杀鲑气单胞菌可视化重组酶聚合酶扩增检测技术的建立

本研究根据杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的铁载受体(fstA)基因的保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与侧向流试纸条(lateral flow strips,LFS)相结合的可视化快速检测杀鲑气单胞菌的方法。结果显示:本研究建立的基于RPA-LFS的杀鲑气单胞菌检测方法在37℃孵育25 min即可完成,特异性良好,与其他致病菌无交叉反应;灵敏度实验结果显示,该菌的纯培养物和人工污染的鲤鱼组织中的最低检测限均为单次反应1 CFU(colony forming unit)。本研究建立的基于RPA-LFS的杀鲑气单胞菌检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,检测结果可通过肉眼直接观察,操作简单,不依赖昂贵的仪器设备,适用于养殖业中杀鲑气单胞菌的现场检测。

民办院校男护士择业观现状调查

以民办院校的60名男护士作为调查对象,设计调查问卷进行分析,绝大多数男护士认为自己性别上的差异反倒是给自己增加了很多就业机会,但是也比较担心在就业以及今后生活过程中可能会受到社会偏见影响,少部分学生有今后放弃本专业的想法。应当最大程度上稳定目前男护士队伍,有效排除传统观念的束缚,对目前教育护理专业进行改革,不断促进护理专业发展。

金黄色葡萄球菌重组酶聚合酶扩增方法的建立

为建立基于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法,本研究根据该菌耐热核酸酶nuc基因的保守序列,设计特异性RPA扩增引物,并经反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果显示:建立的金黄色葡萄球菌快速检测方法可在37℃孵育35 min特异性检测金黄色葡萄球菌,而对其它病原的检测结果为阴性,特异性较强;对该菌的纯培养物和人工污染该菌的牛奶样品中的最低检出限均为10 cfu,敏感性高。利用该方法和国标培养法同时检测市场购买的牛奶样品和猪肉样品,结果显示二者检测结果一致。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、特异性强、灵敏度高且不依赖于昂贵的仪器设备,适用于基层实验室检测。

蒲公英和金银花对海洋病原菌的抑菌作用

蒲公英和金银花是两种常见的具有良好抗菌作用的中药,对多种细菌抗菌效果明显,但其对海洋病原菌的影响尚不清楚。评价了蒲公英和金银花对杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌和副溶血性弧菌3种常见海洋病原菌的抑菌活性,并初步分析了其抗菌活性成分。结果显示,蒲公英和金银花醇提物对杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌具有抗菌活性,最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)分别为6.25 mg/mL和12.5 mg/mL;进一步分析发现其主要抗菌活性成分为绿原酸、咖啡酸和异绿原酸等有机酸类物质。研究表明,蒲公英和金银花可用作抗海洋致病菌杀鲑气单胞菌和嗜水气单胞菌的抗菌药物。

限制性内切酶Mlu Ⅰ蛋白及其硒代衍生物的制备

【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组Mlu Ⅰ蛋白和硒代Mlu Ⅰ蛋白。对蛋白进行质谱检测、圆二色谱检测以及酶活检测,利用坐滴法进行结晶条件的筛选。【结果】构建了重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ并纯化获得达到结晶纯度的蛋白,通过质谱检测确定硒代Mlu Ⅰ蛋白中的8个甲硫氨酸全部被取代,结合酶活测试及圆二色谱检测确定了硒代对Mlu Ⅰ蛋白的活性、结构无明显影响。采用坐滴法进行初步的晶体生长研究,重组蛋白目前已在1种条件下获得针状晶体并进行初步衍射,获得分辨率在0.32 nm左右的衍射数据。【结论】Mlu Ⅰ蛋白及硒代Mlu Ⅰ蛋白纯化体系的构建和结晶条件的研究,可为下一步解析Mlu Ⅰ三维结构、作用机制的探讨及定向改造奠定基础。