一株H6N6亚型野鸟禽流感病毒全基因组序列分析以及对小鼠的感染性研究

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为^(339)PQIETR↓GL^(346),仅有1个碱性氨基酸,具有低致病性AIV的分子特征。此外,分离株表面基因HA、NA均与一株H6N6亚型猪流感病毒A/swine/Guangdong/K6/2010高度同源,而内部基因均与H6N6亚型AIV A/pigeon/Guangxi/161/2014(H6N6)高度同源,提示该分离株基因来源的多样性。小鼠的感染性试验结果显示:该病毒可在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,病毒滴度分别为5.33 log_(10) EID_(50)/mL、4.50 log10EID50/m L,提示其具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究结果为H6亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。

一株H3N7亚型禽流感病毒全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究

H3亚型流感病毒是威胁公共卫生安全以及动物生命安全的主要流感病毒亚型之一。为了解H3N7亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2015年浙江省分离到的一株H3N7亚型禽流感病毒(AIV A/duck/Zhejiang/S1075/2015(H3N7)(简称DK/ZJ/S1075/2015)进行了遗传演化分析、抗原性分析以及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该病毒株的聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因、核蛋白(NP)基因、神经氨酸酶(NA)基因、非结构蛋白(NS)基因分别与H4N2、H7N3、H10N7、H4N6亚型流感病毒有着密切的关系,表明该株病毒的基因来源具有明显的遗传多样性。分离株的抗原性分析结果显示该病毒株与本实验室分离的多株H3亚型AIV存在16倍以上的抗原性差异,表明其发生了明显的抗原漂移。小鼠感染性实验结果表明,分离株无需提前适应即可在小鼠肺脏和鼻甲中复制,但小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体重变化不明显,呈现低致病性。本研究结果为H3亚型流感病毒的全面监测和综合防控提供了数据支持。

一株鸭源H10N5亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

为了解湖北省活禽市场鸭源H10N5亚型禽流感病毒(AIV) A/duck/Hu B/S1254/2014 (H10N5)株的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序,并以BABL/c小鼠为动物模型评价其对哺乳动物的感染性。序列分析结果显示:该病毒HA蛋白的裂解位点为334PELMQGR↓GLF343,符合低致病性AIV的特征。其表面基因HA、NA以及内部基因PB2和PA与1株江西野鸟源病毒株A/migratory duck/Jiangxi/30246/2013 (H10N5)高度同源,但其它内部基因节段PB1、NP、M和NS则来源于多个亚型的AIV。对小鼠的感染性实验结果显示,该病毒不需要提前适应就能够在小鼠的鼻甲和肺脏中有效复制,病毒滴度分别为4.08 log10 EID50/m L,5.0 log10 EID50/mL,病毒对小鼠呈低致病性,小鼠体重无显著的下降趋势,在感染期间小鼠未出现明显临床症状。本研究为了解H10N5亚型AIV分子进化关系,评估其对哺乳动物的感染风险提供了数据支持。

一株低致病力H5N3亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

为了解H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对从我国广西鸭体内分离到的一株低致病力H5N3亚型AIV DK/GX/S11453/2019(H5N3)进行了全基因组序列分析、抗原性分析、对小鼠的感染性以及受体结合特性分析。全基因组序列分析显示,该病毒的基因具有明显的野鸟源性,该病毒除HA与NA来源相同外,其余片段均来源不同,具有明显的遗传多样性。HA蛋白的裂解位点仅含有一个碱性氨基酸,符合低致病力AIV的分子特征。抗原性分析结果显示该病毒分离株与近几年国内使用的各疫苗株的抗原差异性较大。小鼠感染性试验结果显示,该病毒对小鼠呈现低致病力,不引起小鼠明显的体质量下降,但可以在小鼠的肺脏和鼻甲内有效的复制。受体结合特性分析结果显示,该病毒具有同时结合α-2,3和α-2,6受体的能力,存在一定感染哺乳动物的风险。本研究通过对该H5N3亚型AIV部分生物学特性的分析,为H5N3亚型禽流感的防控提供理论依据。

一株鸭源H6N6亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究

为了解H6N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年在广东活禽交易市场分离的一株鸭源AIV DK/GD/S1182/2015(H6N6)进行了全基因组测序、遗传演化分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示,该病毒的HA蛋白裂解位点处仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白的222V和228S,可以增强病毒对α-2,6唾液酸受体的结合能力。NA蛋白颈部有11个氨基酸的缺失,这将会影响NA的神经氨酸酶活性;该病毒可能是2010年广东H6N6猪流感病毒与2014年广西AIV重组产生。小鼠感染性试验表明,该分离株不需要预先适应就能够在小鼠的肺脏内高效复制,提示该分离株具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究对H6亚型AIV监测和相关生物学特性研究具有一定的指导作用。

