大鼠N－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ融合蛋白的表达和纯化

γ谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）作为一个肿瘤标志酶在肝癌早期诊断上日益受到重视。酶活性升高是由于合成糖蛋白糖链的Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｎＴⅢ）活性升高所致。且其敏感度和特异性远远高于血清和组织中γ－ＧＴ活性测定，我们在从大鼠肾脏纯化制备出ＧｎＴⅢ纯酶（纯化１５３０００倍）的基础上，根据氨基酸序列分析结果设计寡核苷酸引物，用聚合酶链反应合成ＧｎＴⅢｃＤＮＡ，连接到含麦芽糖结合蛋白质（ＭＢＰ）ｃＤＮＡ的载体Ｍａ１５上，再转化到大肠杆菌Ｅ．ＣｏｌｉＬＸＩｂｌｕｅ中进行表达，扩增，经ＡｍｙｌｏｓｅＲｅｓｉｎ柱亲合层析，所得Ｍａ１５再经ＦａｃｔｏｒＸａ水解后，再次通过上述亲合层析柱，非结合部分即为所要的目的蛋白质。为制备ＧｎＴⅢ单克隆及多克隆抗体提供了充足的抗原来源。