于癌旁对照组（P＜0．001），浸润组或伴有淋巴结转移组分别明显高于膨胀组或无淋巴结转移组（P＜005）；血清TGFβ1浓度变化与组织TCFβ1mRNA表达具有明显的正相关性（r＝0792，P＜005）结论：TGF6可能与胃癌的浸润和转移密切相关。

孟鲁司特联合布地奈德治疗过敏性鼻炎的疗效及其对患者tIgE与sIgE的影响

目的研究孟鲁司特联合布地奈德治疗过敏性鼻炎的临床疗效和对患者tIgE与sIgE的影响。方法选取我院2011年7月到2015年5月间呼吸科及耳鼻喉科收治的160例过敏性鼻炎患者;随机分为观察组80例和对照组80例,观察组给予孟鲁司特联合布地奈德进行治疗,对照组单纯给予布地奈德进行治疗。比较两组患者治疗前后临床症状评分,同事对比两组治疗前后血清总免疫球蛋白E(TIg E)和特异性免疫球蛋白E(SIg E)浓度。结果观察组和对照组治疗前症状评分分别为11.21±3.46分、11.22±3.29分,治疗后观察组和对照组临床症状评分分别为1.96±0.79分、3.96±0.93分。两组间治疗前症状评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后均明显下降,而观察组下降更加明显,差异其有统计学意义(t=3.23,P<0.05)。观察组和对照组治疗前TIg E、SIg E水平分别为469.25±36.92k U/L、486.32±32.26k U/L、29.96±16.92k U/L、29.42±17.26 k U/L,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后分别为249.35±27.13KU/L、362.28±35.18k U/L、12.35±7.13k U/L、14.28±6.18k U/L,两组间治疗后差异有统计学意义(P<0.05)。结论孟鲁司特联合布地奈德能够明显减轻过敏性鼻炎患者气道炎症反应,同时降低由Ig E介导的I型变态气道反应炎症,降低血清总免疫球蛋白E(TIg E)和特异性免疫球蛋白E(SIg E)浓度,是一种高效的治疗方法,值得在临床中推广使用。

丙型肝炎病毒感染实验室诊断研究进展

历经三代免疫酶测定试剂盒和二代免疫重组印迹试剂盒的更新，以及RT-PCR，定量PCR，分枝DNA技术和基因型鉴定技术的推广，为HCV感染的诊断和减少输血后肝炎的发生提供了有用的工具。

尿液肾损伤分子-1检测在妊娠中期预测子痫前期肾损伤的价值

目的探讨尿液肾损伤分子-1(KIM-1)在妊娠中期预测子痫前期患者肾损伤中的价值。方法收集45例子痫前期患者和45名正常妊娠妇女的一般临床资料及妊娠中期(孕26~32周)的血、尿样本。采用酶联免疫吸附试验检测尿液KIM-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL),采用免疫透射比浊法检测尿液微量白蛋白(mAlb),采用碱性苦味酸法检测血清及尿液肌酐(Cr),采用酶法检测血清尿酸(UA)、尿素。采用Logistic回归分析评估子痫前期的独立危险因素。结果子痫前期组与正常妊娠组之间孕妇年龄、样本收集时的孕周、初产妇比例及尿液mAlb、尿液NGAL、血清Cr、血清尿素水平差异均无统计学意义(P>0.05),子痫前期组孕前体重指数(BMI)及尿液KIM-1、血清UA水平明显高于正常妊娠组(P<0.05)。采用尿液Cr对尿液KIM-1、mAlb和NGAL水平进行标准化处理,子痫前期组尿液KIM-1/Cr明显高于正常妊娠组(P<0.01),而2个组之间尿液mAlb/Cr和NGAL/Cr差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示KIM-1/Cr和孕前BMI均是子痫前期的独立危险因素[比值比(OR)分别为1.38、8.48,95%可信区间(CI)分别为1.04~1.83、1.41~50.82]。结论尿液KIM-1或许可作为妊娠中期子痫前期患者肾损伤的预测标志物。