N9亚型禽流感病毒NA蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定

为了表达具有反应原性的N9亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,本研究将DK/HuN/S11670/2015(H11N9)株NA基因克隆至杆状病毒转移载体中,构建重组转移载体pFastBacHT A-N9并经PCR和测序鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,经PCR鉴定获得了重组杆粒rBacmid-N9,转染昆虫细胞sf21获得重组杆状病毒rBaculovirus-N9。将获得的P3代重组杆状病毒感染sf21细胞后经间接免疫荧光试验(IFA)检测N9蛋白的表达和定位,采用western blot鉴定N9蛋白的反应原性。将杆状病毒表达的重组N9蛋白包被ELISA酶标板,初步建立间接ELISA方法,利用该方法分别检测N9蛋白抗体阳性鸡血清和阴性鸡血清。IFA和western blot结果显示,N9蛋白正确表达且主要锚定在细胞膜上,表达的N9蛋白可以与鼠源N9蛋白单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA方法结果显示,初步建立的间接ELISA方法可以检测鸡血清中的N9抗体。上述结果表明,经杆状病毒—昆虫细胞表达的N9蛋白具有良好的反应原性,为N9 AIV检测试剂盒的研发奠定了基础。

一株H4N8亚型禽流感病毒全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究

H4亚型禽流感病毒(AIV)不仅可以感染禽类,还可以跨物种感染哺乳动物,其潜在危害不可忽视。为了解本实验室2018年从重庆活禽市场分离到的一株鸭源H4N8亚型AIV[A/duck/Chongqing/S1238/2018(H4N8)]的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传进化分析及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示,血凝素(HA)蛋白裂解位点处仅有一个碱性氨基酸,表明其具有低致病性AIV的分子特征,神经氨酸酶(NA)基因茎部无缺失。遗传演化分析结果显示,NA基因及非结构蛋白(NS)基因与A/Muscovy duck/Vietnam/LBM240/2012(H3N8)的同源关系密切,其余节段的来源均不同,表明该病毒来源广泛,具有遗传多样性。BALB/c小鼠的感染性试验结果显示,该病毒可以在小鼠的鼻甲和肺脏中有效复制,表明其具有感染哺乳动物的风险。本研究为H4亚型AIV的遗传进化特征分析提供参考依据。

一株H5N3亚型禽流感病毒全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

为了解H5N3亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2017年浙江省分离到的一株H5N3亚型禽流感病毒(AIV)[DK/ZJ/S1368/2017(H5N3)]进行了遗传演化分析及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该株病毒的HA蛋白裂解位点处仅含一个碱性氨基酸,属于低致病性AIV。同时,该病毒的血凝素(HA)基因与H5N7亚型流感病毒亲缘关系较近;聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因和核蛋白(NP)基因与H10N7亚型流感病毒亲缘关系较近;碱性聚合酶蛋白1(PB1)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近;酸性聚合酶蛋白(PA)基因与H6N2亚型流感病毒亲缘关系较近;神经氨酸酶(NA)基因与H10N3亚型流感病毒亲缘关系较近;基质蛋白(M)基因与H3N8亚型流感病毒亲缘关系较近;非结构蛋白(NS)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近。表明其基因来源复杂。小鼠感染实验结果显示,该分离株无需提前适应即可以在小鼠肺脏和鼻甲中复制,小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体质量变化不明显,表明该病毒对小鼠呈低致病性。本研究通过对该H5N3亚型AIV的生物学特性的分析,发现该病毒基因来源复杂,无需提前适应就可以在小鼠体内复制,具有感染哺乳动物的潜在威胁,提示应当持续加强对H5N3亚型AIV的监测和相关生物学特性的研究工作。

运用系统思维做好商业银行案防风控工作

习近平总书记非常重视思维方法,多次强调思维方法的重要性,比如谋全局的战略思维、知大势的历史思维、析流变的辩证思维、激活力的创新思维、求公正的法治思维、定边界的底线思维等。商业银行经营管理过程中的各项工作、各个要素相互交织、协同运作、动态平衡,案防风控工作因此成为一项复杂的系统工程,必须坚持和运用系统思维,进行科学谋划、整体推进。

