EGCG通过Nrf2/HO-1信号通路延缓内皮细胞衰老的实验研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对延缓多柔比星(doxorubicin,Dox)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)衰老的作用及机制。方法 2023年4~12月于解放军总医院第二医学中心老年医学研究所体外培养HUVEC,分为对照组、Dox(2 μmol/L)组、Dox+EGCG(50 μmol/L)组、Dox+EGCG+ML385(Nrf2特异性抑制剂,2.5 μmol/L)组,采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色检测细胞衰老,活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色检测细胞内ROS含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒及丙二醛(MDA)含量检测试剂盒检测SOD活力和MDA含量,CCK-8实验检测细胞活力以及Western blot检测细胞内衰老相关蛋白(P21和P53)、核因子e2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白水平。结果 浓度(10,30,50)μmol/L的EGCG处理HUVEC 48 h不影响细胞活力,而浓度(70,100,300)μmol/L的EGCG预处理后细胞活力下降,因此选择50 μmol/L作为后续使用浓度。与对照组比较,Dox组β-gal阳性率和ROS水平显著增加(P<0.05),P21和P53蛋白表达增高(P<0.05),加入EGCG后β-gal阳性率以及ROS水平明显降低(P<0.05),SOD活性提高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05),同时P21和P53蛋白表达量降低(P<0.05),Nrf2和HO-1显著增加(P<0.05)。ML385组可逆转EGCG的细胞抗衰老效应,表现为Nrf2和HO-1表达量降低(P<0.05),而P21和P53蛋白表达量增加(P<0.05)。结论 EGCG可能通过激活Nrf2/HO-1通路延缓Dox诱导的HUVEC衰老效应。

ASM/Cer通路介导模拟失重大鼠股动脉平滑肌细胞增殖与凋亡改变及表型转换

目的探究模拟失重(simulated weightlessness,SW)大鼠股动脉(femoral artery,FA)酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)/神经酰胺(ceramide,Cer)通路改变及在FA平滑肌细胞增殖与凋亡改变及表型转换中的作用。方法采用后肢不荷重尾部悬吊(hindlimb unloaded tail suspended,HU)大鼠模拟微重力状态下血流动力学变化,通过蛋白免疫印迹分析、免疫组织化学染色等检测模拟失重大鼠ASM表达量、Cer含量以及血管平滑肌细胞增殖与凋亡及表型的改变。结果与对照(CON)组相比,HU大鼠FA血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达量,合成表型标记物(波形蛋白,Vimentin)/收缩表型标记物(α平滑肌肌动蛋白,α-smooth muscle actin,α-SMA)的比值以及ASM和Cer水平均显著升高(P<0.05)。此外,ASM抑制剂地昔帕明(desipramine,Dpm)孵育或盐酸多塞平(doxepin hydrochloride,DOX)灌胃后,HU大鼠FA中Bax的表达水平和Vimentin/α-SMA比值均显著降低(P<0.05)。Dpm孵育后,HU大鼠FA中Bcl-2表达呈上升趋势;DOX灌胃可显著增高HU组大鼠FA中Bcl-2的水平(P<0.05)。结论模拟失重可导致大鼠FA平滑肌细胞的增殖和凋亡水平均显著升高,并由收缩表型向合成表型转换,该重塑过程涉及ASM/Cer通路的过度激活。

老年高血压患者血压昼夜节律与血管僵硬度的相关性

目的 探讨老年原发性高血压住院患者血压昼夜节律与血管僵硬度的相关性。方法 回顾性分析2022年1月至2023年6月于中国人民解放军总医院住院的440例老年原发性高血压患者的临床资料。收集患者一般资料、用药史、生化检测指标、动态血压监测(ABPM)及肱-踝动脉脉搏波传导速度(baPWV)数据。将患者分为baPWV正常组(<1 400 cm/s,n=108)、baPWV低危组(1 400~<1 800 cm/s,n=200)和baPWV高危组(≥1 800 cm/s,n=132)。采用SPSS 27.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、单因素方差分析、Mann-Whitney U检验或χ^(2)检验进行组间比较。采用logistic回归分析导致老年高血压住院患者血管僵硬度增高的危险因素。构建血管老化风险预测模型,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价模型预测效力。结果 440例老年高血压患者,年龄(68.6±6.4)岁,其中男性235例(53.4%)。高危组患者年龄、24 h收缩压、日间收缩压、夜间收缩压、空腹血糖及糖化血红蛋白水平明显高于正常组和低危组;低危组和高危组24 h舒张压、日间舒张压、夜间舒张压、24 h收缩压标准差及日间收缩压标准差均显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。趋势卡方检验结果提示,血管僵硬度增高的患者反勺型血压模式比例明显增加,差异有统计学意义(χ^(2)=17.626,r=0.168;P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,年龄(OR=1.112,95%CI 1.070~1.156;P<0.001)、体质量指数(BMI)(OR=0.870,95%CI 0.797~0.950;P=0.002)、空腹血糖(OR=1.201,95%CI 1.071~1.347;P=0.002)、24 h平均收缩压(OR=0.574,95%CI 0.409~0.806;P=0.001)、日间平均收缩压(OR=1.599,95%CI 1.242~2.058;P<0.001)、夜间平均收缩压(OR=1.157,95%CI 1.052~1.273;P=0.003)及反勺型血压模式(OR=2.435,95%CI 1.306~4.540;P=0.005)是baPWV升高的独立危险因素。纳入上述七项指标构建血管老化风险预测模型,其受试者工作特征曲线下面积为0.804,模型预测效能良好。结论 反勺型血压模式与老年患者血管僵硬度增高直接相关。动态血压监测评估昼夜节律可有助于预测老年高血压患者的血管衰老。

内吗啡肽2和μ型阿片受体在正常猕猴脊髓背角和背根神经节中的分布

目的:观察内吗啡肽2(endomorphin-2,EM2)和μ型阿片受体(MOR)在猕猴脊髓腰段第4-6节段(L4-L6)背角及相应节段背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的形态学分布特点。方法:取1只成年猕猴的L4-L6段脊髓并留取相应节段的DRG置于固定液中。脊髓冷冻水平切片(30μm)平均分为2组,分别行Nissl染色和荧光免疫组织化学染色,再于光学显微镜下观察;DRG平均分为4组,分别行荧光免疫组织化学染色、免疫组织化学染色和对照组处理,再于光学显微镜下观察。结果:(1)在猕猴脊髓背角浅层,EM2和MOR阳性终末密集分布,且EM2和MOR大量共存;(2)在猕猴DRG中,EM2和MOR集中分布在中型(20μm<直径≤40μm)、小型神经元(直径≤20μm),且EM2和MOR大量共存。结论:本研究为进一步研究猕猴在内的灵长类动物中EM2和MOR的作用机制提供了形态学依据。

胰岛素受体在猕猴腰段脊髓及相应背根神经节中的分布

目的:观察胰岛素受体在猕猴脊髓腰段第4~6(L4~L6)节段及相应节段背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的形态学分布特点。方法:取1只成年猕猴的L4~L6节段脊髓并留取相应节段的DRG置于固定液中。脊髓冷冻水平切片(30μm)平均分为4组,分别行Nissl染色、荧光免疫组织化学染色、免疫组织化学染色和对照组处理,再于光学显微镜下观察;DRG平均分为2组,分别行免疫组织化学染色和对照组处理,再于光学显微镜下观察。结果:胰岛素受体分布于猕猴腰段脊髓L4~L6节段及相应节段的DRG中:(1)在腰段脊髓L4~L6节段,背角可见胰岛素受体阳性神经元胞体及终末,并大量分布于背角浅层(集中在第I、II层),腹角也可观察到散在胰岛素受体阳性神经元;(2)在L4~L6节段对应的DRG中,胰岛素受体阳性产物主要集中分布于中型(20μm<直径≤40μm)、小型(直径≤20μm)神经元。结论:本研究为进一步研究灵长类动物脊髓和DRG中胰岛素受体的功能提供形态学依据。

p38MAPK信号通路介导多种转移相关基因表达调控

目的:探究p38MAPK信号通路介导在鼻息肉发病机制中相关基因调控作用.方法:随机选取安徽省宿州市第三人民医院2014-06/2015-08收治的诊断为鼻息肉的35例患者,获取其组织标本,同时随机选取15例正常者获取其组织标本,使用化学S-P法对两组组织标本中p38MAPK、TNF-α、P-p38MAPK进行检测,观察两组活性表达程度.结果:正常者粘膜上皮、腺体、灰度、阳性面积中p38MAPK、TNF-α、P-p38MAPK表达均少于鼻息肉者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:鼻息肉患者中p38MAPK、TNF-α含量较多,我们推测p38MAPK信号通路通过介导TNF-α表达引发疾病,但由于数据有限,仍需进一步研究.