“四策”抓好员工行为排查

一是定期开展重点关注人员线索核查。设定重点关注人员，包括长期不在岗人员、内病退人员、曾经与客户发生过非正常资金往来人员等，实行一对一监测，定期查询、核实卡交易信息。二是坚持开展家访谈心活动。及时深入了解员工的家庭、生活情况，为员工解决力所能及的困难。三是定期走访公安机关，加强沟通合作。

一株野鸟源H7N7亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

为了解H7N7亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2019年分离自我国云南省野鸟粪便中的一株低致病性H7N7 AIV WB/YN/SY051/2019(H7N7)株进行全基因组序列测定、遗传演化分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示,该株病毒HA裂解位点基序为^(333)PEIPKGR↓GLF^(342),裂解位点处仅存在一个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒(LPAIV)的分子特征。遗传演化分析结果显示,除HA、NA基因与韩国野鸟H7N7病毒高度同源外,该株病毒内部基因PB2、NP、NS、M基因分别与野鸟源H1N1、H1N2、H9N7和H11N9AIV同源性较高,内部基因PB1和PA与野鸟源H5N3 AIV同源性较高,具有明显的遗传多样性。对BALB/c小鼠的感染性试验结果显示,该病毒不需要提前适应就能够在小鼠的肺脏和鼻甲内有效复制,并导致感染小鼠体质量轻微下降。表明野鸟中的H5和H7亚型LPAIV在向家禽传播的过程中具有突变为高致病性AIV的风险。本研究通过对一株野鸟源H7N7亚型AIV部分生物学特性的分析,为H7N7禽流感疫情的预警和综合防控提供了实验数据支持。

一株新型重配H9N8亚型禽流感病毒的分子进化分析及其对小鼠的感染性研究

2020年5月,本实验室在对禽流感常规监测时从广西一鸭场分离到一株H9N8亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/duck/Guangxi/S10590/2020(H9N8)(简称DK/GX/S10590/2020)。为了解该H9N8分离株的生物学特性和公共卫生风险,本研究对其进行了全基因组序列及遗传演化分析,并采用贝叶斯端点定年法进行进化分析;进一步以小鼠为动物模型,评价该AIV对哺乳动物的感染性。全基因组序列经BLAST比对,结果显示,该病毒株与H1N1、H3N8、H4N8、H6N1、H7N3、H7N7和H9N2等多种亚型野鸟源低致病性AIV(LPAIV)具有较高同源性,提示其可能是由多种LPAIV在病毒传播过程中经过复杂重配而形成。遗传演化及贝叶斯进化分析结果显示,该病毒可能在2018年末重配产生,后由东亚-澳大利西亚迁徙线上的野鸟引入广西鸭群。特殊氨基酸位点分析结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点为PAASNR/GL,仅含有一个碱性氨基酸,且其HA蛋白具有T分子特征,进一步表明该AIV为LPAIV,且具有结合人型唾液酸受体的潜在能力;此外,在内部基因表达蛋白中发现了PB1蛋白的LP、PB1-F2蛋白的LS、PA蛋白的KE和VD、NP蛋白的VM和KQ、以及M1蛋白的HY和AV等多个可增强H9亚型AIV对鸡或哺乳动物组织嗜性的突变,表明该病毒株具有潜在感染鸡和哺乳动物的风险。小鼠感染性试验结果显示,该病毒仅在小鼠鼻甲中低水平复制,对小鼠呈低致病力。本研究为H9亚型AIV的监测和流行病学评估提供了数据支持。

一株鸽子源的H4N8亚型禽流感病毒的部分生物学特性

目的实验室2017年对我国四川省遂宁船山区蜀中食品城进行流行病学调查时从鸽子体内分离鉴定出的一株H4N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/Pigeon/Sichuan/S1185/2017(H4N8)(缩写为PG/SC/S1185/2017)。方法为了解此株从鸽子体内分离到的H4N8亚型AIV的遗传进化特点,对此株病毒进行了全基因组的测序并画出基因进化树来探索其毒株来源,还探究了该株病毒对哺乳动物的感染能力。结果遗传演化分析数据表明,这株病毒株的各个基因节段分别来自于不同亚型流感病毒,基因来源复杂,是一株重组病毒,其具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果表明,该毒株仅能够在小鼠肺脏和鼻甲中产生微弱复制,在小鼠感染病毒3d后并未出现明显临床症状,小鼠活力没有明显的下降,与对照组相比体重变化其实基本相同。结论为今后的流行病学调查中对H4亚型流感病毒的全面监测和综合预防防控提供了数据支持。