模拟失重大鼠胸主动脉和腹主动脉溶酶体相关分子表达改变

目的研究四周尾部悬吊模拟失重大鼠胸主动脉(thoracic aorta, TA)和腹主动脉(abdominal aorta, AA)溶酶体相关分子的基因和蛋白表达改变。方法采用4周尾部悬吊大鼠模拟失重对心血管系统的影响,通过Western blot技术、免疫组织化学染色和实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1),调控溶酶体合成的转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)、转录因子E3(transcription factor E3, TFE3)以及溶酶体相关基因包括LAMP1、酸性神经酰胺酶(N-acylsphingosine amidohydrolase 1, ASAH1)、液泡型ATP酶转运协助蛋白1(adenosine triphosphatase(ATPase)H+ transporting accessoryprotein 1, ATP6AP1)、液泡型ATP酶H亚基(AT Pase H+transporting V1 subunit H,ATP6V1H)以及粘脂蛋白1(mucolipin 1,MCOLN1)的蛋白表达、分布和m RNA水平变化。结果 Western blot显示,与对照(control, CTR)组相比,悬吊(hindlimb unloading tail suspension, HU)组大鼠TA和AA的LAMP1蛋白表达均显著降低(P<0.05)。免疫组化则显示LAMP1主要分布于TA和AA的内膜和中膜;CTR大鼠TA内膜、中膜的LAMP1蛋白表达均显著高于AA(P<0.05);与CTR组相比,HU组大鼠TA、AA内膜LAMP1表达无明显变化,但在TA中膜呈现均匀的表达降低,而在AA中膜则呈现不均匀的表达降低(P<0.05);qRT-PCR显示,与CTR组比较,溶酶体相关基因表达在HU组大鼠TA显著增加(P<0.05),但在AA则显著降低(P<0.05)。转录因子TFEB和TFE3呈现与溶酶体相关基因相同变化,蛋白表达在HU组大鼠TA和AA中均显著降低(P<0.05),但基因表达在TA增加,在AA降低(P<0.05)。结论 HU组大鼠TA和AA溶酶体相关蛋白表达均降低,但基因转录及转录因子表达呈现部位特异性改变,可能参与动脉重塑过程。

模拟失重大鼠颈总动脉平滑肌细胞溶酶体改变

目的研究尾部悬吊模拟失重大鼠颈总动脉(carotid aorta,CA)平滑肌细胞溶酶体数量、分布及相关分子的基因和蛋白表达改变。方法采用4周尾部悬吊大鼠模拟失重对心血管系统的影响,通过电镜、Western blot技术、免疫组织化学染色和实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测CA平滑肌细胞溶酶体数量和分布、溶酶体相关膜蛋白(lysosomal associated membrane protein,LAMP)1,驱动蛋白kinesin-1,转录因子(transcription factor,TF)EB、TFE3以及溶酶体相关基因的蛋白表达、分布和mRNA水平变化。结果电镜结果显示,与对照(control,CTR)组相比,悬吊(hindlimb unloading tail suspension,HU)组大鼠CA平滑肌细胞溶酶体数量明显减少;Western blot和免疫组化则显示CA的LAMP1蛋白表达显著降低(P<0.05),且主要为中膜改变(P<0.05),内膜无明显变化;kinesin-1蛋白表达显著增加(P<0.05)。qRT-PCR显示,溶酶体相关基因表达显著增加(P<0.05)。与CTR相比,TFEB和TFE3蛋白表达在HU大鼠CA中显著降低(P<0.05),基因表达显著增加(P<0.05)。结论HU大鼠CA平滑肌细胞溶酶体数量减少,相关蛋白表达降低,但基因转录水平增加,可能参与动脉重塑改变。

鞘酯调控血管稳态及其在失重致动脉重塑中的作用

鞘脂是细胞膜的组成成分,同时也作为信号分子,在细胞的凋亡、自噬、氧化应激、炎性反应、增殖与迁移中发挥重要作用,鞘脂分子参与多种重要心血管疾病的发生发展过程。本综述从鞘酯代谢的特点、神经酰胺与1-磷酸鞘氨醇在信号转导以及血管生理和病理调控中的作用等方面阐述鞘酯代谢与血管稳态调节的关系。同时,对失重/模拟失重后动脉的部位特异性结构与功能重塑,以及鞘酯代谢在这一变化过程中的作用作以介绍。

高龄人群动脉僵硬度评估及血管硬化风险预测的临床研究

目的分析高龄人群(≥80岁)动脉僵硬度升高的相关影响因素,建立高龄人群血管硬化风险列线图模型,为高龄人群血管疾病防控提供依据。方法本研究为回顾性横断面研究。纳入2022年4—8月于解放军总医院门诊体检的高龄人群,收集人口学、生化指标及药物治疗等临床资料,同期检测肱踝动脉脉搏波传导速度(baPWV)并分为2组,baPWV≤1800 cm/s为对照组,baPWV>1800 cm/s为血管硬化组。通过单因素分析和多因素logistic回归分析动脉僵硬度升高的相关影响因素,采用R软件构建其列线图模型,通过受试者工作特征曲线(ROC)评价列线图模型的预测效果。结果525名高龄人群中,年龄87.0(82.0,92.0)岁,其中男性504名(96.0%)。对照组82名,血管硬化组443例。对照组的baPWV、年龄、收缩压、平均动脉压和舒张压水平低于血管硬化组(P均<0.05)。多因素logistic回归分析显示,高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶和淀粉酶是动脉僵硬度升高的保护因素;碱性磷酸酶和肌酐是其危险因素(P均<0.05)。年龄、平均动脉压和上述5项实验室指标联合的列线图模型评分提示平均动脉压和血肌酐水平与血管硬化呈强相关。ROC曲线提示列线图模型预测效果较好。结论年龄、平均动脉压、高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、淀粉酶和肌酐是动脉僵硬度升高的独立影响因素。本研究构建的联合预测模型可为临床个体化预测高龄人群血管硬化风险提供参考。